Name: SOD1-ASO의 요추 수막내 주사, 인간 SOD1-G93A ALS 마우스에서 정밀한 중추신경계 표적 지정과 예측 효능을 위한 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: 배우세요 SOD1-ASO 요추 수막내 주사법으로 ALS 마우스 모델에서 중추신경계 표적 지정 및 유전자 발현 저하를 효과적으로 수행하는 방법입니다. 이 기술은 재현성이 높고 임상적 관련성이 뛰어납니다.

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<table><tbody><tr><td>0.3 mL 29 G 1/2인치 인슐린 주사기 IT 주사용</td><td>스미스 메디컬</td><td>4429-3</td><td></td></tr><tr><td>직경 0.5 mm 멸균 드릴 버</td><td>파인 사이언스 툴스(FST) 또는 이에 상응하는 기관</td><td>1900705</td><td></td></tr><tr><td>5-0 프로린 모노필라멘트 봉합사</td><td>에티콘&nbsp;</td><td>8870H&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>알코올 면봉 검사</td><td>다이나렉스</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>알코올 면봉 검사</td><td>다이나렉스</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>진통제 - 부프레노르핀 서방형</td><td></td><td></td><td>처방전 필요</td></tr><tr><td>동물 클리퍼</td><td>발</td><td>08787-450A</td><td></td></tr><tr><td>응용 바이오시스템 대용량 cDNA 역전사 키트</td><td>피셔 사이언티브</td><td>43-688-14</td><td></td></tr><tr><td>비드 러프터 24 호모제나이저</td><td>옴니 인터내셔널, 주식회사</td><td>19-070</td><td></td></tr><tr><td>혈액 채취 및 혈청 분리관</td><td>벡턴 디킨슨 (BD)</td><td>365967</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘 이하이드레이트</td><td>JT 베이커</td><td>1335</td><td></td></tr><tr><td>디지털 주사기 펌프</td><td>하버드 장치</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>엘라 자동 면역분석 시스템</td><td>R& D 시스템즈</td><td>600-100</td><td></td></tr><tr><td>눈 연고-푸라루브</td><td>데크라</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>제노/그라인더</td><td>SPEX 샘플프렙</td><td>2010</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 건식 살균기</td><td>브레인트리 사이언티픽 또는 동등한 업체</td><td>GER 5287-120V</td><td></td></tr><tr><td>해밀턴 주사기 바늘 포함 (26s/2"/2 (포인트 스타일)</td><td>해밀턴</td><td>80300</td><td>26s/2"/2:&nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 26초: 26 G; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 길이 2인치; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 2: 포인트 스타일</td></tr><tr><td>경조직 균질화 혼합물 2.8mm 세라믹 (2 mL 강화 튜브) (50/pk)</td><td>피셔 사이언티브</td><td>50-280-9286</td><td>공급업체: Revvity Health Sciences Inc</td></tr><tr><td>온열 패드</td><td>K& H 제조</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>ICV 플랫폼</td><td>스톨팅</td><td>502063</td><td></td></tr><tr><td>청소 시스템이 포함된 이소플루란 챔버</td><td>베트에이킵</td><td>901820</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 히하이드레이트</td><td>EMD 케미컬</td><td>1.05832</td><td></td></tr><tr><td>메첸바움 가위</td><td>파인 사이언스 툴스(FST) 또는 이에 상응하는 기관</td><td>14016-14</td><td></td></tr><tr><td>마우스 GAPDH TaqMan 분석기 ID Mm99999915_g1</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>CMAP용 바늘 전극, 28 G</td><td>나투스 메디컬 (브랜드 테카)</td><td>#902-DMF25-TP</td><td></td></tr><tr><td>뉴트라젤: 완전 영양</td><td>바이오 서브</td><td>NGB-2</td><td></td></tr><tr><td>올센-헤가르 바늘 홀더</td><td>파인 사이언스 툴스(FST) 또는 이에 상응하는 