Name: GMP 확장 가능한 장치에서 CAR-T 및 사이토카인 유도 킬러 세포의 효율적이고 빠른 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-05T12:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: 학습하세요 G-Rex 장치를 활용한 CAR-T 및 CIK 세포의 GMP 확장 가능한 배양 프로토콜. 고밀도 배양과 최소 사용자 개입으로 임상 적용 가능한 세포 치료 제품을 효율적으로 생산하는 방법을 탐색하세요.

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<ol><li>Rosenberg, S. A., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+cell+transfer+as+personalized+immunotherapy+for+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Adoptive cell transfer as personalized immunotherapy for human cancer.</a> Science. 348 (6230), 62-68 (2015).</li>
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<li>Palmerini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+serum-free+protocol+for+the+ex+vivo+expansion+of+cytokine-induced+killer+cells+using+gas-permeable+static+culture+flasks%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">A serum-free protocol for the ex vivo expansion of cytokine-induced killer cells using gas-permeable static culture flasks.</a> Cytotherapy. 22 (9), 511-518 (2020).</li>
<li>Pietà, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovative+therapeutic+strategy+for+B-cell+malignancies+that+combines+obinutuzumab+and+cytokine-induced+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Innovative therapeutic strategy for B-cell malignancies that combines obinutuzumab and cytokine-induced killer cells.</a> J Immunother Cancer. 9, e002475(2021).</li>
<li>Pievani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-functional+capability+of+CD3%2BCD56%2B+CIK+cells%2C+a+T-cell+subset+that+acquires+NK+function+and+retains+TCR-mediated+specific+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Dual-functional capability of CD3+CD56+ CIK cells, a T-cell subset that acquires NK function and retains TCR-mediated specific cytotoxicity.</a> Blood. 118 (12), 3301-3310 (2011).</li>
<li>Cappuzzello, E., Tosi, A., Zanovello, P., Sommaggio, R., Rosato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retargeting+cytokine-induced+killer+cell+activity+by+CD16+engagement+with+clinical-grade+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22OncoImmunology%22%5BJournal%5D)">Retargeting cytokine-induced killer cell activity by CD16 engagement with clinical-grade antibodies.</a> OncoImmunology. 5, e1199311(2016).</li>
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<li>Eberhardt, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+serum-free+media+on+the+expansion+and+functionality+of+CD19.CAR+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of serum-free media on the expansion and functionality of CD19.CAR T-cells.</a> Int J Mol Med. 52, 58(2023).</li>
<li>Cadiñanos-Garai, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-dimensional+temporal+mapping+of+CAR+T+cells+reveals+phenotypic+and+functional+remodeling+during+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">High-dimensional temporal mapping of CAR T cells reveals phenotypic and functional remodeling during manufacturing.</a> Mol Ther. 33, 2291-2309 (2025).</li>
<li>Wang, X., Byrne, M. E., Liu, C., Ma, M. T., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scalable+process+development+of+NK+and+CAR-NK+expansion+in+a+closed+bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Scalable process development of NK and CAR-NK expansion in a closed bioreactor.</a> Front Immunol. 15, 1412378(2024).</li>
