Name: 효소 소화 및 밀도-구배 분리를 이용한 루이스 쥐로부터의 췌장 섬 분리 및 정제 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:53:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: 배우세요 루이스 쥐 췌장 섬 분리 프로토콜을 효소 소화와 밀도-구배 분리를 이용하여 고순도·고활성의 췌장 섬을 효율적으로 정제하는 방법입니다. 당뇨병 연구와 이식 연구에 적합합니다.

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<ol><li>Grattoni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+cellular+therapeutics+for+type+1+diabetes+mellitus%3A+progress%2C+challenges%2C+and+the+road+ahead%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Harnessing cellular therapeutics for type 1 diabetes mellitus: progress, challenges, and the road ahead.</a> Nat Rev Endocrinol. 21 (1), 14-30 (2025).</li>
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<li>McCall, M. D., Maciver, A. H., Pawlick, R., Edgar, R., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopaque+provides+optimal+mouse+islet+purification+kinetics%3A+comparison+study+with+Ficoll%2C+iodixanol+and+dextran%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Histopaque provides optimal mouse islet purification kinetics: comparison study with Ficoll, iodixanol and dextran.</a> Islets. 3 (4), 144-149 (2011).</li>
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<li>Paez-Mayorga, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neovascularized+implantable+cell+homing+encapsulation+platform+with+tunable+local+immunosuppressant+delivery+for+allogeneic+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Neovascularized implantable cell homing encapsulation platform with tunable local immunosuppressant delivery for allogeneic cell transplantation.</a> Biomaterials. 257, 120232(2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>21 G x 2인치. BD 프리시전 글라이드 니들</td><td>BD</td><td>305129</td><td></td></tr><tr><td>500 및 마이크로; m 황동 프레임과 304 스테인리스 스틸 스크린, 직경 3인치 x 깊이 1인치 (체수 번호 35)</td><td>맥마스터-카</td><td>34735K525</td><td></td></tr><tr><td>에어타이트 멸균 주사기, 루어 락</td><td>피셔 사이언티브</td><td>14-817-178</td><td></td></tr><tr><td>바이오겔 PI 울트라터치 M</td><td>M&WOOML; 인리케</td><td>42665</td><td></td></tr><tr><td>본 가위; 이성애; 날카로운 가운데; 날개 길이 15 mm; 전체 길이 3 1/2"</td><td>로보즈</td><td>RS-5840</td><td></td></tr><tr><td>브레인트리 사이언티픽 GERMINATOR 500 드라이 멸균기</td><td>피셔 사이언티브</td><td>NC9956482</td><td></td></tr><tr><td>셀-IQ 시리즈 5.8 입방피트. CO2 실험실 인큐베이터</td><td>PHCBI</td><td>MCO-170AICUVHL-PA</td><td></td></tr><tr><td>코닝 100mm TC 처리되지 않은 배양 접시</td><td>코닝</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>코닝 태아 소 혈청, 500 mL, 일반, USDA 안전 테스트 (열 비활성화)</td><td>코닝</td><td>35011CV</td><td></td></tr><tr><td>코닝 섬 경배 1.069 (밀도 1.069 g/cm3)</td><td>코닝</td><td>99-815-CIS</td><td>회사에서 특별 요청이 필요합니다</td></tr><tr><td>코닝 아일렛 경배 1.096 (밀도 1.096 g/cm3)</td><td>코닝</td><td>99-691-CIS</td><td>회사에서 특별 요청이 필요합니다</td></tr><tr><td>코닝 아일렛 경배 1.108 (밀도 1.108 g/cm3)</td><td>코닝</td><td>99-692-CIS</td><td>회사에서 특별 요청이 필요합니다</td></tr><tr><td>코비디언 텐더소브 언더패드</td><td>피셔 사이언티브</td><td>22-225-102</td><td></td></tr><tr><td>DNase I 2등급</td><td>로슈</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>팔콘&nbsp; 50 mL 고투명 원뿔 원심분리기 튜브</td><td>피셔 사이언티브</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>피셔브랜드 알루미늄 호일, 표준 궤간 롤</td><td>피셔 사이언티브</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>피셔브랜드&nbsp; 부직포 거즈 스펀지</td><td>피셔 