Name: 기능과 구조가 보존된 체 외 인간 낙액 조직을 이용한 전임상 접속 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 배우세요 체외 인간 낭액 조직을 이용한 전임상 관절염 연구 모델. JSAS 시스템은 생물학적 구조를 보존하며 염증 및 감염 자극에 대한 급성 반응을 분석합니다. 이 방법은 류마티스학 및 조직 공학 연구에 활용됩니다.

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<table><tbody><tr><td>10 cm Petri dishes</td><td>Corning</td><td>CLS430167</td><td></td></tr><tr><td>23srRNA RNAscope probe</td><td>ACD/Biotechne</td><td>468211</td><td></td></tr><tr><td>24 well plates</td><td>Life Sciences</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>3 mm biopsy punches</td><td>Integra</td><td>12460406</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conicals</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol (for sterilization)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Borrelia burgdorferi</td><td>ATCC</td><td>35210&nbsp;</td><td>최대 병원성을 위해 만기 지수 단계에서 사용되어야 함</td></tr><tr><td>BSK-H</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B8291</td><td></td></tr><tr><td>CD68 항체</td><td>Invitrogen</td><td>14-0688-82</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>CO2 tank (standard conditions)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate buffered saline (Ca-/Mg-)</td><td>Thermofisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>fetal bovine serum</td><td>Biotechne</td><td>S11150</td><td>열 활성화 로트: F22100</td></tr><tr><td>forceps (non-toothed)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hemostat</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Humidified cell incubator (standard conditions)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hypoxia incubator</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hypoxia tank (5% O2, 5% CO2, remainder N2, physiologic conditions)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IL-4 항체</td><td>Thermofisher</td><td>MA5-42470</td><td>1:100</td></tr><tr><td>iNOS 항체</td><td>Thermofisher</td><td>PA1-036</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipopolysaccharide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>low glucose DMEM (+Sodium pyruvate, +L-glutamine)</td><td>Life Technologies</td><td>11885084</td><td></td></tr><tr><td>MMP9 항체</td><td>Thermofisher</td><td>MA5-32705</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>Modular incubator chamber (hyperoxic conditions)</td><td>Emrbient, Inc</td><td>MIC-101</td><td></td></tr><tr><td>Monocyte chemoattractant protein 1</td><td>Peptrotech</td><td>300-04-20UG</td><td></td></tr><tr><td>N-acetyl cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td>각 실험마다 신선하게 제조해야 하며 7-7.4 pH의 등몰성 나트륨 탄산염으로 완충</td></tr><tr><td>OPG ELISA</td><td>Millipore</td><td>RAB0484</td><td>1:1 희석</td></tr><tr><td>Oxygen tank with liter per minute flow regulator</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDPN 항체</td><td>Invitrogen</td><td>14-9381-82</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Propidium Iodide</td><td>Thermofisher</td><td>J66764.MC</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope multiplex fluorescent V2 assay</td><td>ACD/Biotechne</td><td>323100</td><td></td></tr><tr><td>sRANKL ELISA</td><td>MyBioSource</td><td>MBS262624</td><td>1:1 희석</td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus USA 300 MRSA</td><td>ATCC</td><td>BAA-1717</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green</td><td>Thermofisher</td><td>S7563</td><td>10,000X 스톡</td></tr><tr><td>TNF 항체</td><td>Thermofisher</td><td>PA5-19810</td><td>1:100</td></tr><tr><td>transwell inserts - 0.4 um size</td><td>Millicell</td><td>PICM01250</td><td></td></tr><tr><td>transwell inserts - 5 um size</td><td>Corning</td><td>CLS3421</td><td></td></tr></tbody></table>

기능과 구조가 보존된 체 외 인간 낙액 조직을 이용한 전임상 접속 모델

A Pre-Clinical Model of Synovitis Using Ex vivo Human Synovial Tissue with Preserved Function and Architecture

산소 배양 조건 최적화
생리학적 조직 관류는 약 6%-8%의 산소이며, 세포 배양의 표준 배양 조건은 대기 중 산소 수준(~21%)입니다16. 비교하자면, 과산소 공급은 세포 배양 생존율을 높이거나 독성이 있을 수 있습니다. JSAS의 적절한 활용은 활막 조직의 생존 가능성을 조기에 판단하는 것을 필요로 했으며; 따라서 세포자살사는 0일, 1, 2일, 3일, 5일, 7일에 생리적 산소(5% O2), 대기/표준 산소(21% O2), 고산소(50% 산소2) 3일차에서 카스파제-3 면역조직화학 또는 면역형광 검사로 평가되었습니다. 아폽토시스는 표준 잠복 조건에서 3일째에 시작되어 5일째에 정점을 찍었습니다. 고산소 및 저산소 상태 모두에서 세포자국 세포 사멸은 1-2일에 시각화되었으며, 5일째에 정점에 달했습니다...