<li>Noldner, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+lung+cancer+tumor-infiltrating+lymphocyte+%28TIL%29+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Improving lung cancer tumor-infiltrating lymphocyte (TIL) manufacturing.</a> Cytotherapy. 27, 1240-1250 (2025).</li>
<li>Bandeira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+processing+of+lentiviral+vectors%3A+Releasing+bottlenecks%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther+Methods%22%5BJournal%5D)">Downstream processing of lentiviral vectors: Releasing bottlenecks.</a> Hum Gene Ther Methods. 23, 255-263 (2012).</li>
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채택 세포 치료(ACT)는 암 치료를 위한 첨단 치료의 중요한 기둥이 되었습니다. 이 접근법은 항종양 효능을 달성하기 위해 체외 확장 세포 제품을 투여하는 데 기반합니다. 현재까지 ACT에서는 항원 비특이적 접근법(예: 자연 살인자(NK)2, 사이토카인 유도 살인자(CIK)3,4, 자연 살인 T(NKT)5, γδ T 세포6부터, 종양 침윤 림프구(TILs)7 및 키메라 항원 수용체(CAR)1과 같은 조작된 세포 기반 치료제에 이르기까지 다양한 세포 유형이 사용되었습니다. 8 및 T 세포 수용체(TCR) 세포 9,10.
CAR-T 세포는 특정 분자 표적을 인식하도록 설계된 합성 면역 수용체를 발현하기 위해 외부 바이러스 전 도로 생성된 유전자 변형 T 세포입니다. CAR 구조는 항원 특이적 단일 사슬 가변 단편(scFv) 항체와 TCRζ 사슬 및 공공자극 분자를 포함한 세포 내 신호 도메인으로 구성됩니다. 항원 접동 시 세포 내 도메인은 T 세포 증식과 항종양 활성을 촉진하는 활성화 신호를 전달합니다11.
CIK 세포는 말초혈 단핵세포(PBMC)나 탯줄혈(UCB)으로부터 체외 확장(exvi expansion) 중 CD56을 발현하는 활성화된 T 림프구 집단입니다12. 이 확장은 인터페론-γ(IFN-γ), 항-CD3 단클론 항체, 인터루킨-2(IL-2)로 자극한 후 14일간 IL-2 배양을 포함합니다. CIK 세포는 기능적으로 NK와 T 세포와 유사하며, 주요 조직적합성 복합체(MHC) 독립적 기전과 의존적 기전 13,14,15,16을 통해 항종양 활성을 발휘합니다. 이러한 특성은 CIK 세포가 동종 및 자가 치료 환경에서 이식편 대 숙주 질환(GvHD) 위험이 최소화된 상태로 사용될 수 있게 합니다17.
임상 실무에서는 CAR-T 및 CIK 세포 치료법 모두 다수의 세포 투여가 필요합니다. CAR-T 세포는 환자18명당 5천만에서 2억 회분의 주입을 받습니다. 마찬가지로, CIK 세포는 보통 한 번에 최대 100억 개의 세포 용량으로 투여되며, 환자들은 치료 프로토콜에 따라 여러 차례 주입을 받는 경우가 많습니다19. 플라스크나 플레이트를 이용한 전통적인 세포 배양 방법은 비효율적이고 시간이 많이 소요되며 자주 전달이 필요해 대규모 증식이 불가능하고 오염 위험이 증가합니다. 백 배양이나 바이오리액터를 이용한 자동화 또는 반자동화 시스템은 대규모 확장이 가능하지만, 전단 응력, 밀도 조절, 빈번한 매체 관류 필요성, 그리고 한 번에 한 배치씩 취급해야 하는 제한이 있어 학계 및 산업 현장 모두에서 높은 비용이 발생합니다. 이러한 어려운 상황에서 대안으로는 가스 투과성 급속 팽창(G-Rex) 장치가 있는데, 이는 유정 바닥에 실리콘 막을 사용하는 정적 배양법으로, 효율적인 산소 교환과 용기 높이 증가를 보장하여 대용량 중용량을 가능하게 합니다. 따라서 이 시스템은 배지 대체나 밀도 조절 없이도 세포 성장을 지원합니다22,23. G-Rex-M 시스템은 최대 5000 mL까지 확장성을 입증했으며, 자동 수확 시스템과 호환되어 학술 환경에서 임상 환경에서 쉽게 전환할 수 있는 오염 없는 폐쇄형 배양 플랫폼을 제공하여 첨단 치료용 의약품(ATMP) 개발에 기여할 수 있습니다24.
이 절차에서 우리는 G-Rex 장치의 장점과 특성을 활용하여 CAR-T 세포와 CIK 세포의 확장 프로토콜을 최적화했습니다. 우리는 두 세포 유형 모두 효율적으로 증식되고 확장될 수 있으며, 서로 다른 배양 시스템에서 일관된 표현형과 기능 프로필을 유지할 수 있음을 입증했습니다. CIK와 CAR-T 셀 모두에 대한 확장 프로토콜의 개략 개요는 그림 1에 나와 있습니다.
<img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69369/69369fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
그림 1: G-24 또는 G-6M 배양 장치를 이용한 CAR-T 및 CIK 세포 확장 프로토콜 개요. CAR-T 및 CIK 세포는 0일째부터 분리된 PBMC에서 증식됩니다. CAR-T 세포 증식을 위해 PBMC는 1일째에 항-CD3 및 항-CD28 항체로 자극하고, 2일째에는 유전자 조작 검사를 받으며, 이후 3-4일마다 hIL-7과 hIL-15 보충제로 배양하고, 기능적 분석은 9일째에 최종 수확합니다. G-6M 형식에서는 사이토카인 보충이 2일째로 제한되며, 배양 기간 내내 추가 사이토카인 섭취는 필요하지 않습니다. CIK 세포 증식을 위해 PBMC는 1일째에 rhIFN-γ, 2일째에는 항CD3 항체와 rhIL-2로 자극받으며, 이 두 물질은 3-4일마다 투여됩니다. G-24에서는 사이토카인 보조제와 병행하여 중간 변화가 필요합니다. CIK 세포는 14일째에 하류 기능 분석(functional assay)을 위해 채취됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69369/69369fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>

