쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

운동 및 공간 기억 결손을 연구하기 위해 선택적 영구적 중대뇌동맥(MCA) 폐쇄 쥐 모델을 구축하였습니다. 많은 뇌졸중 모델들의 선택성이 떨어지기 때문에, 본 프로토콜은 혈관을 직접 관찰하여 원위부 MCA를 정밀하게 폐쇄할 수 있도록 합니다. 우선, 멸균포로 덮인 현미경 스테이지 주변에 깨끗하게 멸균된 수술 도구들을 배치하십시오.

패딩 처리된 현미경 스테이지 위에 180도 측와위로 배치하고 머리를 부드러운 롤로 받쳐 지지한 마취된 Worcester 쥐의 왼쪽 외측면을 노출시킵니다. 접착 테이프로 머리를 고정합니다. 윤활 안약을 점안합니다.

눈꺼풀을 테이프로 고정하여 감깁니다. 직장 온도를 다시 확인하여 약 37 °C의 이상적인 범위 내로 유지되는지 확인하십시오. 필요한 경우 가열 장치를 조정하십시오.

미니 제모기 또는 면도날을 사용하여 외안각과 이주 사이의 1.6 by 0.5 centimeter 영역을 제모합니다. 제모된 부위를 2% chlorhexidine scrub으로 소독한 후, 0.2% aqueous chlorhexidine으로 다시 소독합니다. 멸균 메스 날을 사용하여 외안각의 후방 및 이주의 전방으로 0.3 centimeter의 여유분을 유지하면서 1 centimeter 길이로 피부 및 피하 절개를 실시합니다.

지혈 겸자를 사용하여 피부와 피하층을 견인합니다. 표천측혈관의 중측두분지를 확인한 후, 전기 소작기로 혈관을 응고시킵니다. 프리어 엘리베이터(freer elevator)를 사용하여 광대활을 촉진합니다.

측두근 근막을 세로 방향으로 절개합니다. 측두골과 전두골 및 교근의 일부가 드러나도록 측두근을 머리 쪽(상부)과 꼬리 쪽(하부)으로 박리합니다. 관골궁을 세로 방향으로 분리합니다.

광대활(zygomatic arch)의 약 0.5 cm 분절을 제거합니다. 시술 중에 적절한 주의 사항을 준수하십시오. 라운드 다이아몬드 코팅 버(burr)를 사용하여 광대활 제거 부위 바로 뒤쪽의 외측 측두골을 드릴로 천공하며, 이때 0.9% saline으로 간헐적으로 세척합니다.

천공 시, 경막에 얇은 잔존 골층이 붙어 있도록 남겨둡니다. Halsted 포셉을 사용하여 남아 있는 부착 파편들을 조심스럽게 제거합니다. 초미세 바늘을 사용하여 경막을 절개합니다.

하대뇌정맥, 중대뇌동맥(MCA), 그리고 중앙의 기저부이자 가장 굵은 MCA 분지를 식별합니다. 미세 지침 홀더를 사용하여 비흡수성 8.0 폴리프로필렌 봉합사를 MCA 주위로 통과시킨 후, 세 번 매듭을 지어 혈관을 폐쇄합니다. 하류의 혈류가 없음을 확인한 후, 초미세 지침을 사용하여 결찰해야 할 추가적인 MCA 분지가 있는지 확인합니다.

생리식염수로 강(cavity)을 세척합니다. 전기소작 또는 가벼운 압박으로 지혈을 실시합니다. MCA 폐쇄와 경막 폐쇄 후, 심부 근육층을 다시 근접시키고 흡수성 4-O 봉합사를 사용하여 측두근 근막을 봉합합니다.

흡수성 4-0 polyglactin 910 봉합사를 사용하여 피하층과 피부층을 연속 봉합합니다. 수술 후 정해진 날짜에 따라 평가를 수행합니다. 수술 후 7일째 자세 테스트에서의 운동 기능 점수는 sham군 동물에 비해 MCA 폐쇄 동물에서 유의하게 더 높았습니다.

MCA 폐쇄 동물 모델은 가짜 수술(sham) 동물과 비교하여 수술 후 8일째에 재배치된 물체에 대한 탐색 능력이 감소한 것으로 나타났습니다. 이 프로토콜은 연구자가 선택적 피질 허혈 및 이것이 운동 기능과 공간 기억에 미치는 영향을 연구하는 데 도움을 줍니다. 주요 과제는 두개골 절제술(craniectomy)을 안전하게 수행하고 중대뇌동맥을 정확하게 식별하는 것입니다.

향후 연구에서는 이 모델을 사용하여 치료법을 테스트하고 장기적인 기능적 및 조직학적 결과를 연구할 수 있습니다.