Name: 초파리 배아 상피에서 코어 주름 부분 격지 접합 단백질을 규명하기 위한 면역염색 및 염료 침투 실험 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 배우세요 Drosophila 초파리 배아 상피에서 주름 격지 접합 단백질의 구조와 차단 기능을 면역염색 및 염료 침투 실험으로 평가하는 방법을. 이 기술은 유전자 기능 분석에 필수적입니다.

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<ol><li>Farquhar, M. G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+complexes+in+various+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Junctional complexes in various epithelia.</a> J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).</li>
<li>Lord, B. A., DiBona, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+septate+junction+in+the+regulation+of+paracellular+transepithelial+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of the septate junction in the regulation of paracellular transepithelial flow.</a> J. Cell Biol. 71 (3), 967-972 (1976).</li>
<li>Noirot-Timothée, C., Smith, D. S., Cayer, M. L., Noirot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junctions+in+insects%3A+comparison+between+intercellular+and+intramembranous+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Septate junctions in insects: comparison between intercellular and intramembranous structures.</a> Tissue Cell. 10 (1), 125-136 (1978).</li>
<li>Rouka, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+septate+junction+beyond+barrier+function%3A+review+of+the+literature%2C+prediction+of+human+orthologs+of+SJ-related+proteins+and+identification+of+protein+domain+families%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila septate junction beyond barrier function: review of the literature, prediction of human orthologs of SJ-related proteins and identification of protein domain families.</a> Acta Physiol. 231 (1), e13527(2021).</li>
<li>Poodry, C., Schneiderman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+developing+leg+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux+Arch.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the developing leg of Drosophila melanogaster.</a> Roux Arch. Dev. Biol. 166, 1-44 (1970).</li>
<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+cellular+junctions+in+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The development of cellular junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161 (2), 563-596 (1994).</li>
<li>Rice, C., De, O., Alhadyian, H., Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+junction%3A+new+insights+into+non-occluding+roles+for+septate+junction+proteins+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding the junction: new insights into non-occluding roles for septate junction proteins during development.</a> J. Dev. Biol. 9 (1), 11(2021).</li>
<li>Baumgartner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+neurexin+is+required+for+septate+junction+and+blood-nerve+barrier+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function.</a> Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).</li>
<li>Fehon, R. G., Dawson, I. A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+homologue+of+membrane-skeleton+protein+4.1+is+associated+with+septate+junctions+and+is+encoded+by+the+coracle+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A Drosophila homologue of membrane-skeleton protein 4.1 is associated with septate junctions and is encoded by the coracle gene.</a> Development. 120 (3), 545-557 (1994).</li>
<li>Hall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroglobulin+complement-related+%28Mcr%29+encodes+a+protein+required+for+septate+junction+organization+and+paracellular+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macroglobulin complement-related (Mcr) encodes a protein required for septate junction organization and paracellular barrier function in Drosophila.</a> Development. 141, 889-898 (2014).</li>
<li>Nelson, K. S., Furuse, M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+claudin+Kune-kune+is+required+for+septate+junction+organization+and+tracheal+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Drosophila claudin Kune-kune is required for septate junction organization and tracheal tube size control.</a> Genetics. 185 (3), 831-839 (2010).</li>