기관</td><td>12502-12</td><td></td></tr><tr><td>폴록사머 188</td><td>머츨러</td><td></td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨</td><td>JT 베이커</td><td>3045</td><td></td></tr><tr><td>프리앰프 (CMAP용)</td><td>월드 프리시전 인스트루먼트(WPI)</td><td>SYS-DAM50</td><td></td></tr><tr><td>ProteinSimple pNFH 키트</td><td>R& D 시스템즈</td><td>SPCKB-PS-000519</td><td></td></tr><tr><td>프로비돈-아이오드 스왑스틱</td><td>다이나렉스</td><td>1201</td><td></td></tr><tr><td>QIAzol 용해 시약&nbsp;</td><td>치아겐</td><td>79306</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 12K Flex 시스템</td><td>응용 생명 시스템</td><td>4471087</td><td></td></tr><tr><td>스쿠풀라</td><td>피셔브랜드</td><td>01-257-567</td><td></td></tr><tr><td>시그널 v6.04</td><td>케임브리지 전자 디자인</td><td>일련번호 061144</td><td>CMAP 소프트웨어&nbsp;</td></tr><tr><td>소동물 구조실</td><td>Thermocare 휴대용 동물 중환자실 모델 FW-1</td><td>FW-1 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>디지털 디스플레이 콘솔이 있는 소형 동물 입체 프레임</td><td>KOPF</td><td>모델 940 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>SOD1 G93A 마우스</td><td>잭슨 연구소</td><td>스톡 # 004435</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>EMD 케미컬</td><td>1.16224</td><td></td></tr><tr><td>무수인산이염기나트륨</td><td>시그마 올드리치</td><td>55136</td><td></td></tr><tr><td>인산나트륨 단염성 이수화물</td><td>시그마 올드리치</td><td>3819</td><td></td></tr><tr><td>멸균 일회용 메스</td><td>메드 베트 인터내셔널 또는 동등 기관</td><td>MIL4410</td><td></td></tr><tr><td>멸균 드레이프</td><td>다이나렉스</td><td>4410</td><td></td></tr><tr><td>멸균 거즈 패드</td><td>다이나렉스 또는 동등한 제품</td><td>DRX-3354</td><td></td></tr><tr><td>멸균 생리식염수</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>14190094</td><td></td></tr><tr><td>멸균 수술용 장갑</td><td>앤셀 또는 이에 상응하는</td><td>20277290</td><td></td></tr><tr><td>자극 아이솔레이터 (CMAP용)</td><td>월드 프리시전 인스트루먼트(WPI)</td><td>SYS-A365D</td><td></td></tr><tr><td>스톨팅 마이크로 드릴&nbsp;</td><td>스톨팅</td><td>58610</td><td></td></tr><tr><td>수술용 곡선 겸자 (Graefe 겸자 - 티타늄)</td><td>파인 사이언스 툴스(FST) 또는 이에 상응하는 기관</td><td>11652-10</td><td></td></tr><tr><td>수술용 직선 겸자 (그라페 겸자 - 티타늄)</td><td>파인 사이언스 툴스(FST) 또는 이에 상응하는 기관</td><td>11650-10</td><td></td></tr><tr><td>수술용 테이프</td><td>다이나렉스 또는 동등한 제품</td><td>3572</td><td></td></tr><tr><td>진통제 피하 주사용 주사기</td><td>BD</td><td>309582</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan 패스트 어드밴스드 마스터 믹스</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>4444556</td><td></td></tr><tr><td>물 (밀리-Q)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>체중계</td><td>메틀러 톨레도 &nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 모델 XSR2002S</td><td>23-112795</td><td></td></tr><tr><td>야생형 C57BL/6J 마우스</td><td>잭슨 연구소</td><td>스톡 # 000664</td><td></td></tr></tbody></table>

sod1-aso의 요추 수막내 주사, 인간 sod1-g93a als 마우스에서 정밀한 중추신경계 표적 지정과 예측 효능을 위한 방법

Lumbar Intrathecal Injection of SOD1-ASOs for Precise CNS Targeting and Predictive Efficacy in Human SOD1-G93A ALS Mice

