용매 주조 기법으로 제조된 용해형 마이크로니들 어레이 패치와 마이크로니들 기반 생체의학적 장치의 필수 특성 분석

저희 연구는 주로 나노 및 마이크로 시스템(예: 마이크로니들 기반 장치)을 이용한 피부 약물 전달 최적화에 중점을 둡니다. 이 연구는 용해하는 마이크로바늘을 준비하는 실현 가능하고 재현 가능한 방법을 제시합니다. 우선, DMAP의 구성 물질을 적절한 양의 물에 녹여 수용성 콜로이드 분산을 준비합니다.

혼합물을 격렬하게 저어 균일한 분산을 얻으세요. 폴리머를 하룻밤 동안 최소한으로 저어 완전히 확산시키고, 이 긴 교반 시간 동안 공기 방울이 흩어지도록 하세요. 기포가 계속된다면, 1000G에서 25도 섭씨에서 5분간 고분자 분산을 원심분리합니다.

원하는 농도로 화물을 고분자 분산에 첨가하고, 새로운 기포가 섞이지 않도록 균질해질 때까지 적당히 저어줍니다. 이제 몰드를 웰에 넣기 위해 모델링 클레이나 덴탈 시멘트를 사용하고, PDMS 몰드를 12웰 플레이트에 버립니다. 다음으로, 약물 가재 폴리머 블렌드 20마이크로리터를 PDMS 몰드에 주조합니다.

판을 원심분리기에 넣고, 3000G에서 25도 섭씨에서 5분간 돌립니다. 이제 판을 180도 돌려서 원심분리를 반복해서 바늘 모양의 공동이 모두 채워지도록 하세요. 그 후 피펫을 사용해 몰드에서 과도한 약물 중재 분산물을 조심스럽게 제거합니다.

몰드 내 약물 가재 분포물을 건조하기 위해 600밀리바 진공 상태에서 30분간 25도 섭씨 온도에서 건조합니다. 약물이 없는 고농축 고분자 분산물을 준비하여 DMAP 장치의 베이스 플레이트를 형성합니다. 사용 전에 분산이 균일한지 확인하세요.

다음으로, 약물 없는 고분자 분산액 50마이크로리터를 PDMS 몰드에 주조합니다. 판을 원심분리기에 넣고 두 번 회전시키며, 중간 지점 판 회전을 180도 포함합니다. 원심분리 후에는 각 몰드에 100마이크로리터의 분산액을 추가하고, 12시간 후 베이스 플레이트에 추가로 50마이크로리터를 추가로 투여합니다.

DMAP를 PDMS 몰드에 넣어 실온에서 3일에서 5일간 건조 밀봉 건조제에 넣어 건조시킵니다. PDMS 몰드에서 DMAP를 조심스럽게 핀셋을 분리하세요. 또는 DMAP를 몰드에서 스카치 셀룰로오스 테이프로 떼어내세요.

양압 방법에서는 약물 가재 폴리머 블렌드 150마이크로리터를 PDMS 몰드에 주조한 후 압력 탱크에 넣습니다. 압력 탱크에 공기를 채워 3바에서 4바 사이의 압력에 도달하세요. 이 압력을 최소 15분 이상 유지하세요.

적절한 확대 확대를 적용한 마이크로 카메라를 사용해 DMAP를 시각화하여 바늘 모양 돌출을 구분하세요. 초점을 조절해 개별 미세바늘을 명확히 식별하세요. 다음으로, DMAP를 지지 장치에 부착하여 광학 현미경으로 미세한 바늘 모양의 돌출과 길이를 시각화합니다.

DMAP의 기계적 특성을 평가하기 위해 상용 DMAP 어플리케이터에 장치를 장착하세요. 어플리케이터를 스테인리스 평평한 표면에 30초간 눌러주세요. 압축 후에는 마이크로바늘 모양의 돌출 길이를 기록하고, 압축 전후 길이를 비교하여 변형 비율을 계산합니다.

