Name: 마우스 각막에서 단일 세포 현탁액을 채취하는 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:33:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: 배우세요 마우스 각막에서 고품질 단일 세포 현탁액을 분리하는 방법입니다. 콜라게나제 A와 트립신-EDTA를 사용한 순차적 효소 소화로 세포 생존율 94.6%와 우수한 RNA 품질을 확보하여 단일 세포 RNA 시퀀싱 및 유세포 분석에 적합합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+cornea%3Astructure%2C+function%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Overview of the cornea:structure, function, and development.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).</li>
<li>Delmonte, D. W., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the cornea.</a> J Cataract Refract Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+management%3Atargeting+the+ocular+surface+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Dry eye management:targeting the ocular surface microenvironment.</a> Int J Mol Sci. 18 (7), 1398(2017).</li>
<li>Dou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identity+of+human+limbal+heterogeneity+involved+in+corneal+homeostasis+and+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Molecular identity of human limbal heterogeneity involved in corneal homeostasis and privilege.</a> Ocul Surf. 21, 206-220 (2021).</li>
<li>Adan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3Abasic+principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry:basic principles and applications.</a> Crit Rev Biotechnol. 37 (2), 163-176 (2017).</li>
<li>Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+technologies+and+bioinformatics+pipelines%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines.</a> Exp Mol Med. 50 (8), 1-14 (2018).</li>
<li>Altshuler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+limbal+epithelial+stem+cell+populations+mediate+corneal+homeostasis+and+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Discrete limbal epithelial stem cell populations mediate corneal homeostasis and wound healing.</a> Cell Stem Cell. 28 (7), 1248-1261.e8 (2021).</li>
<li>Kaplan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+transcriptome+helps+define+the+limbal%2Fcorneal+epithelial+stem%2Fearly+transit+amplifying+cells+and+how+autophagy+affects+this+population%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA transcriptome helps define the limbal/corneal epithelial stem/early transit amplifying cells and how autophagy affects this population.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (10), 3570-3583 (2019).</li>
<li>Collin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+cell+atlas+of+human+cornea+that+defines+its+development%2C+limbal+progenitor+cells+and+their+interactions+with+the+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A single cell atlas of human cornea that defines its development, limbal progenitor cells and their interactions with the immune cells.</a> Ocul Surf. 21, 279-298 (2021).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+method+for+achieving+a+single-cell+suspension+from+mouse+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Optimization of method for achieving a single-cell suspension from mouse corneas.</a> Exp Eye Res. 233, 109544(2023).</li>
<li>Espana, E. M., Birk, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition%2C+structure+and+function+of+the+corneal+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Composition, structure and function of the corneal stroma.</a> Exp Eye Res. 198, 108137(2020).</li>
<li>Topouzi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+isolation+and+3D+culture+of+dermal+papilla+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods for the isolation and 3D culture of dermal papilla cells from human hair follicles.</a> Exp Dermatol. 26 (6), 491-496 (2017).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+amniotic+membrane+de-epithelialization+method+on+its+biological+properties+and+ability+to+promote+limbal+epithelial+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of amniotic membrane de-epithelialization method on its biological properties and ability to promote limbal epithelial cell culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 3072-3081 (2013).</li>
<li>Hewett, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+endothelial+cells+from+micro-+and+macro-vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels.</a> Methods Mol Biol. 1430, 61-76 (2016).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+small+slow-cycling+Langerhans+cells+in+the+limbal+basal+epithelium+that+express+ABCG2%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Existence of small slow-cycling Langerhans cells in the limbal basal epithelium that express ABCG2.</a> Exp Eye Res. 84 (4), 626-634 (2007).</li>
<li>Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+to+isolate+mouse+limbal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 212, 108767(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>알렉사 플루어 594 당나귀 안티래빗</td><td>앱캠</td><td>ab150064</td><td></td></tr><tr><td>항케라틴</td><td>앱캠</td><td>AB230175</td><td></td></tr><tr><td>항판사이토케라틴</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>AE1/AE3, 알렉사 플루어TM 488</td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브 살균기</td><td>안셴</td><td>LDZH-100KBS</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 V</td><td>솔라비오</td><td>A8020</td><td></td></tr><tr><td>셀 필터</td><td>네스트</td><td>258369</td><td>40 & mu; m</td></tr><tr><td>원심 기계</td><td>에펜도르프 AG</td><td>22331 함부르크</td><td></td></tr><tr><td>콜라게나제 A</td><td>로슈</td><td>10103578001</td><td></td></tr><tr><td>공초점 현미경</td><td>그리고 nbsp; 오버코헨</td><td>자이스 LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>카운팅 플레이트</td><td>마리엔펠트</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>원심관</td><td>네스트</td><td>620611</td><td>2mL, 50mL</td></tr><tr><td>커버슬립</td><td>마리엔펠트</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>다피</td><td>솔라비오</td><td>C0065</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>칼 자이스</td><td>VISU150</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp; 미디어</td><td>깁코</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>솔라비오</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>태아들 &nbsp; Bovine&nbsp; 세럼</td><td>깁코</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>하이드로코르티손</td><td>솔라비오</td><td>IH0100</td><td></td></tr><tr><td>그</td><td>깁코</td><td>23337619</td><td></td></tr><tr><td>쥐 표피 성장 인자</td><td>인비트로젠</td><td>PMG8041</td><td></td></tr><tr><td>안과 외과 및 nbsp; 겸자</td><td>두모트</td><td>0208-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>안과 외과 가위</td><td>FST</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>오븐</td><td>아이사이트</td><td>DH6000 II</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 & 스트렙토마이신</td><td>깁코</td><td>15070063</td><td>100mL</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>네스트</td><td>705201</td><td>60mm</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>솔라비오</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>온도 조절 인큐베이터</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>3111</td><td></td></tr><tr><td>트라이톤-X 100</td><td>솔라비오</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루 &nbsp;</td><td>솔라비오</td><td>T8070</td><td></td></tr><tr><td>트립신/EDTA&nbsp;</td><td>깁코</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>초청정 테이블</td><td>유치</td><td>VS-840-2</td><td></td></tr><tr><td>4% 파라포름알데히드</td><td>솔라비오</td><td>P1110</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 각막에서 단일 세포 현탁액을 채취하는 프로토콜