<table><tbody><tr><td>브릴리언트 스테인 버퍼</td><td>BD 생명과학</td><td>566349</td><td></td></tr><tr><td>CD28 항체, 항인간</td><td>밀텐이 바이오텍</td><td>130-093-375</td><td>클론 15E8</td></tr><tr><td>CD3 항체, 항인간</td><td>밀텐이 바이오텍</td><td>130-093-387</td><td>복제 OKT3</td></tr><tr><td>CD3 BV510</td><td>BD 생명과학</td><td>740147</td><td>클론 UCHT1</td></tr><tr><td>CD314 장갑 장갑차량 (NKG2D)</td><td>바이오레전드</td><td>320808</td><td>클론 1D11</td></tr><tr><td>CD4 BV650</td><td>BD 생명과학</td><td>563875</td><td>복제 SK3</td></tr><tr><td>CD45RA PerCP-Cy5.5</td><td>BD 생명과학</td><td>563429</td><td>클론 HI100</td></tr><tr><td>CD56 PE</td><td>바이오레전드</td><td>318306</td><td>클론 HCD56</td></tr><tr><td>CD62L FITC</td><td>BD 생명과학</td><td>555543</td><td>클론 FREG-56</td></tr><tr><td>CD8 BV450</td><td>BD 생명과학</td><td>562428</td><td>복제 RPA-T8</td></tr><tr><td>CellTrace 바이올렛 세포 증식 키트</td><td>서모피셔 과학</td><td>C34557</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드 (DMSO)</td><td>서모피셔 과학</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s 인산염 완충 식염수 (D-PBS)</td><td>시그마 올드리치</td><td>D5652</td><td></td></tr><tr><td>E-플레이트 16</td><td>애질런트</td><td>5469813001</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청(FBS), 가치</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>수리 가능한 생존 가능성 스테인 780 (FVS780)</td><td>BD 생명과학</td><td>565388</td><td></td></tr><tr><td>G-렉스 24 웰 플레이트 &nbsp;</td><td>윌슨 울프</td><td>80192M</td><td></td></tr><tr><td>G-Rex 6M 웰 플레이트 &nbsp;</td><td>윌슨 울프</td><td>80660M</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 완충액</td><td>론자</td><td>ECM0180D</td><td></td></tr><tr><td>그의 항체</td><td>밀텐이 바이오텍</td><td>130-120-718</td><td></td></tr><tr><td>인간 알부민 20%</td><td>CSL 베링</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인간 IL-15 재조합 단백질</td><td>페프로텍</td><td>200-15</td><td></td></tr><tr><td>인간 IL-7 재조합 단백질</td><td>페프로텍</td><td>200-07</td><td></td></tr><tr><td>LSRFortessa X-20</td><td>BD 생명과학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>림프홉렙</td><td>스템셀 테크놀로지</td><td>18060</td><td></td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td>유방암 세포주 &nbsp;</td></tr><tr><td>페니실린과 스트렙토마이신</td><td>론자</td><td>ECB3001D</td><td></td></tr><tr><td>생리학적 용액 (0.9% 염화나트륨)</td><td>모니코</td><td></td><td></td></tr><tr><td>프로타민 황산염</td><td>시그마 올드리치</td><td>P3369</td><td></td></tr><tr><td>라지</td><td>ATCC</td><td>CCL-86</td><td>버킷 림프종 세포주&nbsp;</td></tr><tr><td>재조합 인간 IFN-감마</td><td>R& D 시스템즈</td><td>285-IF-100/CF</td><td></td></tr><tr><td>재조합 IL-2 (프로류킨)</td><td>노바티스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>rhCD19-그의</td><td>인비트로젠</td><td>A42607</td><td></td></tr><tr><td>로즈웰 파크 기념 연구소 1640 (RPMI-1640)</td><td>유로클론</td><td>ECB9006L</td><td></td></tr><tr><td>안정된 L-글루타민</td><td>론자</td><td>ECB3004D</td><td></td></tr><tr><td>트라이판-블루 솔루션</td><td>시그마 올드리치</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence 실시간 셀 분석</td><td>애질런트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>X-VIVO 15 무혈청 조혈 배지</td><td>론자</td><td>02-053Q</td><td></td></tr></tbody></table>

