Name: Microinjection을 사용 Aphids에 바이러스성 전송 생리 장벽을 테스트 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:16:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: 배우세요 무리주입 기술을 사용하여 진딧물의 혈액강에 바이러스를 직접 주입하고 장벽을 우회하는 방법을. 이 기술은 식물 바이러스 전파 메커니즘 연구에 활용됩니다.

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<ol><li> 진딧물은 벡터 바이러스를 수있다면 테스트하려면, 우리는 2 일간에 감염된 조직에 aphids 먹이. </li><li> 그렇다면, 우리는 5 일 동안 건강한 공장에서 공급 수 있습니다. 공장은 다음 fumigated는 3 주 후에 우리는 증상을 찾고 시작합니다. </li><li> 우리는 벡터 바이러스 수 없습니다, 우리는 2 장벽 중 어떤 microinjection 절차를 사용하여 바이러스를 막는 평가할 수있는 진딧물을 찾을 때. </li><li> 바이러스는이를 굿 전송 장벽을 우회, hemocoel 직접 주입합니다. </li></ol> 방문하십시오 <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">식물 생물학의 연간 리뷰</a> 곤충 herbivory이 프로토콜과 식물 면역에 대한 자세한 내용은.

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

microinjection을 사용 aphids에 바이러스성 전송 생리 장벽을 테스트

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

가족 Luteoviridae에서 감자 loafroll 바이러스 (PLRV)는 solanaceous 식물을 감염. 이것은 주로, 더 그린 복숭아 진딧물, aphids로 전송됩니다. 감염되지 않은 진딧물이 감염된 식물에 피드를하면 그것은 공장 체관부을 통해 바이러스를 계약. 일단 섭취, 바이러스가 hemolymph (곤충 혈액)에 곤충 창자에서 통과해야 다음 새 공장으로 전송하기 위해 침샘을 통과해야합니다. 공장 같으 니라구 때 진딧물은 다른 바이러스를 소요될 수 있습니다, 그러나 작은 파편만이 전송을 위해 두 가지 장벽보다 식물을 감염하는, 창자 및 침샘에 통과합니다. 연구실에서는, 우리는 PLRV 전송을 공부 physalis 발전소를 사용합니다. 이 호스트에서 증상이 stunting 및 interveinal 위황병 (녹색 남은 정맥과 정맥 사이에 나뭇잎의 yellowing)이 특징입니다. 우리가 존재하는 비디오 벡터 PLVR 바이러스와 창자 바이러스는 전송을 방해하고 있는지 테스트를하지 곤충에 진딧물 microinjection을 수행하는 방법을 보여줍니다. 우리가 존재하는 비디오 벡터 PLVR 바이러스와 창자 또는 침샘에 바이러스는 전송을 방해하고 있는지 테스트를하지 곤충에 진딧물 microinjection을 수행하는 방법을 보여줍니다.

Aphids는 식물 바이러스의 효과적인 송신기입니다. 바이러스의 진딧물 microinjection, 우리가 오늘이 표시됩니다 절차는, 연구자, 창자를 거치지 않고 직접 진딧물의 hemocoel에 circulative 방식으로 바이러스 전송을위한 2 개의 주요 장벽 중 하나를 바이러스를 주입 수 있도록하는 기술입니다. 동일한 기술은 또한 RNAi을 위해 dsRNA를 주입하는 데 사용됩니다.

Microinjection을 사용 Aphids에 바이러스성 전송 생리 장벽을 테스트

Luteoviridae과에 속하는 감자잎말이바이러스(Potato loafroll virus, PLRV)는 가지과 식물에 감염됩니다. 이 바이러스는 진딧물, 주로 복숭아혹진딧물에 의해 매개됩니다. ...