성체 마우스에서 척수액 내 투여의 정밀도와 효율성을 엄격히 특성화하기 위해, 우리는 먼저 뇌척수액 흐름과 조직 투과의 시각적 추적자로 에반스 블루 염료(0.5%)를 활용한 기초 검증 실험을 수행하였습니다. 성체 야생형 C57BL/6J 마우스(품종 #000664; 무게 25-30g)는 운동 인조를 제거하기 위해 산소 내 이소플루란(2-2.5%)으로 마취했으며, 요추 부위는 무균 조건에서 준비되었습니다. IT 주사는 20 μL, 30 μL, 50 μL의 단일 상승 용량으로 지주막하 공간에 요추 천자를 사용하여 용량/부피와 염색 강도 관계를 평가하였다. 주사 중 꼬리 움직임이나 음의 저항을 관찰하여 바늘 위치가 올바르게 확인되었습니다.
염색 투여 5분 이내에 쥐는 혈관에서 남은 염료를 제거하기 위해 차가운 인산염 완충 식염수(PBS)로 경관을 투여했습니다. 그 후 척수를 부드럽게 추출하여 표준 조명 아래 중립적인 배경 아래 촬영했습니다. 육안 검사 결과 염료를 받은 모든 쥐에서 에반스 블루가 등쪽에서 복측까지 일관되고 균일하게 분포되어 있음을 확인하였습니다. 주입량이 많을수록 전륜 꼬리 축을 따라 염료 포화도가 강해졌음과 상관관계가 있었으나, 20 μL 용량을 주입한 마우스도 강한 염색을 보였다. 반면, 에반스 블루 염료를 투여하지 않은 쥐(멸균 생리식염수 주입 대조군)는 척수 조직에서 눈에 띄는 색이나 배경 착색이 전혀 보이지 않았습니다(그림 1). 이 연구 결과는 쥐에 대한 IT 주입이 척수를 따라 빠르고 재현 가능한 용질 전달을 가능하게 함을 보여줍니다. 이 실험들의 한계는 염료 분포의 정량적 평가가 부족하고, ASO 투여에 사용되는 10 μL 주입 부피에서 염료 분포 분석이 없다는 점입니다. 그러나 인간 SOD1-G93A 마우스의 유전자 발현 수준에서 인간 SOD1 특이 유전자 발현 분석을 통해 후속 표적 참여 측정이 수행되었습니다. 이후 ASO 투여 실험에서 사용된 10 μL 주입량은 마우스에서 안전하고 잘 내약되는 용량을 보장하기 위해 선택되었으며, 이전 연구에 따르면 적절한 중추신경계 노출을 제공할 것으로 기대된다38.
이 해부학적 검증을 바탕으로, 우리는 SOD1-ALS 모델에서 검증된 치료 전략인 돌연변이 SOD1을 표적으로 하는 ASO를 이용한 IT 전달의 기능적 관련성을 평가하였습니다. 인간 돌연변이 SOD1 유전자를 보유한 헤미지지거 SOD1-G93A 형질전환 마우스는 예측 가능한 운동 신경 퇴행과 신경근 감소를 보여 확립된 전임상 모델입니다. 생후 5주 때, 증상 발현 전에 쥐들은 SOD1 특이적 ASO를 100 μg 농도의 10 μL에 단일 IT 볼루스를 투여받았습니다. 이 용량은 McCampbell 등(2018)이 보고한 ICV 투여를 이용한 이전 최적화 연구를 바탕으로 선정되었습니다. IT와 ICV 투여의 효능을 비교하기 위해, 별도의 그룹이 동일한 ASO 용량의 ICV 주사를 입체 유도 방식으로 받았습니다. 관제팀은 IT 경로를 통해 비활성 ASO(비표적 통제)를 받았습니다.
치료 5주(생후 10주)에 쥐들은 가벼운 이소플루란 마취 하에서 복합 근활동전위(CMAP) 검사를 받았습니다. 표준화된 좌골신경 자극 프로토콜로 유도된 뒷다리 근육의 CMAP 기록은 IT 및 ICV 치료 그룹 모두에서 비활성 ASO 처리 대조군에 비해 진폭이 유의미하게 보존되었음을 보여주었다(Tukey's 사후 검사를 통한 일방향 ANOVA &lt; 0.0001). 중요한 점은, 진폭 보존이 IT와 ICV 전달 방식 간에 유의미하게 차이가 없었다는 점(p &gt; 0.05)으로, 이는 유사한 신경근 보호 효과를 시사합니다(그림 2A).
신경 완전성을 나타내는 전신 바이오마커를 평가하기 위해, 고감도 전기화학발광 분석법을 사용하여 인산화된 신경섬유 중쇄(pNFH) 혈청 농도를 측정하였습니다. 주사 후 5주 시점에 채취된 혈액 샘플은 ASO 처리 마우스에서 차량 처리 대조군에 비해 pNFH 농도가 &gt;40% 감소한 것으로 나타났으며(p &lt; 0.0001), IT와 ICV 방식 간 유의한 차이는 관찰되지 않았습니다(그림 2B). 균일한 분자 바이오마커 반응은 전기생리학적 데이터를 뒷받침하며, IT 전달이 이 ALS 모델에서 신경퇴행성 과정을 효과적으로 완화함을 시사합니다.