A Protocol for Harvesting Single-cell Suspension from Mouse Corneas

As the outermost layer of the eyeball, the cornea plays a critical role in maintaining ocular surface homeostasis and vision. Recent advances in ...

a-protocol-for-harvesting-single-cell-suspension-from-mouse-corneas

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 마우스 splenocytes의 단일 셀 suspensions를 준비하는 gentleMACS의 Dissociator를 사용하여 자동 조직 분리에 대한 간단한 시간 절약 기법을 설명합니다.

gentleMACS Dissociator과 마우스 비장에서 단일 셀 Suspensions의 준비

특정 조직 유형의 세포를 Dissociating하면 조직 aggitation에 대한 특정 매개 변수가 가능한, culturable 세포의 높은 볼륨을 얻기 위해 필요합니다. Miltenyi gentleMACS Dissociator은 간단하고 실용적인 프로토콜이 작업을 최적화합니다. 이 발행물에서 nerual 조직이 장치의 사용이 설명되어 있습니다.

마우스 신경 조직에서 단일 셀 Suspensions의 생성

이 비디오에서는, 우리는 마우스 눈 ciliary 상피에서 망막 줄기 세포를 분리하고 clonal 망막 분야를 형성하는 문화에서 그들을 성장하는 방법을 보여줍니다 것입니다. 절연되는 분야는 줄기 세포의 추기경 속성을 가지고 : 자기 갱신과 multipotentiality.