만약 곤충이 식물 바이러스의 효과적인 매개체라면, 그리고 바이러스를 미세 주입하는 경우, 오늘 저희가 보여드릴 절차는 연구자가 바이러스를 AFib의 혈세포(hemo cell)에 직접 주입하여, 순환식 전파의 두 가지 주요 장벽 중 하나인 장을 우회할 수 있게 하는 기술입니다. 안녕하세요, 저는 코넬 대학교 식물 병리학과의 박사후 연구원 세실리아 탐린 데히(Cecilia Tamrin Dehi)입니다. 오늘은 바이러스를 AFib 혈세포에 주입하는 방법을 보여드리겠습니다. 이렇게 주입된 바이러스는 이후 다양한 식물 종으로 전파될 수 있습니다.예를 들어, 이 FE 식물은 PLRV 감자 잎 말림 바이러스에 감염되었습니다. 건강한 식물과 감염된 식물의 차이를 확인할 수 있습니다. 가장 눈에 띄는 증상은 잎의 경화 현상입니다.PLRV는 포유류의 혈액에 해당하는 곤충의 혈림프에 의해 운반되는 루티어 바이러스입니다. 감염되지 않은 AFI가 감염된 식물을 섭식하면, 여기에서 볼 수 있는 식물즙을 통해 바이러스에 감염됩니다. 일단 섭취된 바이러스는 곤충의 장에서 혈림프를 거쳐 침샘을 통과해야만 다시 ESE 식물로 전염될 수 있습니다.ESE 식물을 섭식할 때 많은 바이러스를 획득할 수 있지만, 장과 침샘을 통과하는 분율은 더 적을 수 있습니다. 이는 더 많은 식물을 감염시켜 테스트하기 위한 전송의 두 가지 주요 장벽입니다. 만약 AFI가 바이러스를 매개하지 못한다면, 우리는 진딧물을 감염된 조직에서 2일 동안 섭식하게 한 다음, 건강한 식물에서 5일 동안 섭식하도록 합니다.그 후 식물에 훈증 처리를 하고 3주 후에 증상을 탐색하기 시작합니다. 바이러스를 매개하지 못하는 AFib을 발견하면, 오늘 보여드릴 미세주입 절차를 통해 두 가지 장벽 중 어느 것이 바이러스를 차단하고 있는지 평가할 수 있습니다. 이 절차에서는 바이러스를 혈구 세포에 직접 주입하여 장 전송 장벽을 우회합니다.그럼 이제 시작하겠습니다. 이제 apex를 미세 주입하는 방법을 보여드리겠습니다. 이것은 우리가 사용하는 유리 바늘입니다. APU를 사용하여 이 유리 쉴드로부터 유리 바늘을 뽑아냅니다.이것은 바이러스의 미세 주입을 위한 마이크로 인젝터입니다. 이제 니들 홀더에 바늘을 끼우겠습니다.이제 바늘을 제자리에 꽂겠습니다. 이제 바이러스를 이 헬름의 상단까지 바늘에 충전하겠습니다. 이제 미세주입을 위해 AFI의 위치를 잡아야 합니다.이제 압력 패드가 부착된 진딧물을 가져와서 진딧물 홀더에 고정하겠습니다. 진딧물의 복부 부분에 접근할 수 있도록, 진딧물의 등 부분이 홀더에 닿게 배치하는 것이 이상적입니다. 좋습니다.이제 미세주입을 진행하겠습니다. 바늘의 위치를 잡고 AFib에 가까이 가져가겠습니다. 이제 바늘을 AFib에 접촉시키겠습니다. 외골격을 관통하기 위해서는 다리 기저부의 마디 사이를 찌르는 것이 가장 좋습니다.이제 주입을 시작하겠습니다. 브러시로 AFI를 취해 회수 용지에 옮긴 후 잠시 회수되도록 두겠습니다. 또한 대조군 AFI도 미세 주입해야 합니다.이 대조군 미세 주입은 바이러스가 포함되지 않은 완충액만으로 수행합니다. 사용하는 완충액은 0.1 M 인산 완충액 pH 7입니다. 애피드(aphid)를 건강한 식물에 배치하고 5일 동안 섭식하게 한 뒤, 식물을 제거하고 증상 발현을 기다립니다. 하위 가닥 RNA를 미세 주입한 후 일주일 동안 매일 애피드 내 표적 유전자의 발현 수준을 측정합니다.바이러스를 전파하지 못하는 아피스(afid)에 미세주입을 완료했습니다. 미세주입 후 아피스가 바이러스를 전파할 수 있게 된다면, 이는 해당 아피스가 바이러스를 차단하는 장벽인 장벽(gut barrier)을 가지고 있었음을 의미합니다. 반대로 증상이 나타나지 않는다면, 이 아피스가 강력한 침샘 장벽(salivary gland barrier)을 가지고 있음을 의미합니다.지금까지 진딧물에 바이러스를 미세 주입하는 방법을 살펴보았습니다. 이와 동일한 절차를 통해 진딧물에 이중 가닥 RNA를 미세 주입하여 RNA 간섭(RNAi)를 수행하며, 이는 진딧물의 유전자 기능을 연구하는 데 유용한 흥미로운 기술입니다. 이것으로 미세 주입 과정에 대한 설명을 마칩니다.이 영상이 유익하며 여러분의 실험에 도움이 되기를 바랍니다. 감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오와 분석이 보여주는 것을 테스트하지 않는 분야와 하나의 담배 공장을 감염 시켰어 aphids 하나의 두 가지 유형으로 니코틴의 내성.

인공 다이어트 실험을 사용하여 Aphids에 니코틴 공차 테스트

이 비디오에서는, 우리는 insecticidal 효율성을 결정하기 위해 baculovirus와 lepidopteran 유충의 감염에 사용이 microapplicator 기술을 보여줍니다.

Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 Microapplicator를 이용한 감염 프로토콜

이 비디오에서는 양성 감각의 단일 가닥 RNA 바이러스를 성인 수컷 초파리에 나노 주입하는 절차를 설명하고 이후 감염으로 인해 시작된 항바이러스 반응을 연구합니다. 중합효소 연쇄 반응 분석은 RNA 간섭 및 JAK/STAT 신호 전달을 포함한 면역 반응 경로의 활성화를 나타내는 감염된 파리의 특정 유전자의 상향 조절을 식별합니다.

성충 파리의 숙주-바이러스 상호작용을 연구하기 위한 흉곽내 바이러스 나노 주사

진딧물 배아에 대한 전체 마운트 면역 염색 프로토콜이 제시되며, 이 프로토콜에서는 배경 염색을 줄이고 조직 투과성을 증가시키기 위한 중요한 조건을 다룹니다. 이러한 조건은 진딧물의 배아 조직에서 단백질 발현을 효과적으로 검출하기 위해 특별히 개발되었습니다.

완두콩 진딧물 태아의 면역 염색을위한 중요한 조건의 확인 : 조직 투과성을 증가 및 배경 염색을 감소

진딧물 진딧물 nerii 벌레 가족 (Apocyanaceae)에 높은 방어 식물에 colonizes 고 식물 곤충 상호 작용을 공부 하는 수많은 기회를 제공 합니다. 문화, 그리고 생성 및 분자의 분석 및 진딧물의 유지 보수에 대 한 프로토콜의 시리즈 제시 하는 여기, 그리고 A. nerii에 대 한-omic 데이터.

생물 학적 문화와 진딧물 nerii에 유전자 발현 측정 유지: 식물 곤충 상호 작용에 대 한 비-모델 시스템

이 프로토콜 우리가 표준화 하 고 몇 년 동안 모기와 집 파리의 hemolymph를 직접 핵 산의 특정 수량을 제공 하는 데 사용 하는 microinjection 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜 최소 주입 죽음 귀착되 고 통치의 복용량 상관 측정을 허용 한다.

재현할 수 dsRNA Microinjection 및 산란 검정 집 파리 모기에

이 프로토콜에는 vivo에서 바이러스 감염 초파리 melanogaster 나노 주입 방법 기본적인 기법을 사용 하 여 바이러스-호스트 상호 작용을 분석 하에 설정 하는 방법을 설명 합니다.

바이러스 성 감염 및 초파리 Melanogaster 상호 작용 호스트-바이러스의 분석의 설립

여기서 우리는 두 가지 프로토콜을 설명합니다 : 먼저 꿀벌 번데기를 제거하는 방법을 포함하여 다량의 꿀벌 비 외피 바이러스 입자를 전파, 추출, 정제 및 정량화하는 것과 두 번째로 반복성이 높고 처리량이 높은 케이지 생물 검정을 사용하여 바이러스 감염의 효과를 테스트하는 것입니다.

꿀벌의 구강 감염을위한 바이러스 풍부 접종물 준비 (Apis mellifera)

경구 수유 및 흉강내 주사 감염을 포함하는 이 방법론은 아르보 바이러스 감염에 대한 중장 및/또는 침샘 장벽의 영향을 효과적으로 평가할 수 있습니다.

경구 수유 및 미세 주입에 의한 성인 모기의 실험적 바이러스 감염

우리는 후속 분석을 위해 작은 절지동물에서 정량화 가능한 혈림프를 효율적으로 수집하는 방법을 설명합니다.

작은 절지동물에서 체림프를 수집하기 위한 정확하고 정량화 가능한 방법

이 프로토콜은 단일유전학적 곤충인 겨자 진딧물(Lipaphis erysimi (Kalt .))에 대한 곤충병원성 곰팡이(EPF)의 효과를 평가하기 위해 최적화된 분리형 잎 생물검정 시스템을 제공합니다. 이 방법은 페트리 접시 실험 중 데이터 수집 프로세스를 간략하게 설명하여 연구원이 겨자 진딧물 및 기타 단일유전 곤충에 대한 EPF의 독성을 일관되게 측정할 수 있도록 합니다.

Parthenogenetic 곤충, 겨자 진딧물, Lipaphis erysimi (Kalt.)에 대한 곤충 병원성 곰팡이의 무균 효과 평가

배우세요 무리주입 기술을 사용하여 진딧물의 혈액강에 바이러스를 직접 주입하고 장벽을 우회하는 방법을. 이 기술은 식물 바이러스 전파 메커니즘 연구에 활용됩니다.

Microinjection을 사용 Aphids에 바이러스성 전송 생리 장벽을 테스트

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