Name: 감염성 실험 환경에 적응하는 신생아, 유아, 성체 쥐 폐에서 폐포 유형 II 상피세포 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: 학습하세요 유동세포분석을 이용한 쥐 폐포 유형 II 상피세포 분리 방법을 통해 신생아와 성체 쥐 폐에서 살아있는 세포를 얻는 기술입니다. 이 프로토콜은 호흡기 감염 및 폐 발달 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Stegemann-Koniszewski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+type+II+epithelial+cells+contribute+to+the+anti-influenza+A+virus+response+in+the+lung+by+integrating+pathogen-+and+microenvironment-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Alveolar type II epithelial cells contribute to the anti-influenza A virus response in the lung by integrating pathogen- and microenvironment-derived signals.</a> mBio. 7 (3), (2016).</li>
<li>Kumova, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+neonatal+influenza+infection+is+driven+by+type+I+interferon+and+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Severity of neonatal influenza infection is driven by type I interferon and oxidative stress.</a> Mucosal Immunol. 15 (6), 1309-1320 (2022).</li>
<li>Angelidis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+atlas+of+the+aging+lung+mapped+by+single-cell+transcriptomics+and+deep+tissue+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">An atlas of the aging lung mapped by single-cell transcriptomics and deep tissue proteomics.</a> Nat Commun. 10 (1), 963(2019).</li>
<li>Cleaver, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+cells+are+essential+effectors+of+inducible+resistance+to+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial cells are essential effectors of inducible resistance to pneumonia.</a> Mucosal Immunol. 7 (1), 78-88 (2014).</li>
<li>Boehme, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+changes+and+serotype-specific+responses+of+alveolar+type+II+epithelial+cells+to+Streptococcus+pneumoniae+in+resolving+influenza+A+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Epigenetic changes and serotype-specific responses of alveolar type II epithelial cells to Streptococcus pneumoniae in resolving influenza A virus infection.</a> Cell Commun Signal. 23 (1), 278(2025).</li>
<li>Worrell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+structural+cells+are+altered+by+influenza+virus+leading+to+rapid+immune+protection+following+re-challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lung structural cells are altered by influenza virus leading to rapid immune protection following re-challenge.</a> Nat Commun. 16 (1), 7061(2025).</li>
<li>Sinha, M., Lowell, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+highly+pure+primary+mouse+alveolar+epithelial+type+II+cells+by+flow+cytometric+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of highly pure primary mouse alveolar epithelial type II cells by flow cytometric cell sorting.</a> Bio Protoc. 6 (22), (2016).</li>
<li>Chen, Q., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+mouse+alveolar+type+II+cells+to+study+type+II+to+type+I+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of mouse alveolar type II cells to study type II to type I cell differentiation.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100241(2021).</li>
<li>Gereke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+isolation+of+primary+murine+type+II+alveolar+epithelial+cells+for+functional+and+molecular+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric isolation of primary murine type II alveolar epithelial cells for functional and molecular studies.</a> J Vis Exp. (70), e4322(2012).</li>
<li>Avelin, V., Sissonen, S., Julkunen, I., Österlund, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+efficacy+of+H5N1+avian+influenza+virus+by+commonly+used+sample+preparation+reagents+for+safe+laboratory+practices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Inactivation efficacy of H5N1 avian influenza virus by commonly used sample preparation reagents for safe laboratory practices.</a> J Virol Methods. 304, 114527(2022).</li>
<li>Jureka, A. S., Silvas, J. A., Basler, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation%2C+inactivation%2C+and+safety+testing+of+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Propagation, inactivation, and safety testing of SARS-CoV-2.</a> Viruses. 12 (6), (2020).</li>
<li>Fukuyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-spectral+fluorescent+reporter+influenza+viruses+%28Color-flu%29+as+powerful+tools+for+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Multi-spectral fluorescent reporter influenza viruses (Color-flu) as powerful tools for in vivo studies.</a> Nat Commun. 6, 6600(2015).</li>
<li>Hanssen, A., Loges, S., Pantel, K., Wikman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+circulating+tumor+cells+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Detection of circulating tumor cells in non-small cell lung cancer.</a> Front Oncol. 5, 207(2015).</li>
<li>Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+enzymatic+tissue+disintegration+on+the+level+of+surface+molecule+expression+and+immune+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Microbiol+Immunol+%28Bp%29%22%5BJournal%5D)">Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function.</a> Eur J Microbiol Immunol (Bp). 2 (2), 112-120 (2012).</li>
<li>Soutiere, S. E., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+postnatal+lung+growth+and+development+between+C3H%2FHeJ+and+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of postnatal lung growth and development between C3H/HeJ and C57BL/6J mice.</a> J Appl Physiol. 100 (5), 1577-1583 (2006).</li>
<li>Alberts, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+the+host+response+between+resistant+and+susceptible+inbred+mouse+strains+after+influenza+A+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in the host response between resistant and susceptible inbred mouse strains after influenza A infection.</a> Microbes Infect. 12 (4), 309-318 (2010).</li>
