Name: 포유류 세포에서 정량적 영상을 이용한 세포내 니코틴 아세틸콜린 수용체의 원형 및 세포내 원형질막 위치 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: 배우세요 포유류 세포에서 pH 민감 형광 태그와 공초점 현미경을 이용해 니코틴 아세틸콜린 수용체의 세포막 및 세포내 위치를 정량화하는 방법. 이 기술은 수용체 운반 및 약리학적 조절 연구에 활용됩니다.

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<table><tbody><tr><td>0.25% 트립신-EDTA (1X)&nbsp;</td><td>깁코</td><td>25200-056</td><td>셀 박리 시약</td></tr><tr><td>알파-분가로톡신 알렉사 플루어 647</td><td>인비트로젠</td><td>B35450</td><td>알파-분가로톡신 켤레</td></tr><tr><td>BSL 1단계 생물안전 캐비닛 &nbsp;</td><td>누아이레</td><td>NU-425-400</td><td>무균 세포 배양 작업 구역</td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>아벤토르/VWR</td><td>BDH9224</td><td>버퍼 성분</td></tr><tr><td>D-(+)-포도당</td><td>밀리포어 시그마와 nbsp;</td><td>G8270</td><td>버퍼 성분</td></tr><tr><td>L-글루타민을 이용한 EMEM</td><td>ATCC</td><td>30-2003</td><td>세포 배지</td></tr><tr><td>엔도톡신 없는 DNA</td><td>Zymo 키트를 사용해 자체 제작</td><td>해당되지 않음</td><td>세포 일시적 형질전환에 사용되는 nAChR DNA</td></tr><tr><td>엔도톡신 없는 마이크로 원심분리기 튜브, 0.5 mL &nbsp;</td><td>아벤토르/VWR</td><td>89000-010</td><td>DNA 및 형질전환 준비</td></tr><tr><td>엔도톡신 없는 마이크로 원심분리관 1.5 mL &nbsp;</td><td>아벤토르/VWR</td><td>20170-038</td><td>DNA 및 형질전환 준비</td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>아벤토르/VWR</td><td>97068-085</td><td>혈청 보충제</td></tr><tr><td>플루오뷰 FV10i</td><td>올림포스</td><td>FV10i</td><td>공초점 현미경</td></tr><tr><td>유리 바닥 매트텍 접시</td><td>맷텍</td><td>P35GC-0-10-C</td><td>이미징 접시</td></tr><tr><td>그래프패드 프리즈 v. 10</td><td>그래프패드 프리즘</td><td>https://www.graphpad.com/features</td><td>데이터 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>젠장</td><td>밀리포어 시그마와 nbsp;</td><td>H3375</td><td>버퍼 성분</td></tr><tr><td>리포펙타민 2000</td><td>인비트로젠</td><td>11668019</td><td>트랜스펙션 시약</td></tr><tr><td>육수화마그네슘 클로라이드</td><td>열과학</td><td>413410025</td><td>버퍼 성분</td></tr><tr><td>MES 하이드레이트</td><td>밀리포어 시그마와 nbsp;</td><td>M5287</td><td>버퍼 성분</td></tr><tr><td>mTagBFP2-pBAD</td><td>AddGene&nbsp;</td><td>54572</td><td>대조 DNA는 세포 일시적 형질전환에 사용될 것;</td></tr><tr><td>신경 2 a(N2a) 세포</td><td>미국 타체 문화 컬렉션</td><td>CCL-131</td><td>DNA 형질전환 및 nAChR 발현에 사용되는 세포</td></tr><tr><td>옵티-MEM</td><td>깁코</td><td>31985-070</td><td>환원 혈청 배지</td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>아벤토르/VWR</td><td>K952-100mL</td><td>항생제</td></tr><tr><td>연극 펌프</td><td>길슨</td><td>미니펄스3</td><td>영상 촬영 시 버퍼가 변함 &nbsp;</td></tr><tr><td>인산 완충 식염수</td><td>퀄리티 바이오컬</td><td>119-069-131</td><td>식염수 완충제</td></tr><tr><td>피펫 보조</td><td>드럼몬드와 nbsp;</td><td>140084</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>피펫 팁 (멸균 및 내독소 없음, 1000uL)</td><td>레이닌</td><td>30389216</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>피펫 팁 (멸균 및 내독 없음, 20uL)</td><td>레이닌</td><td>30389229</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>피펫 팁 (멸균 및 내독소 없음, 250uL)</td><td>레이닌</td><td>30389246</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>피페테스, P10</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-10XLS</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>피페테스, P100</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-100XLS</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>피페테스, P1000</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-1000XLS</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>염화칼륨</td><td>밀리포어 시그마와 nbsp;</td><td>P3911</td><td>버퍼 성분</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 (멸균 및 내독 무첨가, 10 ML)</td><td>아벤토르/VWR</td><td>89130-898</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫(멸균 및 내독 무첨가, 25 mL)</td><td>아벤토르/VWR</td><td>89130-900</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 (멸균 및 내독소 무첨가, 5 mL)</td><td>아벤토르/VWR</td><td>76201-710</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫(멸균 및 내독 무첨가, 50 mL)</td><td>아벤토르/VWR</td><td>75816-088</td><td>정밀 액체 이동</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>아벤토르/VWR</td><td>BDH9286</td><td>버퍼 성분</td></tr><tr><td>조직 배양 플라스크</td><td>팔콘</td><td>353109</td><td>재배 요리</td></tr><tr><td>자이모퓨어 II 플라스미드 맥시렙 키트</td><td>자이모 연구</td><td>D4203-A + D4203-B</td><td>엔도독소가 없는 DNA 생성</td></tr><tr><td>&alpha; 4-SEP&nbsp;</td><td>ThermoFisher 사이언티픽 GeneArt 유전자 합성 서비스&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>맞춤형 유전자 합성 서비스</td></tr><tr><td>&alpha; 7-p후지</td><td>트위스트 바이오사이언스</td><td>https://www.twistbioscience.com/</td><td>맞춤형 유전자 합성 서비스</td></tr><tr><td>&베타; 2-p후지</td><td>ThermoFisher 사이언티픽 GeneArt 유전자 합성 서비스&nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>맞춤형 유전자 합성 서비스</td></tr></tbody></table>

