Name: 세포외 플럭스 분석법을 이용한 1차 미세아교세포의 당화 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: 배우세요 세포외 플럭스 분석법을 이용한 1차 미세아교세포의 당화 연구 방법을. 신생아 마우스 대뇌 피질에서 분리한 미세아교세포의 실시간 대사 활성을 측정하여 염증 조건에서의 글리코리시스 변화를 정밀하게 분석할 수 있습니다.

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<ol><li>Prinz, M., Jung, S., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+biology%3A+One+century+of+evolving+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia biology: One century of evolving concepts.</a> Cell. 179, 292-311 (2019).</li>
<li>Tay, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+microglia+recovery+population+revealed+by+single-cell+RNAseq+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol.+Commun%22%5BJournal%5D)">Unique microglia recovery population revealed by single-cell RNAseq following neurodegeneration.</a> Acta Neuropathol. Commun. 6, 87(2018).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis+and+oxidative+phosphorylation+play+critical+roles+in+natural+killer+cell+receptor-mediated+natural+killer+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolysis and oxidative phosphorylation play critical roles in natural killer cell receptor-mediated natural killer cell functions.</a> Front. Immunol. 11, 202(2020).</li>
<li>Soto-Heredero, G., Gómezde Las Heras, M. M., Gabandé-Rodríguez, E., Oller, J., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis-a+key+player+in+the+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Glycolysis-a key player in the inflammatory response.</a> FEBS J. 287, 3350-3369 (2020).</li>
<li>O'Neill, L. A., Kishton, R. J., Rathmell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+immunometabolism+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to immunometabolism for immunologists.</a> Nat. Rev. Immunol. 16, 553-565 (2016).</li>
<li>Bernier, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+metabolic+flexibility+supports+immune+surveillance+of+the+brain+parenchyma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microglial metabolic flexibility supports immune surveillance of the brain parenchyma.</a> Nat. Commun. 11, 1559(2020).</li>
<li>Bernier, L. P., York, E. M., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+in+the+brain%3A+How+metabolism+shapes+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism in the brain: How metabolism shapes microglial function.</a> Trends Neurosci. 43, 854-869 (2020).</li>
<li>Geric, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+during+microglia+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunometabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming during microglia activation.</a> Immunometabolism. 1, e190002(2019).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol. Cells. 47, 100095(2024).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+modulates+microglial+NLRP3+inflammasome+activity+through+mitophagy+in+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism modulates microglial NLRP3 inflammasome activity through mitophagy in Alzheimer’s disease.</a> J. Neuroinflammation. 21, 261(2024).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1+critically+controls+microglial+activation+through+facilitating+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1 critically controls microglial activation through facilitating glycolysis.</a> Mol. Neurodegener. 14, 2(2019).</li>
<li>Lu, J., Zhou, W., Dou, F., Wang, C., Yu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+sustains+microglial+metabolic+reprogramming+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">TRPV1 sustains microglial metabolic reprogramming in Alzheimer's disease.</a> EMBO Rep. 22, e52013(2021).</li>