gmp 확장 가능한 장치에서 car-t 및 사이토카인 유도 킬러 세포의 효율적이고 빠른 생성

Efficient and Rapid Generation of CAR-T and Cytokine-Induced Killer Cells in GMP-scalable Devices

여기서 설명한 프로토콜은 분리된 PBMC에서 추출한 CAR-T 및 CIK 세포에서 이펙터 셀을 체외 증식과 엔지니어링하는 데 효율적이고 견고한 워크플로우를 제공합니다. 이 방법은 최소한의 세포 조작이 필요하며, G-Rex 장치의 기체 교환 능력을 활용하여 기존 정적 배양 시스템에 비해 우수한 영양소 가용성과 산소 공급을 제공합니다23,24. 이 프로토콜의 주요 장점은 전임상 연구에 적합한 소규모 24웰 장치(G-24)에서 비례적 확장 외에는 프로토콜에 변경 없이도 번역 또는 임상 제조 요구에 부합하는 대형 6M 장치(G-6M)까지 확장성이 본질적으로 가능하다는 점입니다.
이 프로토콜을 사용하여 CAR-T 세포와 CIK 세포가 건강한 기증자 PBMC에서 G-24 및 G-6M 포맷으로 병행하여 성공적으로 증식되었으며, 이는 2-4절에 설명되어 있습니다. 배양 기간 말에 두 세포 유형 모두 높은 접힘 확장과 생존력을 보였으며, 두 장치 형식 간 증식량도 비슷하게 나타났습니다(그림 2, 보조 표 1, 보충표 2). 이는 프로토콜이 서로 다른 배양 규모에서 재현성을 입증했습니다.
배양 장치의 확장성을 검증하기 위해 효과기 세포는 표현형과 기능적으로 추가로 특성화되었습니다. CD19 CAR-T 세포에 대해서는 CAR 발현을 정량화하고 CD4+ 및 CD8+ 하위 집합을 평가했으며, CD19 CAR+ CD8+ T 세포가 우세함을 확인했습니다(그림 3A-B, 보충표 1). CIK 세포의 경우, T(CD3+CD56-), NK(CD3-CD56+), CIK(CD3+CD56+) 집단의 빈도(그림 3D)와 활성화 수용체 NKG2D의 발현(그림 3E, 보충표 2)을 평가하였습니다. 더욱이, CAR-T와 CIK 세포 모두에서 G-24와 G-6M 배양 포맷 간 특정 집단 표지자의 전반적으로 유사한 표현형과 발현을 관찰했습니다. CD19 CAR-T 및 CIK 세포 제품의 분화 상태를 CD62L과 CD45RA 염색을 통해 분석되었으며(그림 3C-F, 보충표 1, 보충표 2), G-24 및 G-6M 포맷 배양 세포 간 유사한 기억 및 효과기 표현형이 발견되었습니다. 이 결과는 과정을 확장하는 것이 확장된 효과 세포 집단의 표현형 무결성이나 분화 상태를 훼손하지 않는다는 것을 보여줍니다.
마지막으로, 기능적 효능을 평가하기 위해 표적 특이적 세포독성 검사를 사용했습니다. 두 기기 내에서 증식된 CD19 CAR-T 및 CIK 세포 모두 강력한 세포 분해 활성을 보여, 척도에 걸쳐 기능적 특성이 유지됨을 확인했습니다(그림 4). 전반적으로 이러한 결과는 확장된 제품들이 전임상 모델과 잠재적으로 임상 시험에서의 후속 응용에 적합함을 뒷받침합니다.
<img alt="그림 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69369/69369fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
그림 2: CD19 CAR-T 및 CIK 세포의 증식 및 생존 가능성. G-24 및 G-6M 플레이트에서 PBMC에서 증식된 CAR-T 세포(n = 5)와 CIK 세포(n = 6)를 각각 증식 9일차와 14일째에 수집하여 세포 수와 생존 가능한 세포의 (A-C) 주름 증가 및 (B-D) 비율 평가를 수행하였습니다. 히스토그램은 표준편차(SD)± 평균 표현을 나타내며, 점은 단일 기증자를 나타냅니다(개별 값은 보충표 1 과 보충표 2 참조). 데이터는 양측 다중 쌍 t-검정(A-C) 또는 다중 양측 Wilcoxon 매칭 쌍 순위 검정(B-D)으로 분석되었으며, 다중 비교에 대해서는 Holm-Sidak 보정(*p &lt; 0.05)을 적용하였습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69369/69369fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<img alt="그림 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69369/69369fig3v2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
