Name: 신생아 마우스 새끼의 구강 개비지와 사용 챔버를 이용한 장 장벽 무결성 기능 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: 배우세요 신생아 마우스 장 장벽 무결성 평가를 위한 경구 개비지 및 Ussing 챔버 기법. FITC-Dextran과 HRP를 활용한 투과성 측정으로 초기 발달 단계 장 기능 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Di Vincenzo, F., Del Gaudio, A., Petito, V., Lopetuso, L. R., Scaldaferri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+intestinal+permeability%2C+and+systemic+inflammation%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Intern+Emerg+Med%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, intestinal permeability, and systemic inflammation: A narrative review.</a> Intern Emerg Med. 19 (2), 275-293 (2024).</li>
<li>Mu, Q., Kirby, J., Reilly, C. M., Luo, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leaky+gut+as+a+danger+signal+for+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Leaky gut as a danger signal for autoimmune diseases.</a> Front Immunol. 8, 598(2017).</li>
<li>Sorini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+gut+barrier+integrity+triggers+activation+of+islet-reactive+T+cells+and+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Loss of gut barrier integrity triggers activation of islet-reactive T cells and autoimmune diabetes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (30), 15140-15149 (2019).</li>
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<li>Picco, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+gut+permeability+in+juvenile+chronic+arthritides%3A+a+multivariate+analysis+of+the+diagnostic+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Increased gut permeability in juvenile chronic arthritides: a multivariate analysis of the diagnostic parameters.</a> Clin Exp Rheumatol. 18 (6), 773-778 (2000).</li>
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<li>Kindgren, E., Ahrens, A. P., Triplett, E. W., Ludvigsson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+gut+microbiota+and+environment+associate+with+juvenile+idiopathic+arthritis+many+years+prior+to+disease+onset%2C+especially+in+genetically+vulnerable+children%5BTitle%5D)+AND+%22eBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Infant gut microbiota and environment associate with juvenile idiopathic arthritis many years prior to disease onset, especially in genetically vulnerable children.</a> eBioMedicine. 93, 104654(2023).</li>
<li>Borowitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+inflammatory+bowel+disease%3A+clues+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of inflammatory bowel disease: clues to pathogenesis.</a> Front Pediatr. 10, 1103713(2023).</li>
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<li>Francis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+studies+in+neonatal+mice+using+gavage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Probiotic studies in neonatal mice using gavage.</a> J Vis Exp. (143), e59074(2019).</li>
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<li>Thomson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ussing+chamber+system+for+measuring+intestinal+permeability+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">The Ussing chamber system for measuring intestinal permeability in health and disease.</a> BMC Gastroenterol. 19, 98(2019).</li>
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<li>Sjögren, E., Eriksson, J., Vedin, C., Breitholtz, K., Hilgendorf, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excised+segments+of+rat+small+intestine+in+Ussing+chamber+studies%3A+A+comparison+of+native+and+stripped+tissue+viability+and+permeability+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Excised segments of rat small intestine in Ussing chamber studies: A comparison of native and stripped tissue viability and permeability to drugs.</a> Int J Pharm. 505 (1), 361-368 (2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>10편의 DPBS 무첨가 MG</td><td>덜베코스</td><td>14200091</td><td></td></tr><tr><td>항HRP 항체</td><td>노르딕 바이오사이트</td><td>GTX10183</td><td>단클론 마우스 고추냉이 과산화효소 IgG [2H11]</td></tr><tr><td>쌍안경 루페</td><td>올림푸스&nbsp;</td><td>SZ61</td><td>사양은 필요 없습니다.</td></tr><tr><td>검은색 96웰 플레이트 평면 바닥</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>137101</td><td>플레이트는 반드시 검은색이어야 하며 형광 측정에 맞게 조정되어야 합니다. 읽을 때는 뚜껑을 열어야 합니다.</td></tr><tr><td>BSA</td><td>머크</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스</td><td>찰스 강</td><td>632C57BL/6J&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>머크</td><td>2382</td><td></td></tr><tr><td>클리어 96웰 클리어 플랫 바텀 하이 바인딩</td><td>코닝</td><td>9018</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-포도당</td><td>머크</td><td>G8270&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>증류된 수<서브>2</서브>O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-만니톨</td><td>머크</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>미세 겸자</td><td>FST</td><td>11445-12</td><td></td></tr><tr><td>파인 가위</td><td>FST</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>FITC-덱터른 4Kd</td><td>FD4</td><td>TdB 연구소</td><td>광분해에 민감합니다.</td></tr><tr><td>온열 패드</td><td>미네르브</td><td>20 031 01</td><td></td></tr><tr><td>HRP</td><td>머크</td><td>P8375</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2, 6H2O</td><td>머크</td><td>M2670&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>밀리-Q H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2300 이지마운트 유싱 시스템 및 회의실</td><td>생리학적 기구</td><td>EM6-C-CE</td><td>시스템, 챔버, 슬라이더가 모두 호환되어야 합니다.</td></tr><tr><td>P2306 우싱 챔버 슬라이더</td><td>생리학적 기구</td><td>PI-P2306</td><td>크기와 형태에 따라 다양한 슬라이더 모델이 제공됩니다.</td></tr><tr><td>QuantaBlu 플루오로생성 과산화효소 기질 키트</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>15169</td><td></td></tr><tr><td>원형 팁 재사용 공급 바늘</td><td>FST</td><td>18061-24</td><td>24 게이지, 팁 직경 1.25mm, 둥근 팁. 사용 전에 멸균수, 에탄올 70%로 세척하고 오토클레이션을 해야 합니다.</td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>머크</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>탄산나트륨</td><td>머크</td><td>S7795</td><td></td></tr><tr><td>분광광도계</td><td>테칸&nbsp;</td><td>스파크 10M</td><td>137101 검은색 판을 사용할 경우 상단 획득 기능이 있는 판 독자가 필요합니다.</td></tr><tr><td>트윈-20</td><td>머크</td><td>P7949</td><td></td></tr></tbody></table>