<li>Orihuela, R., McPherson, C. A., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+M1%2FM2+polarization+and+metabolic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Microglial M1/M2 polarization and metabolic states.</a> Br. J. Pharmacol. 173, 649-665 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J. Neuroinflammation. 18, 129(2021).</li>
<li>Kaushik, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+glycolytic+metabolism+supports+transmigration+of+brain-infiltrating+macrophages+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enhanced glycolytic metabolism supports transmigration of brain-infiltrating macrophages in multiple sclerosis.</a> J. Clin. Invest. 129, 3277-3292 (2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-mediated+metabolic+reprogramming+shapes+distinct+microglia+functions+in+response+to+lipopolysaccharide+and%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">mTOR-mediated metabolic reprogramming shapes distinct microglia functions in response to lipopolysaccharide and.</a> Glia. 68, 1031-1045 (2020).</li>
<li>Montilla, A., Zabala, A., Matute, C., Domercq, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+metabolic+characterization+of+microglia+culture+in+a+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and metabolic characterization of microglia culture in a defined medium.</a> Front. Cell. Neurosci. 14, 22(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1M HEPES 해법</td><td>시그마 올드리치</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>1X HBSS</td><td>깁코와 nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 14175-079</td><td></td></tr><tr><td>2.5% 트립신</td><td>깁코와 nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 15090-046</td><td></td></tr><tr><td>2DG</td><td>밀리포어 시그마&nbsp;</td><td>D6134</td><td></td></tr><tr><td>항생제/항진열제&nbsp;</td><td>깁코</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>D & ndash; (+)포도당, 무수수산;</td><td>열과학 및 nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>A16828.36</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>깁코</td><td>그리고 nbsp; 11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>밀리포어 시그마&nbsp;</td><td>11284932001- 로슈</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>피셔브랜드</td><td>FB12999102</td><td></td></tr><tr><td>글루타맥스</td><td>깁코와 nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-락테이트 키트</td><td>앱캠</td><td>AB65330</td><td></td></tr><tr><td>LPS&nbsp;</td><td>시그마 올드리치</td><td>그리고 nbsp; L4391</td><td></td></tr><tr><td>MEM NEAA&nbsp;</td><td>깁코와 nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 11140-050</td><td></td></tr><tr><td>올리고마이신 A</td><td>밀리포어 시그마&nbsp;</td><td>495455</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>깁코와 nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 15240-062</td><td></td></tr><tr><td>pH 지시기 스트립</td><td>피셔브랜드</td><td>13-640-516</td><td></td></tr><tr><td>시호스 XFe24</td><td>애질런트 테크놀로지스</td><td>해당 없음</td><td>일반 명칭: 세포외 플럭스 분석기</td></tr><tr><td>Seahorse 24 V7 PS 세포 배양 마이크로플레이트</td><td>애질런트 해마</td><td>100777-004</td><td>일반명: 세포외 플럭스 세포 배양 마이크로플레이트</td></tr><tr><td>해마 분석 XF 캘리브랜트 버퍼 (pH 7.4)</td><td>애질런트 해마 &nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 100840-000</td><td>일반명: 세포외 플럭스 캘리브런트 버퍼</td></tr><tr><td>해마 분석법 XF DMEM 매체 (pH 7.4)</td><td>애질런트 해마 &nbsp; 그리고 nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 103575-100</td><td>일반명: 세포외 플럭스 분석 매체</td></tr><tr><td>Seahorse 세포외 플럭스 분석 키트</td><td>애질런트 해마 &nbsp;</td><td>102342-100</td><td>일반명: 세포외 플럭스 보정판 &nbsp;</td></tr><tr><td>나트륨 피루브산&nbsp;</td><td>깁코와 nbsp;</td><td>그리고 nbsp; 11360-070</td><td></td></tr></tbody></table>