사이언티브</td><td>22-028-559</td><td></td></tr><tr><td>피셔브랜드 재사용 유리 중장 저형 비커</td><td>피셔 사이언티브</td><td>FB101600</td><td></td></tr><tr><td>형광 미기경 및 nbsp; BZ-X810</td><td>키엔스</td><td>BZ-X810</td><td></td></tr><tr><td>포도당 용액</td><td>깁코</td><td>A2494001</td><td></td></tr><tr><td>할시 마이크로 바늘 홀더</td><td>파인 사이언스 툴즈</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>HBSS, 칼슘, 마그네슘, 페놀 레드 없음</td><td>깁코</td><td>14025092</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 남성)</td><td>깁코</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>정혈겸자 클래식 크릴 5-1/2인치 길이</td><td>맥케슨</td><td>1231217</td><td></td></tr><tr><td>허드슨(에왈드) 겸자</td><td>로보즈</td><td>RS-5238</td><td></td></tr><tr><td>주사막 단삭 1-1/2인치 길이 16게이지 일반 벽 안전장치 없음</td><td>맥케슨</td><td>43481</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민 (200 mM)</td><td>깁코</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>리버레이제 T-플렉스, 연구용 등급</td><td>로슈</td><td>5989132001</td><td></td></tr><tr><td>포유류 세포용 생백신/사망 생존 가능성/세포독성 키트</td><td>인비트로젠</td><td>그리고 nbsp; L3224</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB 소프트웨어 패키지</td><td>수학 작품</td><td><a href="https://www.mathworks.com/pricing-licensing.html?prodcode=ML">https://www.mathworks.com/pricing-licensing.html?prodcode=ML</a></td><td></td></tr><tr><td>NE-4000 2채널 프로그래밍 주사기 펌프</td><td>시린지펌프</td><td>NE-4000-미국</td><td></td></tr><tr><td>바늘, 하이포 스트렝스 디스프 27GX1/2" (100/BX) 엑스린트</td><td>맥케슨</td><td>408877</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 세포 배양/페트리 접시</td><td>열과학</td><td>174926</td><td></td></tr><tr><td>올림푸스 CKX41 역위상 대비 현미경</td><td>올림포스</td><td>CKX41-B</td><td></td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>깁코</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>페니실린(Penicillin) 스트렙토마이신 (10,000 U/mL)</td><td>깁코</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>깁코</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640, 포도당 없음</td><td>깁코</td><td>11879020</td><td></td></tr><tr><td>피루베이트 나트륨 (100 mM)</td><td>깁코</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>피루베이트 나트륨 (100 mM 재고)</td><td>깁코</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>소르발 ST 16R</td><td>열과학</td><td>75004381</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 304 주사기 바늘</td><td>밀리포어 시그마</td><td>Z117013-1EA</td><td></td></tr><tr><td>수술용 드레이프, 일회용, 36인치 X 100야드</td><td>코베트루스</td><td>10408</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위 - ToughCut</td><td>파인 사이언스 툴즈</td><td>14054-13</td><td></td></tr><tr><td>엄지 드레싱 겸자 4.5인치 톱니 모양의 섬세한 끝 폭 1.3mm</td><td>로보즈</td><td>RS-8120</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nunc 200mL 원심분리관</td><td>열과학</td><td>14-962-17</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nunc 원심분리기 병 어댑터 및 쿠션</td><td>열과학</td><td>12-565-283B</td><td></td></tr><tr><td>TSDUB15 15L 더브노프 셰이킹 워터 배스</td><td>피셔 사이언티브</td><td>300610298</td><td></td></tr><tr><td>TX-400 4 x 400 mL 스윙잉 버킷 로터</td><td>열과학</td><td>75003181</td><td></td></tr><tr><td>타이곤 S-50-HL</td><td>타이곤</td><td>AAXoooo3</td><td></td></tr><tr><td>초민감 쥐 인슐린 ELISA 키트</td><td>크리스탈 켐</td><td>90060</td><td></td></tr></tbody></table>

효소 소화 및 밀도-구배 분리를 이용한 루이스 쥐로부터의 췌장 섬 분리 및 정제

Pancreatic Islet Isolation and Purification from Lewis Rats Using Enzymatic Digestion and Density-Gradient Separation

