Name: 냉동 버피 코트 샘플에서 유도된 다능성 줄기세포주 재프로그래밍 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 배우세요 냉동 버피 코트에서 유도된 다능성 줄기세포주 재프로그래밍 방법을. 밀도 높은 적아세포 형태를 확인하고 Sendai 바이러스를 이용한 Yamanaka 인자 도입으로 줄기세포를 생성하는 전략을 익히세요.

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<ol><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li>
<li>Ray, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+on+promising+somatic+cell+sources+utilized+for+the+efficient+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">An overview on promising somatic cell sources utilized for the efficient generation of induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Rev Rep. 17 (6), 1954-1974 (2021).</li>
<li>Raab, S., Klingenstein, M., Liebau, S., Linta, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+view+on+human+somatic+cell+sources+for+ipsc+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">A comparative view on human somatic cell sources for ipsc generation.</a> Stem Cells Int. 2014, 768391(2014).</li>
<li>Sauer, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+urinary+epithelial+cells+as+a+source+of+engraftable+hepatocyte-like+cells+using+stem+cell+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Human urinary epithelial cells as a source of engraftable hepatocyte-like cells using stem cell technology.</a> Cell Transplant. 25 (12), 2221-2243 (2016).</li>
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<li>Cerneckis, J., Cai, H., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells+%28ipscs%29%3A+Molecular+mechanisms+of+induction+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells (ipscs): Molecular mechanisms of induction and applications.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 112(2024).</li>
<li>Zhang, X. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+reprogramming+of+human+peripheral+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics+Proteomics+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Cellular reprogramming of human peripheral blood cells.</a> Genomics Proteomics Bioinformatics. 11 (5), 264-274 (2013).</li>
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<li>Robb, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+receptors+and+hematopoietic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Cytokine receptors and hematopoietic differentiation.</a> Oncogene. 26 (47), 6715-6723 (2007).</li>
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<li>Chen, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChen%2C+G+%22Splitting+hESC%2FhiPSC+lines+with+EDTA+in+feeder+free+conditions%22">Splitting hESC/hiPSC lines with EDTA in feeder free conditions</a>. , Stembook. Cambridge (MA). (2008).</li>
<li>Zeltner, N., Lafaille, F. G., Fattahi, F., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-free+derivation+of+neural+crest+progenitor+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Feeder-free derivation of neural crest progenitor cells from human pluripotent stem cells.</a> J Vis Exp. (87), e51609(2014).</li>
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<li>Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brachyury%2C+the+blastopore+and+the+evolution+of+the+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Brachyury, the blastopore and the evolution of the mesoderm.</a> Bioessays. 23 (9), 788-794 (2001).</li>
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<li>Kanai-Azuma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+definitive+gut+endoderm+in+sox17-null+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Depletion of definitive gut endoderm in sox17-null mutant mice.</a> Development. 129 (10), 2367-2379 (2002).</li>
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<li>Verma, I., Seshagiri, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+of+human+pluripotent+stem+cells+in+neuroscience+research+and+cell+transplantation+therapy+for+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Current applications of human pluripotent stem cells in neuroscience research and cell transplantation therapy for neurological disorders.</a> Stem Cell Rev Rep. 21 (4), 964-987 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10cm 표준 조직 배양 접시</td><td>팔콘</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>12개의 웰 플레이트</td><td>팔콘</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 원뿔관</td><td>피셔</td><td>7200886</td><td></td></tr><tr><td>24개의 웰 플레이트</td><td>코닝</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>4% 파라포름알데히드 용액</td><td>써모 사이언티픽</td><td>J19943-K2</td><td></td></tr><tr><td>6개의 웰 플레이트</td><td>피셔 사이언티브</td><td>FB012927</td><td></td></tr><tr><td>accuSpin1R</td><td>피셔 사이언티브</td><td>75003449</td><td></td></tr><tr><td>액티빈 A</td><td>바이오테크네</td><td>338-AC</td><td></td></tr><tr><td>AF488-donkey & alpha; 염소</td><td>인비트로젠</td><td>A11055</td><td></td></tr><tr><td>AF555-당키 & 알파; RBT</td><td>인비트로젠</td><td>A31572</td><td></td></tr><tr><td>AF647-당키와 알파; m</td><td>인비트로젠</td><td>A31571</td><td></td></tr><tr><td>AF647-당키와 알파; RBT</td><td>인비트로젠</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>항생제-항균제(100X)</td><td>피셔</td><td>15 