<li>Kida, K., Fujino, Y., Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+lung+structure+in+male+DBA+and+C57+black+mice+and+their+F1+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">A comparison of lung structure in male DBA and C57 black mice and their F1 offspring.</a> Am Rev Respir Dis. 139 (5), 1238-1243 (1989).</li>
<li>Reinhard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+strain+variation+in+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Inbred strain variation in lung function.</a> Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).</li>
<li>Soutiere, S. E., Tankersley, C. G., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+alveolar+size+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Differences in alveolar size in inbred mouse strains.</a> Respir Physiol Neurobiol. 140 (3), 283-291 (2004).</li>
<li>Koerner, I., Matrosovich, M. N., Haller, O., Staeheli, P., Kochs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+receptor+specificity+and+fusion+activity+of+the+haemagglutinin+contribute+to+high+virulence+of+a+mouse-adapted+influenza+A+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Altered receptor specificity and fusion activity of the haemagglutinin contribute to high virulence of a mouse-adapted influenza A virus.</a> J Gen Virol. 93 (Pt 5), 970-979 (2012).</li>
<li>Weinheimer, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+viruses+target+type+II+pneumocytes+in+the+human+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza A viruses target type II pneumocytes in the human lung.</a> J Infect Dis. 206 (11), 1685-1694 (2012).</li>
<li>Youk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+human+alveolar+stem+cell+culture+models+reveal+infection+response+to+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional human alveolar stem cell culture models reveal infection response to SARS-CoV-2.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 905-919.e10 (2020).</li>
<li>Ziegler, C. G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+receptor+ACE2+is+an+interferon-stimulated+gene+in+human+airway+epithelial+cells+and+is+detected+in+specific+cell+subsets+across+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 receptor ACE2 is an interferon-stimulated gene in human airway epithelial cells and is detected in specific cell subsets across tissues.</a> Cell. 181 (5), 1016-1035.e19 (2020).</li>
<li>Katsura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lung+stem+cell-based+alveolospheres+provide+insights+into+SARS-CoV-2-mediated+interferon+responses+and+pneumocyte+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human lung stem cell-based alveolospheres provide insights into SARS-CoV-2-mediated interferon responses and pneumocyte dysfunction.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 890-904.e8 (2020).</li>
<li>Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+type+II+cell%3A+Defender+of+the+alveolus+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Res%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial type II cell: Defender of the alveolus revisited.</a> Respiratory Res. 2 (1), 33(2001).</li>
<li>Mason, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Biology of alveolar type II cells.</a> Respirology. 11 (Suppl), S12-S15 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>ACK 버퍼</td><td>-</td><td>-</td><td>8.29g NH4Cl, 1g KHCO3, 200 및 마이크로; L은 0입니다. 5M EDTA, 1000 mL 밀리-Q 추가, pH를 7.2에서 7.4로 조절</td></tr><tr><td>안티마우스 CD11b</td><td>e바이오사이언스</td><td>12-0112-83</td><td>클론 M1/70; PE 결합</td></tr><tr><td>안티마우스 CD11c</td><td>바이오레전드</td><td>117310</td><td>클론 N418; APC 연결</td></tr><tr><td>안티마우스 CD16/32</td><td>BD 생명과학</td><td>553141</td><td>클론 93; 정제됨</td></tr><tr><td>안티마우스 CD16/32</td><td>BD 생명과학</td><td>561727</td><td>클론 2.4G2; PE 결합</td></tr><tr><td>안티마우스 CD19</td><td>바이오레전드</td><td>115508</td><td>클론 6D5; PE 결합</td></tr><tr><td>안티마우스 CD24</td><td>바이오레전드</td><td>101808</td><td>클론 M1/69; PE 결합</td></tr><tr><td>안티마우스 CD31</td><td>바이오레전드</td><td>102408</td><td>클론 390; PE 결합</td></tr><tr><td>안티마우스 CD326</td><td>바이오레전드</td><td>118245</td><td>클론 G8.8; BV785 연결</td></tr><tr><td>안티마우스 CD45</td><td>BD 생명과학</td><td>553081</td><td>클론 30-F11; PE 결합</td></tr><tr><td>안티마우스 CD93</td><td>e바이오사이언스</td><td>17-5892-82</td><td>AA4-1 클론; APC 연결</td></tr><tr><td>안티마우스 F4/80</td><td>바이오레전드</td><td>123116</td><td>복제 BM8; APC 연결</td></tr><tr><td>안티마우스 SPC&nbsp;</td><td>ABCAM</td><td>ab211326</td><td>숙주 종: 토끼; 클론: EPR19839; 정제됨</td></tr><tr><td>아리아 퓨전</td><td>BD 생명과학</td><td></td><td>셀 소터(Cell Sorter)</td></tr><tr><td>아리아-II SORP</td><td>BD 생명과학</td><td></td><td>셀 소터(Cell Sorter)</td></tr><tr><td>바이오짐 플라크 아가로스</td><td>바이오짐</td><td>840101</td><td>H2O 내 1% (w/v)</td></tr><tr><td>셀 스트레이너(100 및 마이크로; m, 70 & micro; m, 40 & micro; m)</td><td>BD 팔콘</td><td>352360, 352350, 352340</td><td></td></tr><tr><td>셀트릭스(50 및 마이크로; m)</td><td>시스멕스</td><td>04-004-2327</td><td></td></tr><tr><td>소 췌장에서 추출한 디옥시리보뉴클레아제 I, 2000 Kunitz 단위/바이알</td><td>시그마-올드리치</td><td>D4263</td><td>330 및 마이크로에 신선히 용해된 1바이알 함량; L DMEM</td></tr><tr><td>분산, 100 mL (5000 카제이노리틱 단위)</td><td>코닝</td><td>354235</td><td>멸균 여과 수행 (공극 크기 0.22 & 마이크로; m), 4 mL 이리코트를 15 mL 튜브에 준비하고, -20 & deg에서 보관합니다; C</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>깁코</td><td>31885-049</td><td>저혈당에 피루빈산을 추가하여 HEPES(최종 농도 25 mM)</td></tr><tr><td>FACS 디바</td><td>BD 생명과학</td><td></td><td>분류 소프트웨어</td></tr><tr><td>플로우조</td><td></td><td></td><td>FACS 데이터 평가 소프트웨어</td></tr><tr><td>염소 안티-래빗</td><td></td><td></td><td>알렉사 594 커플링</td></tr><tr><td>인딩 캐뉼라 인트로칸 22G</td><td>브라운</td><td>4252098B</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy FFPE 키트</td><td>치아겐</td><td>73504</td><td></td></tr><tr><td>심포니 시즌 6 SE</td><td>BD 생명과학</td><td></td><td>셀 소터(Cell Sorter)</td></tr></tbody></table>