다음 결과는 설명된 방법으로 수행된 전형적인 섬 분리 사례로, 12개의 루이스 쥐 췌장을 병행하여 처리한 것입니다.
수확량과 크기 분포
수동 알리코트 카운팅과 IEQ 변환
"Islet Counting" 6.1 섹션에 설명된 대로 혼합 섬 현탁액에서 두 개의 독립 100 μL 알리코트가 얻어졌으며, 직경 빈(50-100 μm, 100-150 μm, 150-200 μm, 200-250 μm, 250-300 μm)으로 계수되었습니다. 카운트는 표준 등가율표를 사용하여 섬 등가물(IEQ; 150 μm 기준)로 변환하고 총 현탁 부피로 외삽했습니다( 그림 4A 참조). 시험 분리(n = 12)를 통해, 50-100 μm 빈에 중앙 섬 직경이 있는 3330 IEQ/췌장의 수율이 나왔습니다. 복제 알리코트는 빈당 18.8%(변동 계수)로 일치했으며, 이는 수동 계산 방법을 사용할 경우 예상되는 중간 정도의 변동을 나타냅니다. 이전 14회의 섬 분리 중 이 방법은 평균 1353(SD 607) IUQ/췌장을 생성했습니다.
자동 전체 판 정량화
수동 IEQ를 벤치마킹하기 위해 현미경으로 D1에서 밝은 필드 이미지를 획득한 후 스티칭하여 전체 접시 합성 이미지(4× 대목적 렌즈; 1/100초 노출)를 생성했습니다. 자동 크기 측정과 객체 정량화는 Fiji와 코딩을 사용해 50-600 μm의 사전 정해진 크기 임계값으로 수행되었습니다. 이미지는 먼저 배경 변화를 줄이고 대비의 균일성을 높이기 위해 사전 처리되었습니다. 섬 구조는 주변 조직에 대한 강도 차이를 기반으로 확인되어 이진 물체 마스크를 생성했습니다. 인접하거나 부분적으로 접촉하는 섬들은 물체 수를 과소평가하지 않도록 분리되었다. 지정된 크기 범위를 벗어난 물체는 잔해와 비섬 조직을 제거하기 위해 제외되었다. 각 보존된 물체에 대해 면적과 x축 및 y축 직경을 포함한 형태계측 매개변수를 추출했습니다. 그 후 섬들은 직경별로 분류되었고, IEQ는 각 크기 빈의 섬 수에 대응하는 변환 계수를 곱하여 계산했습니다. 자동 크기 측정을 통해 총 98,832개의 객체가 생성되었으며, 평균 x축과 y축 직경은 각각 117 μm, 116 μm, 추정 총 16,350 IEQ로 추정되었으며, 이는 D0에서 측정된 수동 IEQ와 강한 상관관계를 보였습니다(Spearman r = 0.937, p = 0.0048; 그림 4A-C 참조).
섬 세포 탈락
정제 후 2시간 후와 1일차(D1)에 동일한 방법으로 "자동 전체 판 정량화"를 사용하여 초기 섬 안정화("탈모")를 평가하는 전체 플레이트 이미지가 촬영되었습니다. 2시간에서 D1까지 객체 수는 0.9%, IEQ는 -6.11% 변화했습니다( 그림 4D 참조). D0와 D1 간의 섬 직경 쌍 비교에서는 통계적으로 유의한 중앙값 2 μm 감소가 나타났다(Wilcoxon signed rank test, p = 0.0136, n = 2820). 하지만 이 변화의 작은 규모는 생물학적이거나 임상적으로 의미가 있을 가능성은 낮습니다.
<img alt="그림 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70414/70414fig4.jpg" data-altupdatedat="1777957239000" data-alt="Figure 4"> 
그림 4: 섬 크기 분포, 상관관계, 조기 탈락의 정량적 평가. 수동 및 자동 분석을 통해 얻은 섬 측정값의 그래픽 요약. (A) 0일차(D0) 표준 섬 등가 IEQ 크기 빈 간 수동 정량화에 기반한 섬 크기 분포. (B) 1일차(D1) 섬 크기 분포는 동일한 표준화된 IEQ 크기 빈 내에서 자동 이미지 기반 측정에 의해 결정되었습니다. (C) IEQ 크기 빈 간 수동 D0와 자동 D1 정량화 간의 상관관계. (D) 동일판의 자동 측정을 위한 D0과 D1 사이 섬 직경 분포의 박스플롯. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70414/70414fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
순도 (내분비 대 외분비 함량)
디티존(DTZ) 염색
D1에서는 상온에서 DTZ로 30초간 염색한 섬들(n = 451)을 즉시 밝시야 현미경(4× 대가, 1/20초 노출)으로 영상화했습니다. 피지에서는 남은 픽셀 면적이 전체 섬 면적에 해당하도록 배경 픽셀을 제거했습니다. DTZ 음성 외분비 조직 영역은 어두운 색상 대비로 식별되며, 올가미 도구를 사용해 수동으로 선택했고, 관심 영역의 각 영역은 자동으로 픽셀로 기록되었습니다. 내분비 순도는 전체 섬 픽셀에 비해 DTZ 양성 픽셀의 비율로 계산되었으며, 순도는 98.56 ± 0.38%였습니다(그림 5A).
생존 가능성 및 기능적 성능
포도당 자극 인슐린 분비(GSIS)
각 시점(D1, D3, D7)마다 크기가 일치하는 15개의 섬이 손수 선택되어 24웰 판의 개별 우물에 배치되었으며, 이 판은 4배로 준비되었습니다. 섬들은 37 °C 5%CO2 환경에서 크렙스 완충제에서 저-고-저 포도당 자극 프로토콜 하에 배양되었습니다: 먼저 저포도당(2.8 mM, 60분), 이어서 고혈당(16.7 mM, 60분, 표 1 참조)에서 배양했습니다. 각 잠복 기간 종료 시 배출 분획을 수집하고, 인슐린 농도는 쥐 인슐린 ELISA 분석법으로 정량화되었습니다. 자극 지수는 고혈당과 저혈당 상태에서의 인슐린 분비 비율로 계산되었습니다. 자극 지수는 각각 1일차, 3일차, 7일차에 9.37, 8.34, 6.7이었으며, 유의한 차이는 없었다(그림 5B).
생체/죽음 염색