Arthritis is an inflammatory state within joints resulting in cartilage damage, pain, and loss of mobility. Recent advances in arthritis research ...

가장 주요한 질문은 감염 및 염증 자극에 대한 자가 시놉시스 면역 반응이 무엇이며, 이것이 시놉시스 구조의 변화에 어떻게 반영되는지 하는 것입니다. 내 주요 임상 및 연구 초점은 말기 RC 관절염을 가진 심한 비만 환자의 치료에 있습니다. 이 환자 집단에서 종종 의료적 소홀로 인해 질병에 대한 수술 치료 옵션을 찾는 데 어려움을 겪습니다.시작하기 위해 수술실에서 관절 개시술 및 해부를 수행합니다. 표준적인 내측 슬개 곁 접근법을 사용하고 심한 비만 및 말기 골관절염 환자에서 수술할 때 더 광범위한 노출을 수행합니다. 전방 시놉시스를 식별하고 전기 소작을 사용하여 조직을 해부합니다.염증의 징후가 있는지 무릎을 관찰하며, 비만 환자는 비만의 더 넓은 염증 효과와 상관관계가 있는 국소 염증 반응을 나타낼 수 있습니다. 무균 방식으로 시놉시스를 연구팀원에게 전달합니다. 차가운 Dulbecco's PBS 또는 DPBS로 채워진 시료 용기를 얼음에 놓고 총 무릎 관절 성형술 중에 취득한 인간 전방 시놉시스 조직을 용기로 옮깁니다.접시 로커에서 10분 동안 차가운 DPBS로 조직을 두 번 세척합니다. 다음으로 시놉시스를 2급 생물 안전 캐비넷 아래 10센티미터 이상의 무균 페트리 접시로 옮깁니다. 나트륨 피루브산과 L-글루타민을 함유한 저당 DMEM을 추가하여 접시를 절반까지 채웁니다.진주 같은 내막층으로 시놉시스 라이닝을 식별하되 이를 벗겨내지 않습니다. 최소 두 개의 기술적 반복을 위해 최소 3밀리미터의 생검 코어를 얻기 위해 필요한 도구를 배치합니다. 홍채 가위 또는 스칼펠을 사용하여 소작 측에서 여분의 지방 및 섬유 조직을 해부하여 시놉시스를 분리하고 전체적으로 약 4-5밀리미터의 조직 깊이를 유지합니다.필요에 따라 펠트리 접시 매체를 교체하여 시야 영역을 유지합니다. 시놉시스 라이닝이 코어 도구를 향하도록 조직을 위치시키고 비지배적인 손으로 포스펫 또는 혈관 클램프를 사용하여 조직을 안정화시킨 후 단단한 수직 압력을 가하고 부드럽게 비틀어 조직을 코어링합니다.약 10-15회 사용 후 또는 코어링 중 조직이 비틀리는 경우 특히 내막 라이닝 구조를 손상시키지 않도록 바이오 펀치를 교체합니다. 두 번째 페트리 접시를 열고 37도 섭씨로 온도를 조절한 10%FBS 함유 매체 5-10밀리리터를 채웁니다. 평평한 또는 이빨이 없는 포스펫을 사용하여 코어를 접시로 옮기고 1-2초 동안 부드럽게 흔들어 파편을 씻어냅니다.관절 공간 분석 시스템의 바닥 우물을 준비하기 위해 37도 섭씨로 온도를 조절한 10%FBS 함유 저당 DMEM을 600마이크로리터 추가합니다. 바닥 우물에 선택한 차량 대조 또는 처리 시약, 예를 들어 LPS 또는 MCP-1을 추가합니다. 원하는 실험 결과에 따라 트랜스웰 포어 크기를 선택하고 트랜스웰에 10%FBS 함유 저당 DMEM 300마이크로리터를 추가합니다.무균 포스펫을 사용하여 개별 조직 코어를 트랜스웰 매체에 부드럽게 옮기고 찢어지고 떠 있는 코어를 피합니다. 다음으로 조립을 37도 섭씨 및 5% 탄소 산화물의 인큐베이터에 8-72시간 동안 배치하여 수행할 다운스트림 분석에 따라 다릅니다. 시놉시스 조직을 10% 중성 완충 포르말린으로 고정합니다.그런 다음 조직을 염색하고 조직학적 분석을 위해 절단합니다. 헤마�

a-pre-clinical-model-synovitis-using-ex-vivo-human-synovial-tissue

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

우리는 응용 프로그램 제어 기계 부하 또는 영향의 후 그대로 murine 관절의 관절 표면에 세포 상해/죽음의 공간 범위를 평가 하는 방법을 제시. 관절염, 유전 요인 및 다른 로드 regimens 영향 chondrocytes 제자리에서 의 취약점을 조사 하기 위해이 메서드를 사용할 수 있습니다.