감염성 실험 환경에 적응하는 신생아, 유아, 성체 쥐 폐에서 폐포 유형 ii 상피세포 분리

Isolation of Alveolar Type II Epithelial Cells from Neonatal, Juvenile, and Adult Murine Lungs Adaptable to Infectious Experimental Settings

감염성 실험 환경에 적응하는 신생아, 유아, 성체 쥐 폐에서 폐포 유형 II 상피세포 분리

Alveolar type II epithelial cells (AECII) critically contribute to immune regulation in the lung and thus are key elements orchestrating pulmonary ...

isolation-alveolar-type-ii-epithelial-cells-from-neonatal-juvenile

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

여기, 우리는 murine 폐동맥 내피 세포의 격리와 문화 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 정비사 및 효소 폐 조직 분리뿐만 아니라 안티 - PECAM - 1과 대부분 microvascular 원산지 순수한 내피 세포 인구를 생산 자성 비즈에 복합 백신 ICAM - 2 항체를 사용하여 2 단계 정화 과정으로 구성됩니다.

신생아 마우스의 폐 내피 세포의 분리 및 문화

폐 상피 세포는 생쥐의 호흡기로부터 격리하고 차별 호흡기 상피의 모델로 공기 - 액체 인터페이스에서 교양 수 있습니다. 프로토콜이 환경 독소에 분자 반응을 연구하기 위해, culturing를 분리하고 주류 담배 연기 이러한 세포를 노출에 대해 설명합니다.