분자 수준에서 SOD1-ASO의 표적 참여를 평가하기 위해, 해리된 경추 및 흉추 척수 조직에 대해 역전사 정량 PCR(RT-qPCR)을 수행하였습니다. 총 RNA는 컬럼 기반 프로토콜을 사용하여 높은 순도(A260/A280&gt;1.8)를 추출한 후, 무작위 헥사머 프라이밍을 이용한 cDNA 합성이 이루어졌습니다. GAPDH로 정규화된 인간 SOD1 전사체를 표적으로 한 정량적 PCR 증폭은 IT 전달 후 평균 60%, ICV 전달 후 35%의 다운 효과를 보였으며, 이는 비활성 ASO 대조군에 비해 유의미한 수치였다(양쪽 모두 p &lt; 0.0001). 전달 경로 간 직접 비교 결과, IT 전달 시 유의하게 더 큰 낙추 효과가 나타났으며(p &lt; 0.0001), 척수 직접적 접근을 통한 척수 내 표적 참여가 더 효과적임을 시사한다(그림 3). 다른 중추신경계 영역에서의 표적 참여를 평가하기 위한 추가 연구가 필요합니다.
이 종합적인 데이터는 IT 주사가 마우스 모델에서 중추신경계(CNS)에 ASO를 전달하는 정밀하고 재현 가능하며 최소 침습적인 기술임을 설득력 있게 입증합니다. IT 투여는 신경 기능 지속적 보존(CMAP), 질병 관련 바이오마커(pNFH)의 정규화, 표적 중추신경계 영역 내 인간 SOD1 전사체의 강력한 분자 녹다운 등 광범위한 결과 측정에서 ICV 전달과 동등한 치료 효능을 입증했습니다. 이러한 발견은 IT 전달이 CNS 표적 ASO 치료제의 임상적으로 번역 가능한 경로로서 ICV와 동등한 효능을 제공하면서도 절차적 단순성과 침습성이 감소함을 강조합니다. 따라서 IT와 ICV 전달은 CNS 표적 중재에 있어 동등하게 실현 가능한 접근법으로, 해부학적 접근성, 시술적 실현 가능성, 치료 맥락에 따라 전임상 환경에서 유연성을 제공합니다. 이로 인해 IT 딜리버리지는 미래 CNS 표적 치료에 유망한 번역 플랫폼으로 자리매김하고 있습니다. 번역 연구를 지원하기 위해, 우리는 뇌척수액 내 약동학적 분포, 다양한 중추신경계 영역, 표적 세포 흡수를 평가하기 위한 추가 전임상 연구를 형광 제자리 하이브리다이제이션이나 면역형광 기법과 같은 기법으로 수행할 것을 제안합니다.
<img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig1.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 1"> 
그림 1: 성체 쥐에서 테스칼 내 주사 후 에반스 블루 염료 분포의 시각화. 성체 마우스에 Evans Blue 염료(0.5%)를 직접 수막 내 주사(IT)로 투여하여 척수 분포를 질적으로 평가하였습니다. 각각 20 μL, 30 μL, 50 μL 세 가지 염료 부피가 별도의 실험군(n = 부피당 1마리)으로 투여되었습니다. 주사 후에는 척수를 채취하여 조직 전체의 염색 강도를 기준으로 염료 침투 여부를 평가했습니다. 척수 조직 이미지는 각 주입량마다 염료 확산 정도를 보여주며, 용량에 따라 척수 전반에 걸쳐 덮개와 염색 강도가 증가함을 보여줍니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<img alt="그림 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig2v2.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 2"> 
그림 2: SOD1 표적 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료는 쥐에서 운동 기능을 회복하고 병리적 신경섬유 수치를 감소시킵니다. 성체 SOD1-G93A 형질전환 마우스는 5주 주에 뇌간부(IT) 또는 뇌실내(ICV) 주사를 통해 활성 SOD1 표적 안티센스 올리고뉴클레오타이드(SOD1-ASO)를 단일 접종하거나, IT 주사를 통한 비활성 대조군 ASO를 투여받았습니다. 치료 효과는 치료 후 5주에 해당하는 생후 10주에 평가되었습니다. (A) 복합 근활동전위(CMAP) 기록을 통해 치료된 동물의 신경근 기능을 평가하였다. SOD1-ASO 처리 그룹(n=5 - 6개)은 대조군에 비해 CMAP 감소가 역전되어 기능 회복을 나타냈다. (B) 신경퇴행의 바이오마커인 인산화 신경섬유 중사슬(pNFH)의 말초 수준을 10주차에 채취한 혈청에서 정량화하였다(그룹당 n = 5 - 8개). SOD1-ASO 치료는 대조군에 비해 순환 pNFH 수치가 유의미하게 감소하여 질병 관련 신경 손상의 완화를 시사하였다. 모든 데이터는 평균 ± SD로 제시됩니다. 통계적 유의성은 일방향 분산분석(ANOVA)과 이어서 Tukey의 다중 비교 검정을 사용하여 산출되었으며, p값 ≤ 0.0001은 치료 그룹 간 강인한 차이를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig2v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<img alt="그림 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig3.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 3"> 