그 후, 올레핀 소재로 만든 열가소성 시트를 기반으로 한 대리 인공 피부 방법을 사용하여 DMAP의 예비 삽입 용량을 결정합니다. DMAP 장치를 스테인리스 스틸 표면에 적용한 동일한 압축 조건을 사용하여 8개의 결합된 판에 압축합니다. 이제 이전에 절제하고 신중하게 다듬은 인간, 돼지 또는 설치류 피부 제거 도구를 사용해 DMAP의 체외 삽입 능력을 측정합니다.

피부를 충분한 물에 1분에서 2분 정도 담가서 깨끗이 씻어내세요. 깨끗한 피부 엑스플랜트를 알루미늄 호일로 감싼 폼 재질 위에 올려놓고, 각질층 면이 위를 향하게 하세요. 앞서 설명한 동일한 압축 조건으로 삽입을 진행하세요.

마이크로바늘 끝이 녹을 때까지 DMAP를 피부에 삽입한 채 두고, 녹는 동안 기기가 피부와 접촉한 상태를 관찰하세요. 프란츠 확산 세포 설정을 사용하여 체외 약물 피부 침착 및 흡수를 규명합니다. 앞서 설명한 다듬기 및 세척 절차로 피부 제거물을 준비하고, DMAP를 피부 구조에 30초간 삽입하세요.

프란츠 확산 세포의 공여 챔버를 적절한 양의 시아노아크릴레이트를 사용해 피부에 접착합니다. 접착제가 완전히 마르도록 한 후, 적절한 클램프를 사용해 피부 기증자 챔버 복합체를 수용체 챔버에 부착합니다. 마지막으로, 표준 확산 셀 프로토콜에 따라 샘플링을 진행하세요.

제조된 DMAP는 균질한 외관을 보였으며, 마이크로바늘과 유사한 돌출부가 성공적으로 형성되었고, 색료는 돌기 내에 국소적으로 존재했으며, 바닥판에는 약물이 남아 있지 않았습니다. 광학 현미경 검사 결과, 마이크로바늘과 유사한 돌출부는 끝이 날카롭고 압축 전에는 변형이 없음을 보여주었다. 압축 후, 미세바늘 모양의 돌출부에서 구조의 눈에 띄는 변형이 나타났다.

인공 피부 모델에서 DMAP는 열가소성 시트를 성공적으로 관통하여 눈에 띄는 구멍을 만들었습니다. 열가소성 모델의 각 층에 생긴 구멍 수는 마이크로니들 삽입 깊이와 상관관계가 있었습니다. 체외 생쥐 피부 제거 검사에서 삽입 후 내부 피부층이 점진적으로 죽음을 보였으며, 이는 시간이 지남에 따라 DMAP 해체가 이루어진 것과 일치합니다.

에오신 헤마톡실린 염색을 이용한 조직학적 검사, 피부 부위에 미세바늘 같은 돌기가 삽입된 것이 확인됨. 프란츠-확산 세포 장치를 사용하여 피부 노출을 통한 약물 확산을 평가했으며, 기증 챔버, 피부 및 수용체 챔버를 명확히 시각화하였습니다. 이 프로토콜은 용해하는 마이크로니들 장치를 제작하는 데 있어 기초 지침을 제공하여 연구자들이 그 설계, 성능 및 생의학 응용 가능성을 탐구할 수 있도록 합니다.

주요 과제는 화물이 고분자 매트릭스와 호환되도록 하는 것입니다. 특정 화물은 재료 특성에 방해가 되거나 마이크로니들 성능을 저해할 수 있습니다. 향후 연구에서는 이 프로토콜을 특정 약물과 고분자에 맞게 조정하여 마이크로바늘 준비를 최적화하고, 치료 및 생의학적 용도로 적용 범위를 확장할 수 있습니다.