D1, D3, D7에서는 15개의 섬이 직접 선별되어 제조사 지침에 따라 Live/Dead 생존 키트로 염색되었습니다. 간단히 말해, 섬들은 25°C에서 30분간 생사염색 용액에서 배양한 후, 일정한 현미경 설정으로 영상화하여 시간대(4배 객관; 1/30초 노출, 텍사스 레드 및 GFP 필터)를 비교할 수 있도록 했습니다. 생존 가능성은 섬 분할과 형광 측정을 위해 scikit-image를 사용하는 Python 스크립트를 사용하여 정량화되었습니다. 섬은 녹색과 적색 형광 채널을 결합하고, Li의 임계값 기법을 적용해 이진 마스크를 생성하며, 유역 분할을 이용해 접촉하는 섬들을 분리하여 식별했습니다. 물체들은 잔해와 유물을 제외하기 위해 구역별로 필터링되었습니다. 각 섬에 대해, 생존 가능성은 전체 통합 밀도(녹색 픽셀)의 비율과 전체 통합 밀도(녹색 더, 빨간 픽셀)의 비율로 계산되었습니다. 결과는 D1에서 68± 9%, D3에서 98.2 ± 0.6%, D7에서 100%의 생존 가능성을 보여주었습니다. 70% 에탄올로 10분간 처리한 양성 대조 샘플은 생존율이 2.7± 7.2%를 보였습니다(그림 5C-F 참조).
<img alt="그림 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70414/70414fig5.jpg" data-altupdatedat="1777957239000" data-alt="Figure 5"> 
그림 5: 섬의 순수성, 생존 가능성 및 기능적 반응성 평가. 시간에 따른 고립된 섬 특성의 대표 이미지와 정량적 요약. (A) 디티존(DTZ)으로 염색된 섬들의 대표적인 10× 밝은 시야 이미지로, 붉게 염색된 내분비 섬과 염색되지 않은 외분비 조직을 보여줍니다. (B) 1일차, 3일차, 7일차의 고혈당/저혈당(HG/LG) 자극 지수의 포도당 자극 인슐린 분비(GSIS) 값. (C-E) 1일차(C), 3일차(D), 7일차(E)의 섬의 생형/죽음형 형광 이미지. (F) 에탄올로 처리된 양성 대조 섬의 생/죽은 형광 이미지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70414/70414fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.</a>
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>(a) 세척 매체</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>구성 요소</td>
			<td>최종 집중</td>
			<td>양 (mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>태아 소 혈청</td>
			<td>10%</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>펜-연쇄상구균 (10,000 U/mL)</td>
			<td>1%</td>
			<td>5.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>젠장</td>
			<td>25 mM</td>
			<td>100만 개 재고에서 12.5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-글루타민</td>
			<td>2 mM</td>
			<td>200 mM 스톡에서 5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(b) 아슬렛 컬처 미디어</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>구성 요소</td>
			<td>최종 집중</td>
			<td>양 (mL 또는 g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640, 포도당 없음</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>태아 소 혈청</td>
			<td>10%</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>펜-연쇄상구균 (10,000 U/mL)</td>
			<td>1%</td>
			<td>5.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>젠장</td>
			<td>20 mM</td>
			<td>1M 재고에서 11mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>피루브산나트륨</td>
			<td>1 mM</td>
			<td>100 mM 스톡에서 5.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>포도당</td>
			<td>5.5 mM</td>
			<td>200 g/L 재고에서 2.75 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(c) 페니실린-스트렙토마이신 세척액</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>구성 요소</td>
			<td>최종 집중</td>
			<td>양 (mL 또는 g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>식염수 용액, 0.9%</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>페니실린 스트렙토마이신 (10,000 U/mL)</td>
			<td>2%</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(D) 소환 버퍼</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>구성 요소</td>