<li>Paul, S. M., Ternet, M., Salvaterra, P. M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+is+required+for+septate+junction+function+and+epithelial+tube-size+control+in+the+Drosophila+tracheal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Na⁺/K⁺-ATPase is required for septate junction function and epithelial tube-size control in the Drosophila tracheal system.</a> Development. 130 (20), 4963-4974 (2003).</li>
<li>Nilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((coiled+and+crimpled+are+three+Ly6-like+proteins+required+for+proper+localization+of+septate+junction+components%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">coiled and crimpled are three Ly6-like proteins required for proper localization of septate junction components.</a> Development. 137 (14), 2427-2437 (2010).</li>
<li>Tiklova, K., Senti, K. A., Wang, S., Gräslund, A., Samakovlis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+septate+junction+assembly+relies+on+melanotransferrin+iron+binding+and+endocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial septate junction assembly relies on melanotransferrin iron binding and endocytosis in Drosophila.</a> Nat. Cell Biol. 12 (11), 1071-1077 (2010).</li>
<li>Bilder, D., Schober, M., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+activity+of+PDZ+protein+complexes+regulates+epithelial+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated activity of PDZ protein complexes regulates epithelial polarity.</a> Nat. Cell Biol. 5 (1), 53-58 (2003).</li>
<li>Woods, D. F., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discs-large+tumor+suppressor+gene+of+Drosophila+encodes+a+guanylate+kinase+homolog+localized+at+septate+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The discs-large tumor suppressor gene of Drosophila encodes a guanylate kinase homolog localized at septate junctions.</a> Cell. 66 (3), 451-464 (1991).</li>
<li>Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+play+essential+roles+in+morphogenesis+throughout+embryonic+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins play essential roles in morphogenesis throughout embryonic development in Drosophila.</a> G3 (Bethesda). 6 (8), 2375-2384 (2016).</li>
<li>Genova, J. L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglian%2C+Gliotactin%2C+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+are+essential+for+septate+junction+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuroglian, Gliotactin, and the Na⁺/K⁺-ATPase are essential for septate junction function in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 161 (5), 979-989 (2003).</li>
<li>Ward, R. E., Lamb, R. S., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+functional+domain+of+Drosophila+coracle+is+required+for+localization+at+the+septate+junction+and+has+membrane-organizing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved functional domain of Drosophila coracle is required for localization at the septate junction and has membrane-organizing activity.</a> J. Cell Biol. 140 (6), 1463-1473 (1998).</li>
<li>De, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+are+required+for+cell+shape+changes%2C+actomyosin+reorganization+and+cell+adhesion+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins are required for cell shape changes, actomyosin reorganization and cell adhesion during dorsal closure in Drosophila.</a> Front. Cell Dev. Biol. 10, 947444(2022).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FERM+protein+Yurt+is+a+negative+regulatory+component+of+the+Crumbs+complex+that+controls+epithelial+polarity+and+apical+membrane+size%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The FERM protein Yurt is a negative regulatory component of the Crumbs complex that controls epithelial polarity and apical membrane size.</a> Dev. Cell. 11 (3), 363-374 (2006).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurexin+IV+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+form+a+novel+group+of+epithelial+polarity+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurexin IV and the Na⁺/K⁺-ATPase form a novel group of epithelial polarity proteins.</a> Nature. 459 (7250), 1141-1145 (2009).</li>
<li>Oshima, K., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+dynamics+within+the+septate+junction+reveals+a+highly+stable+core+protein+complex+that+does+not+include+the+basolateral+polarity+protein+Discs+large%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein dynamics within the septate junction reveals a highly stable core protein complex that does not include the basolateral polarity protein Discs large.</a> J. Cell Sci. 124 (Pt 16), 2861-2871 (2011).</li>