마우스 아이의 망막 줄기 세포의 분리

이 비디오는 쥐의 망막에서 분리된 Müller glial (MG) 세포의 배양을 보여줍니다. 망막은 소화 효소를 사용하여 단세포 현탁액으로 해리됩니다. 그런 다음 세포는 MG 세포 증식과 신경 세포 사멸을 촉진하는 성장 인자를 가진 배지에서 성장합니다. 파시에이징(passaging) 과정에서 죽은 신경세포를 제거하고 MG 세포를 성장시켜 추가 분석을 진행합니다.

마우스 망막에서 얻은 Müller Glial 세포 배양 확립

이 비디오는 유세포 분석을 사용하여 쥐의 원발성 망막 신경절 세포(RGC)를 분리하는 절차를 보여줍니다. 이 방법은 신경퇴행성 질환에서 기능적 망막 신경절 세포의 상실로 인한 시력의 주요 저하를 더 잘 이해하는 것을 목표로 망막 신경절 세포에 대한 향후 연구를 가능하게 합니다.

형광 활성화 세포 분류를 사용한 쥐 망막 신경절 세포 분리

피부는 복잡한 면역 세포 네트워크의 본거지입니다. 우리는 단일 세포 현탁액을 얻고 유세포 분석을 통해 피부에 거주하는 다양한 백혈구 집단을 분석하기 위해 동물의 신체의 여러 부분에서 마우스 피부를 소화하기 위한 효율적인 방법론을 설명합니다.

다른 마우스 피부 지역에서 Cytofluorimetric 분석을위한 단일 세포 현탁액의 준비

수백만 명의 사람들이 망막 퇴행성 질환으로 고통 받아 돌이킬 수없는 실명을 경험합니다. 이 질병의 많은 공통점은 망막 신경절 세포 (RGCs)의 소실이다. 이 상세한 프로토콜은 유동 세포 계측법을 이용한 양성 및 음성 선택에 의한 1 차 쥐 RGC의 분리를 기술합니다.

유동 세포 계측법에 의한 일차 망막 신경절 세포 (RGCs)의 분리

망막 안료 상피 (RPE)은 눈의 다기능 상피가 이다. 여기 선물이 murine RPE에서 파생 하는 기본 세포 배양을 설정 하는 프로토콜.

마우스 망막 안료 상피에서 1 차 셀 문화

이 프로토콜의 목표는 분자 생물학, 생화학, 형광 활성화 세포 선별 및 1 차 체외 용도 (예를 들어, 클로노겐성)와 같은 다양한 다운스트림 응용 을 위해 성인 마우스의 등쪽 피부로부터 표피 각질 세포를 분리하는 것입니다. 각질 세포).

마우스 표피 각질 세포와 체외 클로노겐 문화의 격리

이 프로토콜은 세포 수율, 순도 및 생존성에 최적화된 뮤린 출생후 망막 내피 세포의 단리를 위한 방법을 설명한다. 이 세포는 차세대 시퀀싱 접근법에 적합합니다.

차세대 염기서열분석을 위한 뮤린 망막 내피 세포의 분리

망막 색소 상피(RPE)는 맥락막과 망막 사이의 중요한 장벽 역할을 하여 광수용체와 같은 망막 세포 유형의 건강과 기능을 촉진합니다. 여기에서, 우리는 성인 쥐 RPE를 분리하고 배양하기 위한 간단하고 효과적인 프로토콜을 설명합니다.

A Simplified Method for Isolation and Culture of Retinal Pigment Epithelial Cells from Adult Mice(성인 마우스의 망막 색소 상피 세포의 분리 및 배양을 위한 간소화된 방법)

배우세요 마우스 각막에서 고품질 단일 세포 현탁액을 분리하는 방법입니다. 콜라게나제 A와 트립신-EDTA를 사용한 순차적 효소 소화로 세포 생존율 94.6%와 우수한 RNA 품질을 확보하여 단일 세포 RNA 시퀀싱 및 유세포 분석에 적합합니다.

마우스 각막에서 단일 세포 현탁액을 채취하는 프로토콜

더 많은 동영상 탐색