신생아 마우스 새끼의 구강 개비지와 사용 챔버를 이용한 장 장벽 무결성 기능 평가

Oral Gavage in Neonatal Mouse Pups and Functional Assessment of Gut Barrier Integrity Using Ussing Chambers

표준 곡선 및 우물 농도 정량화 판의 모든 웰에서 빈 칼의 평균 값이 차감되었습니다. 흡광도는 Y축에, 농도는 X축에 표시하여, GraphPad Prism의 "표준 곡선 보간" 기능을 사용해 표준 곡선을 만들었습니다. 모든 표준 점이 정렬되어 있을 경우, "선" 모델이 가장 좋은 결과를 제공합니다. 또는 "시그모이드, 4 PL, X는 집중" 모델은 비선형 표준 곡선 보간법으로 매우 유연하고 정확합니다(그림 6). Y축에 있는 샘플의 흡광도는 표준 값 아래에 붙여넣어, 결과 탭(그림 6)의 "보간된 X 평균값"에서 농도를 복원했습니다.
<img alt="그림 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69751/69751fig6v2....

Growing evidence underscores the importance of the first 1,000 days of life in shaping the gut-microbiome axis. This early-life window is critical in the ...

oral-gavage-neonatal-mouse-pups-functional-assessment-gut-barrier

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

수술 후 장폐색 (POI)가 증가 병적 상태와 장시간 입원으로 이어지는 복부 수술의 합병증입니다. 예방 또는 치료 전략이 심화 연구를 부족하기 때문에하는 것은 필요합니다. 따라서 우리는 POI의 pathophysiology를 조사하고 잠재적 인 치료 옵션을 연구하기위한 표준화하고 실현 가능한 마우스 모델을 만들었습니다.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

이 프로토콜은 장 장벽 기능의 생체 외 모델로 절제된 장 조직 제제 또는 "장 주머니"의 사용을 설명합니다. 이 모델은 소화기 질환의 동물 모델에서 특정 장 부위에서 상피 장벽과 점액 겔 층 모두의 무결성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

예 생체 내 창자 주머 니나는 위장 질환 모델에서 점막 투과성을 평가하는

이 연구는 gavaging 정확한 양의 신생아 쥐에 probiotics의 과정을 자세히 설명합니다. 실험 설정 포함 하도록 최적화 되었다 하지만 probiotic 주입, 관리의 방법 및 내장에 있는 박테리아의 정량화에 국한 되지 않습니다.