<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHartenstein%2C+V+%22Atlas+of+Drosophila+Development%22">Atlas of Drosophila Development</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).</li>
<li>Lamb, R. S., Ward, R. E., Schweizer, L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+coracle%2C+a+member+of+the+protein+4.1+superfamily%2C+has+essential+structural+functions+in+septate+junctions+and+developmental+roles+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila coracle, a member of the protein 4.1 superfamily, has essential structural functions in septate junctions and developmental roles in epithelial cells.</a> Mol. Biol. Cell. 9 (12), 3505-3519 (1998).</li>
<li>Davis, M. J., Talbot, D., Jemc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+blood-brain+barrier+integrity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assay for blood-brain barrier integrity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (151), e60233(2019).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+polarity+proteins+regulate+Drosophila+tracheal+tube+size+in+parallel+to+the+luminal+matrix+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial polarity proteins regulate Drosophila tracheal tube size in parallel to the luminal matrix pathway.</a> Curr. Biol. 20 (1), 55-61 (2010).</li>
<li>Batz, T., Förster, D., Luschnig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transmembrane+protein+macroglobulin+complement-related+is+essential+for+septate+junction+formation+and+epithelial+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The transmembrane protein macroglobulin complement-related is essential for septate junction formation and epithelial barrier function in Drosophila.</a> Development. 141 (4), 899-908 (2014).</li>
<li>Behr, M., Riedel, D., Schuh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin-like+Megatrachea+is+essential+in+septate+junctions+for+epithelial+barrier+function+in%C3%82%C2%A0Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The claudin-like Megatrachea is essential in septate junctions for epithelial barrier function inÂ Drosophila.</a> Dev. Cell. 5 (4), 611-620 (2003).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinuous+is+a+Drosophila+claudin+required+for+septate+junction+organization+and+epithelial+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sinuous is a Drosophila claudin required for septate junction organization and epithelial tube size control.</a> J. Cell Biol. 164 (2), 313-323 (2004).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Varicose%2C+a+member+of+a+new+subgroup+of+basolateral+MAGUKs%2C+is+required+for+septate+junctions+and+tracheal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Varicose, a member of a new subgroup of basolateral MAGUKs, is required for septate junctions and tracheal morphogenesis.</a> Development. 134 (5), 999-1009 (2007).</li>
<li>Jaspers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin+Megatrachea+protein+complex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The claudin Megatrachea protein complex.</a> J. Biol. Chem. 287 (44), 36756-36765 (2012).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Zirin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+transgenic+Drosophila+resource+collections+for+loss-+and+gain-of-function+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Large-scale transgenic Drosophila resource collections for loss- and gain-of-function studies.</a> Genetics. 214 (4), 755-767 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>바늘용 모세관 (Boro 1 X 0.5/섬유)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>공초점 현미경</td><td>라이카</td><td>스텔라리스 5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>주입용 22 x 22 두께의 유리 덮개를 사용하세요</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12-540-B</td><td></td></tr><tr><td>영상 촬영용 커버 유리 22 x 30 두께 1.5</td><td>코닝</td><td>2980-233</td><td></td></tr><tr><td>면역염색을 위한 배양관 (6 x 50 mm) & nbsp;</td><td>피셔 사이언티브</td><td>14-958-A</td><td></td></tr><tr><td>배아 수집 케이지</td><td>제네시 사이언티브</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>형광 입체 현미경</td><td>라이카</td><td>MZ10 F</td><td></td></tr><tr><td>할로카본 오일 (700)</td><td>제네시 사이언티브</td><td>59-131</td><td></td></tr><tr><td>헵테인</td><td>피셔 사이언티브</td><td>H350-4</td><td></td></tr><tr><td>역형광현미경</td><td>라이카</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td>배아 탈핵을 위한 메시 바구니</td><td>제네시 사이언티브</td><td>46-101</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>피셔 사이언티브</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>마이크로매니퓰레이터</td><td>나리시게</td><td>MN151</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>바늘 풀러</td><td>데이비드 코프 악기</td><td>모델 720</td><td></td></tr><tr><td>일반 당나귀 혈청</td><td>잭슨 면역연구(Jackson ImmunoReseaerch)</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>나일론 메시 (120 um)</td><td>제네시 사이언티브</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>대물렌즈 HC PL FLUOTR 10X/0.32 PH 1</td><td>라이카</td><td>11506537</td><td></td></tr><tr><td>대물렌즈 HC PL APO 10x/0.40 CS2</td><td>라이카</td><td>15506407</td><td></td></tr><tr><td>대물렌즈 HC PL APO 40x/1.30 CS2</td><td>라이카</td><td>15506358</td><td></td></tr><tr><td>페트리 판 60 x 15 mm</td><td>코닝</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>플랫폼 로커</td><td>글로브 사이언티픽</td><td>GTR-FS</td><td></td></tr><tr><td>1차 항체 (코라클)</td><td>DSHB</td><td>C566.9</td><td></td></tr><tr><td>1차 항체 (코라클)</td><td>DSHB</td><td>C615.16</td><td></td></tr><tr><td>1차 항체 (E 카데린)</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td></td></tr><tr><td>1차 항체(Mcr)</td><td>CWRU 병동 실험실</td><td>기니피그 다클론</td><td></td></tr><tr><td>로다민은 10 kDa 덱스트란으로 표기되어 있습니다</td><td>분자 프로브</td><td>D1824</td><td></td></tr><tr><td>2차 항체 (당나귀 안티기니피그 Cy3)</td><td>잭슨 면역연구(Jackson ImmunoReseaerch)</td><td>706-165-148</td><td></td></tr><tr><td>2차 항체(당나귀 항생쥐 Cy2)</td><td>잭슨 면역연구(Jackson ImmunoReseaerch)</td><td>715-225-151</td><td></td></tr><tr><td>2차 항체 (당나귀 항쥐 Cy5)</td><td>잭슨 면역연구(Jackson ImmunoReseaerch)</td><td>712-175-150</td><td></td></tr><tr><td>탁상용 셰이커</td><td>뉴브런즈윅 사이언티픽</td><td>C2 플랫폼 셰이커</td><td></td></tr><tr><td>테고셉트 (메틸 4-하이드록시벤조에이트)</td><td>TCI</td><td>H0216</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>피셔 사이언티브</td><td>BP151500</td><td></td></tr><tr><td>고정용 바이알 (20ml WHEATON 액체 섬광 바이알)</td><td>피셔 사이언티브</td><td>03-341-73C</td><td></td></tr><tr><td>왓맨 3MM&nbsp; 크로마토그래피 용지</td><td>피셔 사이언티브</td><td>05-716-6H</td><td></td></tr><tr><td><강>플라이 주식</강></td><td><강>전체 유전자형</강></td><td><강>주식 번호</강></td><td><스트롱>출처</스트롱></td></tr><tr><td>코르4</td><td>w*; P{neoFRT}43D cora4/CyO</td><td>52232</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>W1118</td><td>w[1118]</td><td>5905</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>Solution</td><td><강>레시피</강></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10배 PBS</td><td>NaCl 90g, Na2HPO4 20g, NaH2PO4 8.3g을 혼합합니다. H2O와 dH20을 1L에 섞습니다. 필터를 멸균합니다. 면역염색 세척 단계에서는 dH2O로 1배로 희석하세요.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% 트라이톤 X-100 용액</td><td>플랫폼 록커에 1ml Triton X-100과 9ml dH2O를 섞어 녹일 때까지 섞으세요. 실온에서 보관하세요.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>표백제 50%</td><td>배아를 탈코리온화하기 전에 상업용 표백제 10ml(7.5% 차가염소산나트륨)와 물 10ml를 섞으세요.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>사과 주스 접시</td><td>15g 초파리 한천을 725ml dH2O에 삶으세요. 설탕 25g과 사과 주스 250ml를 넣고 잘 섞을 때까지 섞습니다. 용액을 55도까지 식힌 후 1.3g 테고셉트를 넣고 부드럽게 섞으세요. 60 x 15 크기의 페트리 플레이트에 부어 식힙힙니다. 4도에서 보관하세요.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>차단 해법</td><td>15개의 원뿔형 튜브에 1X PBS 100 ul과 100 ul 100% Triton X-100, Normal Donkey Serum 100 ul을 섞어 15개의 원뿔형 튜브에 넣으세요.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>배아 세척 용액</td><td>70g NaCl과 2ml Triton X-100을 dH2O에 섞어 10X 배아 세척액을 만드세요. dH2O로 1배로 희석해 작용을 원합니다.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수정</td><td>전자레인지에 1X PBS 10ml를 예열하세요. 0.4 g&nbsp를 더합니다; 파라포름알데히드와 피펫을 섞으려고 합니다. 14N NaOH 10 ul을 첨가해 빠르게 녹여. 녹을 때까지 90도 히트 블록 위에 올려놓으세요. 고체 파라포름알데히드가 사라지면 14N HCL 10ul을 추가해 pH를 중성으로 조정합니다. 파라포름알데히드를 사용할 때는 항상 실험복, 장갑, 고글을 착용하세요.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>매체 장착</td><td>글리세롤 9ml와 1M 트리스 염기 pH 8.0을 섞으세요. n-프로필-갈레이트 0.05g 추가, nbsp; 섞고 가열해서 녹여요. 에펜도르프 튜브에 0.5ml를 분리해 넣습니다.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>로다민 덱스트란 용액</td><td>로다민 표지된 10 kDa 덱트론을 0.5M 인산나트륨, pH 7.5 및 5 mM 염화칼륨에 녹여 신선한 염료 용액을 만듭니다.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>효모 페이스트</td><td>상업용 효모(레드 스타) 50g에 자당 한 꼬집, 그리고 충분한 물을 섞어 걸쭉한 반죽을 만듭니다. 4도에서 보관하세요.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