그림 3: G-24 및 G-6M 장치에서 확장된 CD19 CAR-T 및 CIK 세포의 표현형 평가. CD19 CAR-T 세포(n = 5)에서의 CAR 분자 발현은 유세포분석으로 분석되어 (A) G-24 및 G-6M 확장 프로토콜에서의 전도 효율, 그리고 (B) CD4+/CD8+ 및 (C) CD3+CAR+ 하위 집합에서 순진/기억 하위 집단의 발현을 평가하였습니다. 유세포검사를 통해 유세포분석법으로 CIK 세포(CD3+CD56+), NK(CD3-CD56+), T(CD3+CD56-)의 비율과 CD3+CD56+ 하위 집합(G-24 n=5, G-6M n=6)의 발현을 조사하였습니다. 순진(CD45RA+CD62L+), 중앙 메모리(CM, CD45RA-CD62L+), 효과기 메모리(EM, CD45RA-CD62L-), 효과기 메모리 CD45RA-양성(EMRA, CD45RA+CD62L-). 히스토그램은 SD± 평균 표현을 나타내며, 점은 단일 기증자를 나타냅니다(개별 값은 보충표 1과 보충표 2 참조). 데이터는 양측 다중 쌍 t-검정(B-C-D-F) 또는 양측 윌콕슨 매칭 순위 검정(A-E)으로 분석되었으며, 다중 비교에 대해서는 Holm-Sidak 보정(*p &lt; 0.05)을 적용하였습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69369/69369fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<img alt="그림 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69369/69369fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
그림 4: CD19 CAR-T 및 CIK 세포 독성 평가. (A) 버킷 림프종 라지 세포주에 대해 6시간 유세포 분석 기반 살상 분석법을 통해 CD19 CAR-T 세포(주황색, n = 5) 또는 비형질(UTD) 세포(회색, n = 5)의 특이적 용해를 수행하였다. 결과는 SD± 평균 특이적 용해로 나타난다. (B) G-24(연한 파란색, n = 7) 또는 G-6M(짙은 파란색, n=6)에서 배양된 CIK 세포의 세포독성이 유방암 MCF-7 세포주(부착 세포주 모델로서)는 실시간 세포 분석기를 사용해 24시간 동안 15분마다 모니터링되었다. 결과는 SEM± 평균 특이적 용해로 표시됩니다. 데이터는 Mann-Whitney 검정, Holm-Sidak 보정으로 분석되어 다중 비교를 위해 사용되었습니다(*p &lt; 0.05). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69369/69369fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
보조 그림 1: 유세포 분석에 사용되는 게이팅 전략. (A) CAR-T 세포 표현형 특성화와 (C) 형광세포 염료 기반 세포독성 분석의 게이팅 전략을 보여주는 대표적인 그래프들입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69369/Suppl_Figure%201_RE.pdf" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
보충표 1: 개별 기증자의 CD19 CAR-T 세포 배양의 성장, 생존 가능성 및 표현형. 각 기증자별로 각 기증자별로 배양 9일째에 채취된 CD19-CAR T 세포의 총 세포 수, 접힘 증가, 생존율 및 표현형 특성 분석을 보여줍니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69369/Suppl_table_1_RE.xlsx" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
보충 표 2: 개별 기증자의 CIK 세포 배양의 성장, 생존 가능성 및 표현형. 각 기증자별로 G-24 및 G-6M 장치에서 배양 14일째에 채취된 CIK 세포의 총 세포 수, 접힘 증가, 생존 가능성 및 표현형 특성 분석을 보여줍니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69369/Suppl_table_2_RE.xlsx" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭해 주세요.</a>