			<td>최종 집중</td>
			<td>양 (mL 또는 g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>태아 소 혈청</td>
			<td>20%</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 남성)</td>
			<td>2.50%</td>
			<td>2.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(E) 크렙스 완충</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>구성 요소</td>
			<td>최종 집중</td>
			<td>양 (mL 또는 g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dH2O</td>
			<td>-</td>
			<td>975 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>나클</td>
			<td>115 mM</td>
			<td>6.72g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>24 mM</td>
			<td>2.02 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>5 mM</td>
			<td>0.3728 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 남성)</td>
			<td>25 mM</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>1 mM</td>
			<td>0.0952 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>0.10%</td>
			<td>1 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2.5 mM</td>
			<td>0.2775 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: 해결책 목록. 섬 분리 및 정화 프로토콜 전반에 걸쳐 사용되는 모든 용액의 조성 및 준비 세부 사항. 각 하위 섹션에는 성분, 최종 농도, 준비 볼륨, 카탈로그 번호가 나열되어 있습니다. (A) 세척 매체는 소화와 정화 과정에서 조직을 헹구고 세척하는 데 사용됩니다. (B) 분리 후 섬 유지 및 생존 가능성에 사용되는 섬 배양 매개체. (C) 페니실린-스트렙토마이신 세척액으로, 채취한 췌장을 소독하고 세척하는 데 사용됩니다. (D) 소효 소화를 종료하고 세포 생존력을 보존하는 데 사용되는 소결 버퍼. (E) 포도당 자극 인슐린 분비(GSIS) 분석에 사용되는 크렙스 버퍼.
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>췌장 수(pancrease)</td>
			<td>콜라겐제 (15.38 mg/mL)</td>
			<td>열분해신 (1 mg/mL)</td>
			<td>DNAse (100 mg/mL)</td>
			<td>작동 버퍼</td>
			<td>사용 가능한 600 mL 비커</td>
			<td>부피/비커</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30</td>
			<td>4.5 mL</td>
			<td>2.25 mL</td>
			<td>450 μL</td>
			<td>450 mL</td>
			<td>5</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24</td>
			<td>3.6 mL</td>
			<td>1.8 mL</td>
			<td>360 μL</td>
			<td>360 mL</td>
			<td>4</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20</td>
			<td>3 mL</td>
			<td>1.5 mL</td>
			<td>300 μL</td>
			<td>300 mL</td>
			<td>3</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16</td>
			<td>2.4 mL</td>
			<td>1.2 mL</td>
			<td>240 μL</td>
			<td>240 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12</td>
			<td>1.8 mL</td>
			<td>0.9 mL</td>
			<td>180 μL</td>
			<td>180 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10</td>
			<td>1.5 mL</td>
			<td>0.75 mL</td>
			<td>150 μL</td>
			<td>150 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>최종 콘테스트.</td>
			<td>0.15 mg/mL</td>
			<td>5 mg/mL</td>
			<td>0.1 mg/mL</td>
			<td colspan="3"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 2: 췌장 양에 따른 소화 효소 용액. 다양한 수의 쥐 췌장을 위한 작업 해리 배지(WDM)를 준비하기 위해 필요한 콜라겐제, 열해리신, DNase I 양. 각 효소의 최종 농도는 표 하단에 나열되어 있습니다.