세포외 플럭스 분석법을 이용한 1차 미세아교세포의 당화 연구

Investigating Glycolysis in Primary Microglia Using Extracellular Flux Assay

Microglia, the resident macrophage cells of the central nervous system, dynamically alter their metabolic programs in response to physiological and ...

investigating-glycolysis-primary-microglia-using-extracellular-flux

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

두뇌의 세포 이질에서 기본 microglia를 분리하는 것은 생리적 및 병리 학적 조건에 모두 자신의 역할을 조사하는 것이 필수적이다. 이 프로토콜은 기계적인 고립과 높은 수율과 높은 순도를 제공 혼합 세포 배양 기술에 대한 실용적 기본 microglial 세포에 대해...

신생아 쥐 뇌 조직의 혼합 Glial 세포 배양의 기본 Microglia 격리

이 프로토콜은 세포외 플럭스 분석을 통해 1차 백혈병 세포의 세포외 산성화율(ECAR) 및 산소 소비율(OCR)을 측정하기 위한 생화학적 접근 방식을 제공합니다. 이러한 세포의 대사 프로파일에 대한 평가는 세포의 요구를 특성화하는 데 도움이 되어 맞춤형 치료로 이어집니다.

Extracellular Flux Assay: 세포의 대사 프로파일을 측정하는 방법

대사 재프로그래밍은 M1 및 M2 대식세포 분극의 특성이자 전제 조건입니다. 이 원고는 마우스 골수 유래 대식세포에서 해당작용 및 미토콘드리아 기능의 기본 매개변수를 측정하기 위한 분석을 설명합니다. 이 도구는 특정 요인이 대식세포의 대사와 표현형에 어떤 영향을 미치는지 조사하는 데 적용할 수 있습니다.

실시간 세포 외 유출 분석을 사용하여 편광 M1과 M2 골수 유래 대 식세포의 대사 특성

해당작용은 여러 생물학적 시스템에서 정의하는 대사 마커입니다. H+의 세포외 플럭스를 측정하여 해당과정을 모니터링하는 것은 일반적이지만, 정량적이고 명확한 보정이 필요합니다. 여기에서는 세포 외 산성화의 호흡기 및 해당작용 원인을 구별하기 위해 세포 외 플럭스 데이터를 수집하고 수정하는 방법을 보여줍니다.

세포 외 산 생산의 측정 및 분석은 당분 속도를 확인하는

신진대사에 대한 연구는 면역학 연구와 점점 더 관련성이 높아지고 있습니다. 여기에서는 마우스 비장 세포와 T 및 B 림프구에서 해당작용 및 미토콘드리아 호흡을 측정하기 위한 최적화된 방법을 제시합니다.

최적화 된 프로토콜은 림프구에 해당 작용과 미토콘드리아 호흡을 분석하는

본 논문에서, 우리는 말초 혈액에서 분리된 1 차적인 인간 자연 킬러 (NK) 세포에 있는 글리코리시스 및 미토콘드리아 호흡을 측정하는 방법을 기술합니다, 휴식 또는 IL15 유도된 활성화에 따라. 설명된 프로토콜은 다른 사이토카인 또는 수용성 자극에 의해 활성화된 1차 인간 NK 세포로 쉽게 확장될 수 있었다.

인간 자연 킬러 세포 대사의 분석

여기에서는 유세포 분석을 사용하여 vGLUT1 양성 시냅스 및 pHRodo Red 표지 미처리 시냅토좀의 미세아교세포 삼킴을 정량화하는 두 가지 프로토콜을 제시합니다.

유세포분석을 사용한 시냅스 물질의 미세아교세포 삼킴 정량화

알코올 남용은 미토콘드리아 호흡 및 생체 에너지학의 억제로 인해 폐포 대식세포(AM) 면역을 손상시킵니다. 우리는 최근에 에탄올(EtOH) 노출이 AM에서 미토콘드리아 호흡에 대한 글루타민 의존성을 증가시킨다는 것을 입증했습니다. 본 명세서에서는 세포외 플럭스 바이오분석기를 사용하여 EtOH 처리된 AM에서 미토콘드리아 호흡을 위한 글루타민의 사용을 결정하기 위한 방법을 제공합니다.

Modulatic Flux Bioanalyzer를 사용하여 만성 에탄올에 노출된 폐포 대식세포의 연료 공급원으로서의 글루타민 평가

여기에서는 골수, 비장 및 경색된 심장에서 대식세포를 추출하고 이후에 살아있는 세포의 대사 플럭스를 평가하는 방법을 자세히 설명합니다.

비장 및 심장 대식세포와 골수 단핵구의 생체 외 대사 플럭스 분석

미세아교세포에서 정제된 미토콘드리아를 준비하고, N-글리칸 방출을 위한 미토콘드리아 단백질을 분리하고, 고해상도 정밀 질량 분석기 질량 분석기와 결합된 적외선 매트릭스 보조 레이저 탈착 전기 분무 이온화를 사용하여 세포 내 미토콘드리아 글라이칸을 신속하게 검출하기 위한 프로토콜이 개발되었습니다.

글라이칸 분석을 위한 Microglia의 미토콘드리아 제제

배우세요 세포외 플럭스 분석법을 이용한 1차 미세아교세포의 당화 연구 방법을. 신생아 마우스 대뇌 피질에서 분리한 미세아교세포의 실시간 대사 활성을 측정하여 염증 조건에서의 글리코리시스 변화를 정밀하게 분석할 수 있습니다.

세포외 플럭스 분석법을 이용한 1차 미세아교세포의 당화 연구

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