그림 3: SOD1-ASO 투여는 형질전환 중인 SOD1-G93A 마우스 척수에서 인간 SOD1 mRNA 발현을 유의미하게 억제합니다. 소모 1-G93A 형질 전환 마우스의 척수 조직 자궁경부/흉부 절편을 역전사 정량 중합효소 연쇄반응(RT-qPCR)을 이용한 소드1-G93A 형질전환 마우스의 척수 조직 자궁경부/흉부 절편을 역전사 정량 중합효소 연쇄반응(RT-qPCR)을 이용해 뇌 척수 조직의 표적 효율을 평가하기 위해, IT(IT) 또는 뇌실내(ICV) 주사를 통해 전달하였습니다. 비활성 ASO 처리군에서 인간 SOD1 전사체 수준은 발현과 비교해 정량화되고 정규화되었습니다. 그림은 각 처리군(n=5-7마리)에서 인간 SOD1 mRNA(GAPDH로 정규화됨)의 접힘 변화를 보여주며, SOD1-ASO 투여에 대한 반응에서 상당한 하향 조절을 보여줍니다. 데이터는 SD± 평균으로 제시됩니다. 그룹 간 통계적 차이는 일방향 분산분석(ANOVA)을 사용해 산출한 후 Tukey의 다중 비교 검정을 사용했으며, p값 ≤ 0.0001은 치료 그룹 간 강력한 차이를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>구성 요소</td>
			<td>FW</td>
			<td>추가량 (L 또는 kg당 기준)</td>
			<td>부대</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>인산나트륨 단염성 이수화물</td>
			<td></td>
			<td>0.034</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>무수인산이염기나트륨</td>
			<td>142</td>
			<td>0.111</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>염화나트륨</td>
			<td>58.44</td>
			<td>8.766</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>염화칼륨</td>
			<td>74.56</td>
			<td>0.224</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>염화칼슘 이하이드레이트</td>
			<td>147.02</td>
			<td>0.206</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>염화마그네슘 육수화물</td>
			<td></td>
			<td>0.163</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>물 (밀리-Q)</td>
			<td></td>
			<td>993</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>폴록사머 188</td>
			<td></td>
			<td>0.01</td>
			<td>g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: aCSF 구성.
보조 그림 1: 요추 추막내 주사를 위한 마우스 위치. 복부 아래에 놓인 곡선 주걱 또는 스쿠풀라가 척추를 굽히고 추간극을 넓혀줍니다. 주사는 척추의 내측 축을 따라 올바른 정렬을 유지하며 L4-L5 또는 L5-L6 부위를 목표로 합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
보조 파일 1: ASO 서열 및 화학. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/Supplementary%20File%201.pdf" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭해 주세요.</a>