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>췌장 수(pancrease)</td>
			<td>50 mL 튜브 번호</td>
			<td>부피/주사기</td>
			<td>1,096개의 주사기 수</td>
			<td>1,068개의 주사기 수</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30</td>
			<td>10개의 튜브</td>
			<td>50 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24</td>
			<td>8개의 진공관</td>
			<td>40 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20</td>
			<td>6개의 진공관</td>
			<td>30 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16</td>
			<td>4개의 진공관</td>
			<td>40 mL</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12</td>
			<td>4개의 진공관</td>
			<td>40 mL</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10</td>
			<td>2개의 진공관</td>
			<td>20 mL</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 3: 췌장 수량에 따른 경배 하중. 50mL 원뿔관 수와 처리된 췌장 수에 따라 섬 정제에 필요한 구배 부피.
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>섬 지름 범위 (μm)</td>
			<td>섬 입자 번호 (AI)</td>
			<td>IEQ 변환 계수</td>
			<td>범위별 IEQ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-100</td>
			<td>a</td>
			<td>* 0.167</td>
			<td>a * 0.167</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>101-150</td>
			<td>b</td>
			<td>* 0.648</td>
			<td>b * 0.648</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>151-200</td>
			<td>c</td>
			<td>* 1.685</td>
			<td>c * 1.685</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>201-250</td>
			<td>d</td>
			<td>* 3.500</td>
			<td>D * 3.500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>251-300</td>
			<td>e</td>
			<td>* 6.315</td>
			<td>E * 6.315</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>301-350</td>
			<td>f</td>
			<td>* 10.352</td>
			<td>f * 10.352</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&gt; 350</td>
			<td>g</td>
			<td>* 15.833</td>
			<td>g * 15.833</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 4: 섬 동등 변환. 섬 직경 범위를 표준화된 섬 등가물(IEQ)로 변환하는 과정. 표에는 관측된 섬 직경 빈, 범위별 섬 입자 수, 각 크기 범위별 IEQ 변환 계수, 그리고 범위별 IEQ 기여도를 나열합니다.

Pancreatic islets are essential for both clinical islet transplantation and preclinical studies aimed at understanding the mechanisms and progression of ...

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

높은 품질과 인간 아일 레츠의 적절한 수량을 달성하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 유명 전제 조건 중 하나입니다. 이 비디오에서는, 우리는 단계별로 설명을 인간의 췌장 아일릿 절연을위한 절차 : 수정된 자동화된 방법을 사용하여 (부분 I 소화 및 췌장 조직의 수집).

인간 췌장 아일릿 격리 : 부품 I : 소화 및 췌장 조직의 수집

높은 품질과 인간 아일 레츠의 적절한 수량을 달성하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 유명 전제 조건 중 하나입니다. 이 비디오에서는, 우리는 단계별로 설명을 인간의 췌장 아일릿 절연 (부분 II : 인간 아일 레츠의 정화 및 문화)에 대한 절차를 수정 자동화된 방법을 사용하여.

인간 췌장 아일릿 절연 : 2 부 : 인간 아일 레츠의 정화와 문화

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이 프로토콜은 섬 분리 및 정제를 위한 돼지 췌장 조달을 위한 단계별 가이드를 제공합니다.

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