포유류 세포에서 정량적 영상을 이용한 세포내 니코틴 아세틸콜린 수용체의 원형 및 세포내 원형질막 위치

Localization of Plasma Membrane and Intracellular Neuronal Nicotinic Acetylcholine Receptors Using Quantitative Imaging in Mammalian Cells

Quantification of neuronal nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) expressed on the plasma membrane of mammalian cells is important for the development ...

localization-plasma-membrane-intracellular-neuronal-nicotinic

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

우리는 더 나은 접근 장물과 스펙트럼을 사용하여 수용체의 형광 단백질 태그를 포함한 접근 방법의 조합을 사용하여 니코틴 중독의 메커니즘을 이해하기 위해 CNS의 뉴런의 특정 subtypes의 subcellular 지역 내에서 nicotinic 아세틸콜린 수용체 변화를 quantifying의 소설 기법을 개발했습니다 공촛점 이미징.

만성 니코틴 관리와 마우스 노크 인의 Fluorescently 태그를 Nicotinic 수용체의 분광 공촛점 이미징

태그를 추가하여 superecliptic pHluorin와 막 수용체의 세포 외 도메인, 및 이미징에 의해 배양 된 마우스 뉴런에서 이러한 퓨전 수용체, 우리는 직접 플라즈마 막에 수용체의 개별 기공을 갖는 삽입 이벤트를 시각화 할 수 있습니다. 이 기술은 플라즈마 막에 수용체 삽입에 관한 분자 메커니즘을 elucidating에 도움 될 것입니다.

이미징은 기본 양식 마우스 뉴런의 플라즈마 막에 수용체 삽입을 pHluorin 태그

출처: Zhang, J., et al. High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses(망막 리본 시냅스에서 막 수용체의 고분해능 정량적 면역금 분석). J. Vis. Exp. (2016)이 비디오는 망막 시냅스에서 신경전달물질 수용체 국소화를 시각화하기 위한 전자 현미경 기술을 보여줍니다. 망막 절편에는 막으로 결합된 신경전달물질 수용체를 나타내는 망막 신경절 세포가 포함되어 있으며 콜레라 독소 소단위 B(CTB)로 표지되어 있습니다. 마커를 금 나노 입자 접합 항체로 라벨링하고 중금속으로 단면을 대조염색하면 망막 신경절 세포 수용체가 현미경으로 시각화됩니다.