실시간 시각화 및 Chondrocyte 부상 때문에 완전히 그대로 Murine 연골 Explants 기계적 부하의 분석

여기에서, 우리는 소 무릎에서 연골 이식의 격리 및 배양을 설명하는 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 관절을 표적으로 하는 생물학적 자극 또는 새로운 치료법에 반응하여 조직 변화를 설명하기 위한 쉽고 접근가능한 도구를 제공한다.

소 무릎 이식에서 연골 리모델링의 전 생체 외 조직 문화 모델

여기에서, 우리는 뮤린 비장, 골수, 림프절 및 교압 조직 내의 엑스트라 세포 염색 분석체를 모두 사용하여 단세포/대식세포 및 T 세포 하위 세트를 식별하기 위해 상세하고 재현 가능한 유동 세포 측정 프로토콜을 설명하며, 골관절염의 확립된 수술 모델을 활용합니다.

골관절염 모델에서 뮤린 비장, 골수, 림프절 및 치압 조직 내의 면역 세포 하위 집합의 흐름 세포 분석

우리는 인간 무릎 관절의 연골, 뼈, 지방 패드 및 활막을 재현하는 데 사용되는 인간 중간엽 줄기 세포에서 4가지 유형의 조직을 생성하는 자세한 방법을 제공합니다. 이 4 개의 조직은 맞춤형 생물 반응기에 통합되고 미세 유체를 통해 연결되어 무릎 관절 온 칩을 생성합니다.

관절 질환 모델링 및 약물 테스트를 위한 무릎 관절 칩 생성

원자력 현미경 미세 압입과 관련된 가장 일반적인 문제를 식별하고 해결하기 위한 단계별 접근 방식을 제시합니다. 우리는 다양한 정도의 골관절염 유발 퇴행을 특징으로 하는 토착 인간 관절 연골 외식에 대한 새로운 문제를 예시합니다.

인간 관절 연골 외식물에 대한 원자력 현미경 기반 미세 압입의 실제 문제 해결

본 연구는 쥐의 염증성 관절염 조직으로부터 활막 대식세포 및 섬유아세포를 분리하기 위한 수정된 프로토콜을 제공한다.

쥐 관절염 조직에서 Primary Synovial Macrophages and Fibroblasts의 분리 및 배양

여기에서는 하중을 견디는 힘줄 코어 조직과 질병 및 부상에 의해 활성화된 세포 집단을 포함하는 외인성 구획 사이의 힘줄 세포 누화를 모방하는 조립체 모델 시스템을 제시합니다. 중요한 사용 사례로, 외인성 내피 세포의 질병 관련 활성화를 조사하기 위해 시스템을 배포하는 방법을 보여줍니다.

질병 및 복구에서 세포 누화를 조사하기 위한 힘줄 집합체 엔지니어링

본 연구에서는 SKG 마우스에서 CD4+ T 세포를 이식하여 류마티스 관절염(RA) 마우스 모델을 확립하는 프로토콜을 보고하며, 이를 통해 RA에 대한 면역학적 기전, 병리학적 진행 및 새로운 치료법 개발을 조사하기 위한 빠르고 신뢰할 수 있는 실험 도구를 제공합니다.

An Adoptive Transfer Model of Rheumatoid Arthritis in Mice

여기에서는 설치류에서 무릎 골관절염을 유발하는 신뢰할 수 있는 모델로서 전방십자인대(ACL)를 횡단하는 수술 방법과 무릎 활액 채취, 무릎 부종 측정 및 골관절염 중증도 평가를 위한 방법론을 설명합니다.

관절 염증 및 외상 후 골관절염을 연구하기 위한 설치류 모델의 전방십자인대 절개 및 활액 세척

유도 및 항원에 특정한 T 세포의 확장을위한 새로운 DC 독립적인 방법을 설명합니다. HLA A2 - IG 기반의 인공 항원 제시 세포 (aAPC)을 효율적으로 다양한 항원 특이성의 CTL 확장 HLA - A2 제한 펩티드와 함께로드됩니다. 이 기술은 CTL 기반 입양 immunotherapy에 대한 잠재력을 보유하고 있습니다.

효율에 대한 HLA - IG 기반 인공 항원 제시 세포 예 생체내</em인간 CTL의> 확장

배우세요 체외 인간 낭액 조직을 이용한 전임상 관절염 연구 모델. JSAS 시스템은 생물학적 구조를 보존하며 염증 및 감염 자극에 대한 급성 반응을 분석합니다. 이 방법은 류마티스학 및 조직 공학 연구에 활용됩니다.

기능과 구조가 보존된 체 외 인간 낙액 조직을 이용한 전임상 접속 모델

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