SOD1-ASO의 요추 수막내 주사, 인간 SOD1-G93A ALS 마우스에서 정밀한 중추신경계 표적 지정과 예측 효능을 위한 방법

Intrathecal (IT) administration of central nervous system (CNS)-targeted therapeutics offers a minimally invasive route for direct drug delivery into the ...

lumbar-intrathecal-injection-sod1-asos-for-precise-cns-targeting

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

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본 연구의 목적은 성인 생쥐에서 새로운 subpial 유전자 전달 기술을 사용하여 척수 adeno-associated virus 9 (AAV9) 매개 유전자 전달의 효능과 안전성을 개발하고 검증하는 것이었다.

성인 쥐의 Subpial Adeno-associated Virus 9 (AAV9) 벡터 전달

여기에 우리가 작은 동물에 게 효율적인 adeno 관련 바이러스 전달 되도록 하 여 중앙에서 변환 효율 예측 점수 시스템 구축 바이러스 솔루션에서 1 %lidocaine 염 산 염을 사용 하 여 직접 intrathecal 사출 기법 제시 lidocaine에 의해 유도 된 과도 함의 정도 따라 신경 시스템.

성인 쥐에 있는 재조합 형 Adeno 관련 바이러스의 직접 Intrathecal 주입

여기서, 우리는 척추의 요추 내 공간에 카테터를 이식하여 쥐 중추 신경계에 약물을 전달하는 방법을 설명합니다. 우리는 안티 센스 올리고 뉴클레오티드의 전달에 초점을 맞추고, 이 방법은 뿐만 아니라 다른 치료 양식의 전달에 적합 하지만.

쥐 중추 신경계에서 안티 센스 올리고 뉴클레오티드의 내 전달

어린 쥐의 요추 수조에 주사를 놓는 수술 절차가 설명되어 있습니다. 이 접근법은 유전자 치료 벡터의 척수강내 전달에 사용되어 왔지만, 이 접근법은 세포 및 약물을 포함한 다양한 치료제에 사용될 수 있을 것으로 예상됩니다.

Intrathecal vector delivery in juvenile rats via lumbar cistern injection(요추 수조 주입을 통한 어린 쥐의 척수강내 벡터 전달)

요추 척추내 주사는 중추 신경계에 유전자 요법을 전달하기 위한 번역적으로 관련된 투여 경로를 나타냅니다. 신생아, 청소년 및 성인 마우스와 쥐의 요추 척추 내 주사에 대한 이 포괄적이고 표준화된 프로토콜은 연구자들이 전임상 유전자 치료 연구에 이 기술을 채택하도록 안내하는 것을 목표로 합니다.

마우스와 쥐에서 중추 신경계 표적화를 위한 유전자 치료 벡터의 요추 내 주입

배우세요 SOD1-ASO 요추 수막내 주사법으로 ALS 마우스 모델에서 중추신경계 표적 지정 및 유전자 발현 저하를 효과적으로 수행하는 방법입니다. 이 기술은 재현성이 높고 임상적 관련성이 뛰어납니다.

SOD1-ASO의 요추 수막내 주사, 인간 SOD1-G93A ALS 마우스에서 정밀한 중추신경계 표적 지정과 예측 효능을 위한 방법

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