Name: 플로우 사이토메트리 및 단세포 RNA 시퀀싱을 위한 전체 쥐 종양 탑재 폐 조직의 최적화 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-22T13:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: 배우세요 쥐 종양 폐 조직에서 단세포 분리를 최적화하는 방법을. 흐름 세포 분석과 단세포 RNA 시퀀싱을 통해 폐암 미세환경과 세포 간 상호작용을 연구할 수 있습니다.

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<ol><li>Leiter, A., Veluswamy, R. R., Wisnivesky, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+lung+cancer%3A+current+status+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">The global burden of lung cancer: current status and future trends.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (9), 624-639 (2023).</li>
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<li>van den Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nat Methods. 14 (10), 935-936 (2017).</li>
<li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus RNA-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130(2020).</li>
<li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+and+spatial+atlas+of+TP53-associated+tissue+remodeling+defines+a+multicellular+tumor+ecosystem+in+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">A cellular and spatial atlas of TP53-associated tissue remodeling defines a multicellular tumor ecosystem in lung adenocarcinoma.</a> Nat Cancer. 6 (11), 1857-1879 (2025).</li>
<li>Marjanovic, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+a+high-plasticity+cell+state+during+lung+cancer+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Emergence of a high-plasticity cell state during lung cancer evolution.</a> Cancer Cell. 38 (2), 229-246.e13 (2020).</li>
<li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLVAP+mediates+regulation+of+the+tumour+microenvironment+in+early-stage+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">PLVAP mediates regulation of the tumour microenvironment in early-stage lung adenocarcinoma.</a> Clin Transl Med. 15 (12), e70532(2025).</li>
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<li>Pirrello, A., Killingsworth, M., Spring, K., Rasko, J. E. J., Yeo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+macrophage-like+cells+as+a+prognostic+biomarker+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Liquid+Biopsy%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated macrophage-like cells as a prognostic biomarker in solid tumors.</a> J Liquid Biopsy. 6, 100275(2024).</li>
<li>Rudnick, J. A., Debnath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+host+stromal+fibroblasts+supports+tumor+desmoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in host stromal fibroblasts supports tumor desmoplasia.</a> Autophagy. 17 (12), 4497-4498 (2021).</li>
<li>Nissen, N. I., Karsdal, M., Willumsen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagens+and+cancer-associated+fibroblasts+in+reactive+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Collagens and cancer-associated fibroblasts in reactive stroma.</a> J Exp Clin Cancer Res. 38 (1), 115(2019).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+perfusion+of+the+mouse+for+brain+tissue+dissection+and+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation.</a> Bio Protoc. 11 (5), e3988(2021).</li>
<li>Morton, J., Snider, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+collection+and+processing+of+lungs+from+aged+mice+for+histological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathobiol+Aging+Age+Relat+Dis%22%5BJournal%5D)">Guidelines for collection and processing of lungs from aged mice for histological studies.</a> Pathobiol Aging Age Relat Dis. 7 (1), 1313676(2017).</li>
<li>Pariollaud, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+disruption+enhances+HSF1+signaling+and+tumorigenesis+in+KRAS-driven+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Circadian disruption enhances HSF1 signaling and tumorigenesis in KRAS-driven lung cancer.</a> Sci Adv. 8 (39), eabo1123(2022).</li>
<li>Wu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiling+of+tumor+heterogeneity+and+microenvironment+in+advanced+NSCLC%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiling of tumor heterogeneity and microenvironment in advanced NSCLC.</a> Nat Commun. 12 (1), 2540(2021).</li>
<li>McKeehan, W. L., Ham, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+and+magnesium+ions+regulate+multiplication+in+normal+and+transformed+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Calcium and magnesium ions regulate multiplication in normal and transformed cells.</a> Nature. 275 (5682), 756-758 (1978).</li>
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<li>Shao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+expansion+of+type+II+alveolar+epithelial+cells+promotes+airway+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pharmacological expansion of type II alveolar epithelial cells promotes airway repair.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (16), e2400077121(2024).</li>
<li>Chen, Q., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+mouse+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of mouse alveolar type II cells.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100241(2021).</li>
<li>Arceneaux, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+contamination-focused+approach+for+optimizing+single-cell+RNA-seq+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">A contamination-focused approach for optimizing single-cell RNA-seq experiments.</a> iScience. 26 (7), 107242(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12</td><td>써모피셔</td><td>11320033</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>콜라게나제 IV형</td><td>시그마 알딕</td><td>C5138</td><td>소화 효소</td></tr><tr><td>디스파즈 II</td><td>시그마 알딕</td><td>D4693</td><td>소화 효소</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>로슈</td><td>11284931001</td><td>DNA 제거</td></tr><tr><td>팔콘 70 셀 스트레이너</td><td>팔콘</td><td>352350</td><td>소화되지 않은 조직을 제거하세요</td></tr><tr><td>멸균 가위</td><td>FST</td><td>14088-10</td><td>절단 조직</td></tr><tr><td>적혈구 용해 완충제</td><td>시그마 알딕</td><td>R7757</td><td>혈액 세포를 제거하세요</td></tr><tr><td>열로 비활성화된 FBS</td><td>피닉스 사이언티브</td><td>PS100</td><td>세포 보호</td></tr><tr><td>Ca+/Mg+ 무료 PBS</td><td>써모피셔</td><td>10010023</td><td>용해 효소/세척 셀</td></tr><tr><td>안전-멀티플라이 21G 바늘 &nbsp;</td><td>사르스테트</td><td>3051524</td><td>전신 관류</td></tr><tr><td>50 mL 주사기와 nbsp;</td><td>BD</td><td>300866</td><td>전신 관류</td></tr><tr><td>6cm 접시</td><td>코닝</td><td>430116</td><td>소화 조직</td></tr><tr><td>10cm 접시</td><td>코닝</td><td>430167</td><td>소화 조직</td></tr><tr><td>Fc 차단 항체</td><td>BD</td><td>553141; RRID:AB_394655</td><td>유세포검사</td></tr><tr><td>다피</td><td>BD</td><td>564907; RRID:AB_2869624</td><td>유세포검사</td></tr><tr><td>CD326</td><td>BD</td><td>563478; RRID:AB_2738234</td><td>유세포검사</td></tr><tr><td>HIVmPGKCre VSVG</td><td>UI 바이럴 벡터 코어</td><td>아이오와 VVC-U-7556</td><td>렌티비루스</td></tr><tr><td>ZE5 (Yeti) 유세포계</td><td>바이오-래드</td><td></td><td>유세포검사 분석</td></tr><tr><td>KrasLSL-G12D/+ 마우스</td><td>잭슨 연구소</td><td>008179; RRID:IMSR_JAX:008179</td><td></td></tr><tr><td>TdTomato 기자 마우스</td><td>잭슨 연구소</td><td>007909; RRID:IMSR_JAX:007909&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