고해상도: 망막 시냅스(Retinal Synapse)에서 신경전달물질 수용체(Neurotransport Receptors)의 고해상도(High-resolution) 이미징

이 논문에서, 우리는 심하게 절연 뇌 조각의 뉴런에 리간드 - 개폐 이온 채널 기능을 연구 할 수있는 유용한 방법을 설명합니다. 이 방법은 표준 패치 클램프 기술을 사용하여 기록 뉴런에 약물의 로컬 응용 프로그램에 대한 약물 채워진 micropipette의 사용을 포함한다.

마우스 뇌 슬라이스의 Nicotinic 아 세티 콜린 수용체 기능을 공부하는 약물의 로컬 응용 프로그램

우리는 니코틴 아세틸콜린 수용체(nAChRs) 매개 시냅스 전달의 시냅스 전 메커니즘을 분석하기 위해 직접 라이브 이미징을 허용하는 복부 해마 – 측좌 회로의 유전자 키메라 제제를 in vitro에서 개발했습니다. 이 제제는 또한 시냅스 가소성의 시냅스 전후 메커니즘을 연구하기 위한 유익한 접근 방식을 제공합니다.

니코틴 유도 칼슘 신호 전달 및 복부 해마 축삭을 따라 신경 전달 물질 방출의 라이브 영상

postembedding immunogold 방법은 특정 분자의 세포 내 국소화에 대한 고해상도 분석을 제공하는 가장 효과적인 방법 중 하나입니다. 여기에서는 망막 리본 시냅스에서 글루타메이트 수용체를 정량적으로 분석하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

망막 리본 시냅스에서 막 수용체의 고해상도 양이 Immunogold 분석

생화학적 분석과 결합된 광학 현미경 기술은 네트린 의존성 축삭돌기 분지화에서 SNARE 매개 외세포작용의 관여를 밝힙니다. 이러한 기술의 조합을 통해 축삭돌기 분지 및 세포 모양 변화를 제어하는 분자 메커니즘을 식별할 수 있습니다.

결합 된 방법론을 활용하여 축삭 분기 및 신경 세포 형태 형성 동안 플라즈마 멤브레인 배달의 역할을 정의합니다

pH가 민감한 형광으로 막 단백질의 세포 외 도메인에 레이블, superecliptic pHluorin (-9 월), 세포 내 현지화, 표현, 인신 매매를 결정할 수 있습니다. 촬상 전반사 형광 현미경 (TIRFM)으로 단백질을 -9 월 표지 주연 ER 및 세포막에서 단백질 농도의 정량 분석을 가능하게한다.

pHluorin 태그가 수용체를 활용하여하는 세포 현지화 및 인신 매매를 모니터링하기

이 문서는 니코틴 uncaging에 의해 마우스 뇌 조각에서 nicotinic 아 세 틸 콜린 수용 체 (nAChRs) 공부에 대 한 메서드를 제공 합니다. 동시 패치 클램프 기록 및 2 광자 레이저 스캐닝 현미경 검사 법으로 사용할 경우 해 신경 생물학의 깊은 이해를 제공 하는 세포 형태학 nicotinic 수용 체 기능을 연결 니코틴 uncaging 합니다.

Photoactivatable 니코틴의 레이저 플래시 Photolysis를 통해 마우스 뇌 조각에서 Nicotinic 아 세 틸 콜린 수용 체 기능을 프로 빙

여기, 우리 면역 형광 염색 법을 사용 하 여 마커 단백질, confocal 현미경 검사 법 및 컴퓨터 기반 분석 시 냅 스 단백질의 분포를 결정 하는 양적 접근 방식을 설명 합니다.

면역 형광 검사를 사용 하 여 마우스 뇌의 시 냅 스 단백질의 다른 유형의 분포를 측정

현재 방법은 쉽게 사용할 수 있는 유전적으로 암호화된 칼슘 지표를 사용하여 예쁜꼬마선충에서 생체 내 고해상도 하위 구획 칼슘 이미징을 위한 비비율계량 접근 방식을 설명합니다.

생체 내에서 처리되는 신경 칼슘의 세포 내 이미징

배우세요 포유류 세포에서 pH 민감 형광 태그와 공초점 현미경을 이용해 니코틴 아세틸콜린 수용체의 세포막 및 세포내 위치를 정량화하는 방법. 이 기술은 수용체 운반 및 약리학적 조절 연구에 활용됩니다.

포유류 세포에서 정량적 영상을 이용한 세포내 니코틴 아세틸콜린 수용체의 원형 및 세포내 원형질막 위치

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