GMP 확장 가능한 장치에서 CAR-T 및 사이토카인 유도 킬러 세포의 효율적이고 빠른 생성

Adoptive cell therapies (ACT) have progressed rapidly in recent years, playing a pivotal role in cancer immunotherapy and significantly influencing ...

efficient-rapid-generation-car-t-cytokine-induced-killer-cells-gmp

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

의 생성에 대한 신속, 간단하고 비용 효율적인 프로토콜 기증자 파생 CMV, EBV 감염 또는 교수실을 개발하는 위험 allogeneic 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) 수신자에게 주입을위한 multivirus 특정 CTLs (rCTL을). 이 제조 과정은 GMP 준수하고 전문 센터 이외 T - 세포 immunotherapy의 광범위한 구현을 보장한다.

Multivirus 특정 T 세포 생성 Allogeneic 조혈 줄기 세포 이식 후 바이러스 감염을 예방 / 치료

화학요법 및 방사선 표준 치료의 림프구 정지 및 면역 조절 효과를 활용하여 T 세포 면역 요법의 항종양 효능을 향상시킬 수 있습니다. EGFRvIII 특이적 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포를 생성하고 교모세포종 표준 치료의 맥락에서 투여하는 방법을 설명합니다.

배려의 아교 모세포종 표준의 맥락에서 입양 치료에 대한 자동차 T 세포의 생성

이 프로토콜의 목표는 폐쇄형 사이토카인 포획 시스템을 통합하고 전담 직원이나 GMP 시설의 사용이 필요하지 않은 벤치탑의 자동화된 2세대 세포 농축 장치를 사용하여 병원체 특이적 임상 등급 T 세포를 제조하는 것입니다. 생성된 거대세포바이러스 pp65 특이적 T 세포는 환자에게 직접 투여할 수 있습니다.