에어 리퀴드 인터페이스에서 마우스 호흡기 상피 세포 및 실험 담배 연기에 노출의 분리

마우스 폐 돌기 세포의 고도 정화 준비가 설명되어 있습니다. 구체적인 중점이 종래의 돌기 세포 집합의 고립에 제공됩니다.

마우스 폐에 돌기 세포의 분리

우리는 흐름 cytometric 부정적인 선택하여 기본 손쥐 유형 II 폐포 상피 세포 (AECII)의 급속한 절연을 설명합니다. 이 AECII 높은 생존 능력과 정결을 표시하고 면역 또는 전염성 질환과 같은 호흡기 질환에서의 역할에 대한 기능과 분자 연구 광범위한 적합합니다.

기능 및 분자 연구 기본 손쥐 유형 II 폐포 상피 세포의 흐름 Cytometric 절연

이 비디오는 쥐의 폐에 서식하는 면역 세포를 식별하는 체외 기술을 보여줍니다. 쥐의 폐 조직에서 표적 면역 세포를 분리한 후, 선천성 및 적응 면역 세포의 특정 마커에 대해 형광단 표지 항체 칵테일을 사용하여 표면 표지됩니다. 또한 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포는 세포 내 마커를 사용하여 표지됩니다. 그런 다음 유세포 분석을 사용하여 다양한 면역 세포 유형을 식별합니다.

쥐의 폐에 서식하는 선천적 및 적응적 면역 세포를 식별하는 In vitro 방법

이 통신 격리와 인간에서 치경 대 식 세포의 문화에 대 한 방법론 및 실험적인 목적을 위한 murine 모델에 설명합니다.

고립과 Murine 인간과 치경 대 식 세포의 생체 외에서 문화

여기에 제시된 1 차적인 인간 혈액 단화 절연을 위한 프로토콜은 대식세포 및 수지상 세포로의 분화뿐만 아니라 다세포 인간 폐 모델로 상피 세포를 조립한다. 염증 성 자극에 노출되면 갓 분리되거나 해동 된 단핵구로부터 분화 된 면역 세포로 구성된 공동 배양의 생물학적 반응이 비교됩니다.

유해 성 평가를 위한 상피 세포 및 1 차적인 면역 세포로 구성된 다세포 인간 폐포 모형

이 기사에서는 신생아 마우스에서 일차 폐 내피 세포를 분리하고 배양했습니다.

일차 마우스 폐 내피 세포의 분리

본 프로토콜은 인간 유도만능줄기세포 유래 제2형 폐포 상피유사세포(iAT2s)를 기술한다. 이들 세포는 3D 배양물에서 자가재생 구체로서 배양되거나 공기-액체 계면(ALI) 배양에 적응될 수 있다.

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 유형 2 폐포 상피 세포의 3D 구체 및 2D 공기-액체 계면 배양 생성

여기에 제시된 것은 장기 바이오뱅킹을 위한 원발성 기관지 상피 세포의 분리 및 확장과 공기-액체 계면에서 배양에 의한 분화된 상피 세포의 생성을 위한 재현 가능하고 저렴하며 강력한 방법입니다.

바이오뱅킹을 위해 절제된 폐 조직에서 기관지 상피 세포를 분리하고 잘 분화된 공기-액체 계면 배양을 확립합니다.

이 프로토콜은 인플루엔자 감염 후 안정적인 상태에서 마우스 폐에서 살아있는 면역 및 비면역 집단을 격리하는 방법을 자세히 설명합니다. 또한 상피 및 골수성 세포 부분 집합을 식별하기 위한 게이팅 전략을 제공합니다.

Isolation of Live Myeloid and Epithelial Cell Populations from the Mouse Lung(쥐 폐에서 살아있는 골수성 및 상피 세포 집단의 분리)

학습하세요 유동세포분석을 이용한 쥐 폐포 유형 II 상피세포 분리 방법을 통해 신생아와 성체 쥐 폐에서 살아있는 세포를 얻는 기술입니다. 이 프로토콜은 호흡기 감염 및 폐 발달 연구에 활용됩니다.

감염성 실험 환경에 적응하는 신생아, 유아, 성체 쥐 폐에서 폐포 유형 II 상피세포 분리

더 많은 동영상 탐색