플로우 사이토메트리 및 단세포 rna 시퀀싱을 위한 전체 쥐 종양 탑재 폐 조직의 최적화 준비

Optimized Preparation of Whole Murine Tumor-Bearing Lung Tissue for Flow Cytometry and Single-Cell RNA-Sequencing

플로우 사이토메트리 및 단세포 RNA 시퀀싱을 위한 전체 쥐 종양 탑재 폐 조직의 최적화 준비

NSCLC accounts for approximately 85% of lung cancers, and Kirsten rat sarcoma (KRAS) is the most commonly mutated gene in NSCLC. Although management of ...

optimized-preparation-whole-murine-tumor-bearing-lung-tissue-for-flow

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

본 연구에서보고 된 소설 프로토콜 결합에 의한 마우스의 단일 셀 해상도로 폐 metastases의 선택적 검출 할 수...

복합에 의한 마우스의 싱글 셀 해상도에서 폐 Metastases의 향상된 시각화<em&gt;에서 시츄</em폐 조직 및 X-걸의 착색의&gt; 재관류<em&gt; lacZ</em&gt; 태그 종양 세포

우리는 흐름 cytometric 부정적인 선택하여 기본 손쥐 유형 II 폐포 상피 세포 (AECII)의 급속한 절연을 설명합니다. 이 AECII 높은 생존 능력과 정결을 표시하고 면역 또는 전염성 질환과 같은 호흡기 질환에서의 역할에 대한 기능과 분자 연구 광범위한 적합합니다.

기능 및 분자 연구 기본 손쥐 유형 II 폐포 상피 세포의 흐름 Cytometric 절연

이 비디오는 폐 선암 세포의 PD-L1 발현을 연구하기 위한 유세포 분석을 위한 마우스 폐 세포 현탁액의 준비에 대해 설명합니다.

유세포 분석을 위한 마우스 폐 준비: 유세포 분석을 위한 폐 조직에서 세포 현탁액 생성

정밀하게 절단된 절편을 포함하는 유기형 1차 조직 이식 배양은 3차원(3D) 조직 구조와 천연 조직의 다세포 상호 작용을 나타냅니다. 이 비디오는 조직을 산소와 영양분에 간헐적으로 노출시킬 수 있는 시스템인 회전 배양 장치를 사용하여 쥐 폐 종양 유래 조직 절편을 배양하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 약물 반응 연구를 위해 정밀하게 절단된 폐 종양 절편을 생성하고 배양하는 방법론을 설명합니다.

폐 종양 조직 이식 배양: 정밀하게 절단된 폐 종양 절편을 생성하고 배양하는 절차

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나노 바디 및 항체 기반의 검증<em&gt; 생체</em마우스에서&gt; 종양 이종 이식 NIRF 이미징 실험 사용<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 유동 세포 계측법 및 현미경

Murine orthotopic PDAC homografts immunophenotyping에 실험 절차는 종양 면역 microenvironment 프로 파일링 목표로 합니다. 종양은 수술을 통해 이식 하는 orthotopically. 종양 크기에 200-600 m m3 의 수확 되었고 단일 셀 정지, 여러 면역 표식 FACS 분석 다른 붙일 표시 된 항 체를 사용 하 여 다음을 준비 하는 해리.

Immunophenotyping Orthotopic Homograft (Syngeneic) Murine 기본 KPC 췌 장 Ductal 선 암의 Cytometry로의

이 연구에서, 우리는 뮤린 호흡기의 면역 집단을 분리하기위한 효과적이고 재현 가능한 프로토콜을 제시합니다. 우리는 또한 9 색 기반 유세포 측정 패널을 사용하여 건강한 마우스의 폐에 존재하는 모든 선천적 및 적응 면역 세포를 확인하는 방법을 제공합니다.

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우리는 비브라톰과 아가로스 포매된 폐 조직을 활용하여 폐 절편을 생성하는 조직 처리 기술을 개발하여 폐 구조의 고해상도 이미지를 획득할 수 있습니다. 특정 폐 구조 마커를 사용하여 공간 단백질 발현을 관찰하기 위해 면역형광 염색을 사용했습니다.

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single-cell RNA sequencing을 위한 인간 및 생쥐 종양 조직 샘플의 해리

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Preparation of single-cell suspension of mouse thymic epithelial cells (마우스 흉선 상피 세포의 단세포 현탁액 및 유세포 분석을 위한 세포 내 분자의 염색)

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