Gavage를 사용 하 여 신생아 쥐에 있는 Probiotic 연구

인트라비티 현미경 검사를 활용하여, 여기에 제시된 방법은 살아있는 동물에서 장 상피 세포 흘림의 실시간 시각화를 가능하게 합니다. 따라서, 마취마우스의 국소 염색장 점막(acriflavine 및 rhodamineB-dextran)은 공초점 현미경검사를 이용하여 단일 세포 해상도까지 심화된다.

장 내 투과성 및 상피 세포 흘리기 성능을 평가하기 위한 인트라바이탈 현미경 기반 접근법

Dysregulated 장 상피 장벽 기능 및 면역 반응은 생리적인 모형의 부족 때문에 제대로 조사되지 않는 선동적인 장 질병의 특징입니다. 여기서는 생체 내 점막 투과성 및 백혈구 모집을 연구하기 위해 잘 혈관화되고 외부화된 장 세그먼트를 사용하는 마우스 장 루프 모델을 설명합니다.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

장 상피는 영양 흡수뿐만 아니라 유해 물질에 대한 보호를 제공합니다. 정점-대부분의 상피 세포간 접합, 즉 타이트한 접합은 부세포 용질 및 이온 투과성을 조절한다. 여기에서, 점막 시트의 제조 및 어싱 챔버 기술을 사용하여 타이트한 접합부의 이온 선택성의 평가를 위한 프로토콜이 기재되어 있다.

챔버 기술을 사용하여 기본 조직의 장 타이트 접합 장벽 및 이온 투과성의 기능 평가

괴사 장염 (NEC)은 미숙아, 특히 매우 낮은 출생 체중 유아에서 자주 발생하는 가장 심각한 위장 (GI) 질병이며 사망률이 높고 불분명한 병인. NEC의 원인은 염증성 면역 규제 시스템 이상과 관련이 있을 수 있습니다. NEC 동물 모델은 NEC 질병 면역 연구를 위한 필수 도구입니다. NEC 동물 모델은 일반적으로 C57BL/6J 신생아 마우스를 사용; BALB/c 신생아 마우스는 거의 사용되지 않습니다. 관련 연구는 마우스가 감염될 때, Th2 세포 분화는 C57BL/6J 마우스에 비해 BALB/c 마우스에서 우세하다는 것을 보여주었습니다. 연구 결과는 NEC의 발생 그리고 발달이 T 도우미 타입 2 (Th2) 세포의 증가와 연관되고 일반적으로 감염을 동반한다는 것을 건의했습니다. 따라서, 본 연구는 신생아 BALB/c 마우스를 사용하여 NEC를 가진 아이들에서 관찰된 것과 유사한 임상 적 특성 및 장 병병리학적 변화를 가진 NEC 모델을 유도하였다. 추가 연구는 이 동물...

괴사 장염의 신생아 BALB/c 마우스 모델

소장이 다양한 크기의 미립자를 처리하는 방법을 연구하기 위해 우리는 소장 통과를 결정하기 위해 확립된 생체 내 방법을 수정했습니다.

내강 미립자의 쥐 소장 기계 감지 연구

본 연구에서, 플루오레세인-이소티오시아네이트 표지(FITC) 덱스트란을 경구 위관영양을 통해 마우스에 투여하여 생체 내 및 혈장 및 대변 샘플 모두에서 장 투과성을 평가합니다. 장 장벽 기능은 많은 질병 과정에서 영향을 받기 때문에 이 직접적이고 정량적인 분석은 다양한 연구 분야에서 사용될 수 있습니다.

Fluorescein-Isothiocyanate-labeled dextran을 사용한 생쥐의 장 장벽 무결성 평가

이 프로토콜은 괴사성 소장결장염(NEC)의 신생아 마우스 모델 및 신생아 쥐 소장에서 고유판 면역 세포의 후속 분리를 설명합니다.

면역 세포 프로파일링을 위한 괴사성 소장결장염 및 Lamina Propria 분리의 신생아 마우스 모델

이 프로토콜의 목표는 다양한 분자 크기의 형광 표지된 덱스트스트란을 생 체 내 치은염 표면에 국소적으로 도포한 후, 단일 광자 현미경 시스템을 이용한 체외 영상을 통해 쥐 치은상피 장벽의 무결성을 정량적으로 평가하는 표준화된 접근법을 제공하는 것입니다.

형광 추적체를 이용한 마우스 치은성 상피 장벽의 기능 평가

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