240 096 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>바식스 폴리스티렌 혈청 피펫</td><td>피셔</td><td>14955233 14955234 14955235 14955236</td><td></td></tr><tr><td>BD 투버쿨린 주사기</td><td>피셔</td><td>14-826-87</td><td></td></tr><tr><td>BD 바큐테인 유리 단핵전지 준비(CPT) 튜브</td><td>피셔 사이언티브</td><td>02-685-125</td><td>PBMC가 혈액 수집관을 분리하는 방식</td></tr><tr><td>BD&nbsp; K2EDTA를 사용하는 진공 플라스틱 혈액 채취관: 혈가드 폐쇄</td><td>피셔 사이언티브</td><td>02-657-32</td><td>항응고물질 코팅 혈액 수집관</td></tr><tr><td>B-머캅토에탄올</td><td>피셔</td><td>21 985 023 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>소 젤라틴</td><td>시그마</td><td>G1393</td><td></td></tr><tr><td>브라큐리-T 항체 다클론 염소 IgG</td><td>R& D</td><td>AF2085</td><td></td></tr><tr><td>셀드롭 BF</td><td>데노빅스</td><td>셀드롭 BF</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 5702</td><td>에펜도르프</td><td>EP022628102-1EA</td><td></td></tr><tr><td>화학적으로 정의된 지질 농축물</td><td>피셔</td><td>NC9022744</td><td></td></tr><tr><td>키르 99021 &nbsp;</td><td>R& D</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>산요</td><td>MCO-20AIC</td><td></td></tr><tr><td>냉동 보존 저장 시스템</td><td>맞춤형 바이오제닉 시스템</td><td>V-1500AB</td><td></td></tr><tr><td>크라이오스타 CS10</td><td>줄기세포 기술</td><td>100-1061</td><td>대체 냉동 매체</td></tr><tr><td>CytoTune-iPS 2.0 센다이 재프로그래밍 키트</td><td>피셔</td><td>A16517</td><td></td></tr><tr><td>덱사메타손</td><td>시그마</td><td>D2915</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>피셔</td><td>11965118</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>피셔</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>피셔</td><td>BP231-1</td><td></td></tr><tr><td>DPBS 1X 없이, CA MG와 NBSP;</td><td>피셔</td><td>MT21031CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>피셔</td><td>AM9262</td><td></td></tr><tr><td>적혈구생성(EPO)</td><td>바이오-테크네</td><td>287-TC-500</td><td></td></tr><tr><td>에센셜 6 미디엄 (E6)</td><td>피셔</td><td>A1516401</td><td>미분 기초&nbsp;</td></tr><tr><td>에센셜 8 미디엄 (E8)</td><td>피셔</td><td>A1517001</td><td>hPSC 기저 매체</td></tr><tr><td>EVOS FL 현미경</td><td>열학</td><td>AMF4300</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>VWR</td><td>45000-734</td><td></td></tr><tr><td>FGF 기본 (FGF2)</td><td>바이오테크네</td><td>233-FB/CF&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>겔트렉스</td><td>피셔</td><td>A1413202</td><td>매트릭스 코팅</td></tr><tr><td>Gibco MEM 비필수 아미노산 용액 (100X)</td><td>피셔</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>글루타맥스</td><td>피셔</td><td>35050061</td><td>L-글루타민 대체물&nbsp;</td></tr><tr><td>헤파린</td><td>줄기세포 기술</td><td>7980</td><td></td></tr><tr><td>히스토파크 1077</td><td>시그마</td><td>10771</td><td>밀도 구배 해법 1&nbsp;</td></tr><tr><td>홀로트랜스페린</td><td>시그마</td><td>T0665</td><td></td></tr><tr><td>인간 줄기세포 인자(SCF)</td><td>페프로텍</td><td>300-07-100UG</td><td></td></tr><tr><td>인슐린과 같은 성장인자 1(IGF1)</td><td>페프로텍</td><td>100-11-100UG</td><td></td></tr><tr><td>인터루킨-3(IL-3)</td><td>페프로텍</td><td>200-03-2UG</td><td></td></tr><tr><td>아이소템프 210 수욕</td><td>피셔 사이언티브</td><td>210</td><td></td></tr><tr><td>녹아웃 혈청 대체 요법(KSR)</td><td>피셔</td><td>10828028</td><td>FBS 무료 보충제&nbsp;</td></tr><tr><td>L-아스코르빈산</td><td>시그마</td><td>A4544-100G</td><td></td></tr><tr><td>LDN193189</td><td>스템젠트</td><td>04-0074</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민</td><td>피셔</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>림프홉렙</td><td>줄기세포 기술</td><td>7801</td><td>밀도 구배 해법 2</td></tr><tr><td>마트리젤</td><td>코닝</td><td>CB-40234</td><td>매트릭스 코팅</td></tr><tr><td>마우스 배아 섬유아세포</td><td>피셔</td><td>A34964&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>나노그 다클론 염소 IgG</td><td>R& D</td><td>AF1997-SP</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 바이오뱅킹 및 세포 배양 냉동 튜브</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12-565-163N</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>피셔</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>정제 항-팍스-6 항체 토끼 다클론 IgG</td><td>바이오레전드</td><td>901301</td><td></td></tr><tr><td>QBSF-60 무혈청 미디엄</td><td>퀄리티 바이오컬리컬</td><td>160-204-101</td><td>EM 베이스</td></tr><tr><td>회복 세포 배양 냉동 배지</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>12648010</td><td>대체 냉동 매체</td></tr><tr><td>rh비트론넥틴 (VTN)</td><td>피셔</td><td>A31804</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 미디엄</td><td>피셔</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>SB431542</td><td>R& D</td><td>1614</td><td></td></tr><tr><td>센다이 바이러스 HN 단일클론 항체 마우스 IgG2a</td><td>인비트로젠</td><td>14649482</td><td></td></tr><tr><td>셀레나이트 나트륨</td><td>시그마</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Sox17 항체 다클론 염소 IgG</td><td>R& D</td><td>AF1924</td><td></td></tr><tr><td>StemSpan 적혈구 확장 보충제</td><td>줄기세포 기술</td><td>2692</td><td>대체 상업용 확장 미디엄 보충제</td></tr><tr><td>스템스판 SFEM II 매체</td><td>줄기세포 기술</td><td>9605</td><td>대체 상업용 확장 매체</td></tr><tr><td>초저온 냉동고</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>TSX60086A</td><td></td></tr><tr><td>유니버설 피펫 팁 - 필터링</td><td>VWR</td><td>76322-132< > 76322-134< > 76322-150< > 76322-156</td><td></td></tr><tr><td>XAV939</td><td>바이오테크네</td><td>3748/10</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 이하이드로클로라이드</td><td>바이오젬</td><td>1293823</td><td></td></tr></tbody></table>