사이토 카인 캡처 시스템을 사용하여 임상 응용 프로그램에 대한 거대 세포 바이러스 고유의 자동화 된 세포 농축은 T 세포

여기에서는 CRISPR/Cas9 시스템을 통해 CAR-T 세포를 유전적으로 편집하는 프로토콜을 제시합니다.

CRISPR/Cas9를 사용하여 CAR-T 셀에서 GM-CSF를 제거합니다.

본 호는 시험관 내 및 생체 내에서 사용하기 위해 많은 수의 기능성 T 세포를 산출하는 것을 목표로 항원 특이적 CD8 T 세포의 생성및 시험관 내 확장에 대한 프로토콜을 설명합니다.

자가 면역 당뇨병 모델에서 기능 테스트를 위한 항원 특이적 원발성 원발성 T 세포의 고효율 생성

제시된 감마델타(γδ) T 세포 약품의 확장을 위한 프로토콜이다. 림프구는 졸레드로닉산 및 인터류신-2로 농축된 용류 및 γδ에 의해 분리된다. 알파 베타 T 세포는 임상 급 자기 분리 장치를 사용하여 고갈된다. γδ 세포는 K562 유래, 인공 항원 제시 세포와 공동 배양되고 확장된다.

감마 델타(γδ) T 세포의 확장 및 농축

이 프로토콜은 관심 유전자를 가진 일차 인간 T 세포를 형질도입하는 과정을 간략하게 설명하여 GMP(Good Manufacturing Practice) 표준과의 호환성을 보장합니다.

유전자 변형 T 세포 생성을 위한 GMP 준수 절차

이 기사에서는 임상용 키메라 항원 수용체 T 세포의 제조 공정, 특히 T 세포의 바이러스 transduction 및 배양을 수행할 수 있는 자동 세포 프로세서를 사용하는 공정에 대해 자세히 설명합니다. 우리는 권장 사항을 제공하고 초기 단계 임상 시험의 프로세스 개발 및 구현 중에 고려해야 할 함정을 설명합니다.

자동화된 세포 프로세서에서 키메라 항원 수용체 T 세포 제조

이 프로토콜은 레트로바이러스 벡터 생산과 쥐 T 세포 transduction을 간소화하여 마우스 CAR-T 세포의 효율적인 생성을 촉진합니다.

Murine Chimeric Antigen Receptor (CAR)-T cell의 효율적인 생성

여기에서는 단일 세포 수준에서 세포 사멸을 조사하기 위해 하나의 T 세포와 암 표적 세포를 캡슐화하는 이중 에멀젼 방울을 만드는 방법을 설명합니다. 이 방법은 많은 T 세포 집단 내에서 세포독성 분자와 표적 세포 사멸을 모두 이중 정량화할 수 있습니다.

단일 세포 수준에서 키메라 항원 수용체 T 세포를 평가하기 위한 액적 기반 세포 독성 분석

CRISPR/Cas9 기술을 사용하여 homology-mediated end joining (HMEJ) DNA repair pathway를 통해 1차 인간 T 세포에서 큰 multicistronic 구조체의 고효율 표적 knock-in을 달성하기 위한 자세한 프로토콜이 제공됩니다. 이 cGMP 적응 프로토콜로 조작된 T 세포는 우수한 세포 증식, 세포 독성 및 사이토카인 생산을 유지합니다.

대형 DNA 주형의 상동성 매개 말단 결합을 통한 일차 인간 T 세포의 비바이러스 공학

학습하세요 G-Rex 장치를 활용한 CAR-T 및 CIK 세포의 GMP 확장 가능한 배양 프로토콜. 고밀도 배양과 최소 사용자 개입으로 임상 적용 가능한 세포 치료 제품을 효율적으로 생산하는 방법을 탐색하세요.

GMP 확장 가능한 장치에서 CAR-T 및 사이토카인 유도 킬러 세포의 효율적이고 빠른 생성

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