초파리 배아 상피에서 코어 주름 부분 격지 접합 단백질을 규명하기 위한 면역염색 및 염료 침투 실험

Immunostaining and Dye Penetration Experiments to Define Core Pleated Septate Junction Proteins in Drosophila Embryonic Epithelia

The purpose of these protocols is to evaluate the organization and barrier function of pleated Septate Junctions (pSJs) in the ectodermally-derived ...

immunostaining-dye-penetration-experiments-to-define-core-pleated

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

이 프로토콜은 해부 Drosophila의 유충에 immunohistochemistry을 수행하는 방법을 보여줍니다.

Drosophila 애벌레 NMJ Immunohistochemistry

의 활성 영역의 해부 및 이미징 Drosophila 신경근육학 융티온

면역염색은 조직 내의 특정 세포 유형과 단백질을 시각화하는 효과적인 기술입니다. 초음파 처리를 활용함으로써, 여기에 설명된 프로토콜은 면역 염색 전에 후기 단계의 배아와 유충에서 Drosophila melanogaster 조직을 해부해야 할 필요성을 완화합니다. 우리는 포름알데히드가 고정된 전체 산 유충의 면역 염색을 위한 효율적인 방법론을 제공합니다.

늦게 단계 배아와 애벌레의 초음파 - 촉진 면역 형광 염색<em&gt; 초파리</em&gt; 조직<em&gt; 제자리에서</em

초파리의 성체 구조는 상상 원반이라고 하는 주머니와 같은 구조에서 파생됩니다. 이러한 디스크의 분석은 조직 결정, 구획 경계 설정, 세포 증식, 세포 운명 사양 및 평면 세포 극성을 포함한 많은 발달 과정에 대한 통찰력을 제공합니다. 이 프로토콜은 광/형광 현미경 검사를 위해 가상 디스크를 준비하는 데 사용됩니다.

해부하고, 상상 디스크의 면역 염색에서 초파리

이 프로토콜은 근접 내고 분석은 초파리 애벌레 신경 근육 접합부에서 현장 단백질 - 단백질 상호 작용을 검출 할 수있는 방법을 보여줍니다. 이 기술, 디스크 크고 후진타오 - 리 타이 샤오는 시냅스 지역에서 복잡한, 이전에 공동 면역 통해 식별 관계를 형성하기 위해 표시됩니다.

검출 현장에서 단백질 - 단백질 복합체 초파리 애벌레 신경 근육 접합부

진딧물 배아에 대한 전체 마운트 면역 염색 프로토콜이 제시되며, 이 프로토콜에서는 배경 염색을 줄이고 조직 투과성을 증가시키기 위한 중요한 조건을 다룹니다. 이러한 조건은 진딧물의 배아 조직에서 단백질 발현을 효과적으로 검출하기 위해 특별히 개발되었습니다.

완두콩 진딧물 태아의 면역 염색을위한 중요한 조건의 확인 : 조직 투과성을 증가 및 배경 염색을 감소

우리는 여기에 공초점 현미경 검사법에 적합하고 재현 가능하고 신뢰할 수있는 라벨을 허용 Drosophila 고환의 전체 마운트 준비 및 면역 스테인링을위한 향상된 프로토콜을 제시합니다. 우리는 대형 S4-S5 정자 세포에 대한 공동 지역화 실험의 3D 표현 및 정량화에 의해이 프로토콜을 설명합니다.

대형 정자 세포의 3D 공초점 분석을 위한 전산 Drosophila 고환의 면역 염색

여기에서, 우리는 초파리 배아 단백질 및 RNA의 검출 및 국소화를 위한 프로토콜을 기술한다 수집에서 사전-포베딩 및 포매, 면역염색, 및 mRNA 를 계내 혼성화에 이르게 한다.

초기 초파리 배아 내의 면역조직화학 및 RNA 계내 분포를 위한 프로토콜

본 프로토콜은 초파리 번데기 노툼의 고정 조직의 준비 및 시각화를 자세히 설명합니다. 그것은 손상되지 않았거나 상처 입은 조직에 사용할 수 있으며 조직의 원래 구조는 보존됩니다. 해부, 고정 및 염색 절차는 모두이 기사에서 설명합니다.

Drosophila Pupal Notum 해부, 고정 및 시각화

여기에서는 신경근 접합부와 근육 세포의 미세소관 네트워크를 시각화하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. Drosophila melanogaster의 강력한 유전 도구와 결합된 이 프로토콜은 신경계에서 미세소관 네트워크 조절 단백질의 역할에 대한 유전자 스크리닝 및 미세소관 역학 분석을 크게 용이하게 합니다.

초파리 유충 신경근 접합부 및 근육 세포를 사용하여 미세소관 네트워크 시각화

이 프로토콜은 기존의 GFP/mCherry-tag 접근법을 사용하여 검출하기 어려운 저농도 단백질 또는 번역 후 변형의 실시간 이미징을 가능하게 하는 맞춤형 항체 기반 형광 라벨링 및 초기 초파리 배아에 주입하는 방법을 설명합니다.

형광 항체 주입을 통한 살아있는 초파리 배아의 저농도 단백질 및 번역 후 변형 시각화

배우세요 Drosophila 초파리 배아 상피에서 주름 격지 접합 단백질의 구조와 차단 기능을 면역염색 및 염료 침투 실험으로 평가하는 방법을. 이 기술은 유전자 기능 분석에 필수적입니다.

초파리 배아 상피에서 코어 주름 부분 격지 접합 단백질을 규명하기 위한 면역염색 및 염료 침투 실험

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