냉동 버피 코트 샘플에서 유도된 다능성 줄기세포주 재프로그래밍

Reprogramming Induced Pluripotent Stem Cell Lines from Frozen Buffy Coat Samples

Human pluripotent stem cells (hPSCs) are a valuable tool for disease modeling. Further stem cells can be reprogrammed from adult somatic cells, called ...

reprogramming-induced-pluripotent-stem-cell-lines-from-frozen-buffy

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Stemgent 독스의 Inducible 마우스 TF의 Lentivirus 세트 유도된 pluripotent 줄기 (IPS) 셀에 마우스 배아 섬유아 세포 (MEFs)를 재설 정할 수 있습니다. 다음은 마우스 프로그래밍 전사 요인 Oct4의 독스 - inducible 표현에 대한 프로토콜을 보여줍니다, Sox2, Klf4과 c - Myc은 표현하는 일반적인 MES pluripotency 마커 IPS의 식민지를 생성합니다.

4 전사 인자와 마우스 배아 섬유아 세포를 프로그래밍하여 유도 Pluripotent 줄기 세포의 생성, Doxycycline는 Lentiviral 전달 시스템 Inducible

우리는 함께 retroviral Oct3 / 4, Sox2, Klf4과 c-myc (OSKM)를 인코딩 벡터, 라이브 염색법에 의해 정확하게 다시 프로그램 hiPSC의 신분을 이용하여 인간의 유도된 pluripotent 줄기 세포 (hiPSC) Tra-로 인간의 체세포의 효율적인 언어학 재활을위한 프로토콜을 제시 1-81 항체.

인간 유도 Pluripotent 줄기 세포의 선택 및 분리 식민지는 성인 섬유아 세포에서 다시 프로그램

여기 하나의 lentiviral 재활 벡터를 사용하여 말초 혈 3-4 ML에서 인간 iPSCs의 생성을위한 간단하고 효과적인 프로토콜을 보여줍니다. 즉시 사용할 수 혈액 세포의 재 프로그래밍하면 폭 넓은 연구 공동체에 액세스하여 iPSC 기술의 활용을 촉진 것을 약속드립니다.

STEMCCA Lentiviral 벡터를 사용하여 말초 혈에서 인간 유도 만능 줄기 세포의 생성

여기에서는 에피솜 기반 재프로그래밍 전략과 히스톤 탈아세틸화효소 억제제를 사용하여 말초 혈액에서 인간 유도 만능 줄기 세포를 생성하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

에피 솜과 HDAC 억제제를 사용하여 혈액에서 효율적인 유도 만능 줄기 세포 생성

유도 만능 줄기 세포 (iPSCs)의 임상 응용 프로그램 및 기초 연구에 대한 환자의 특정 조직의 소스를 나타냅니다. 여기서는 비 - 에피 솜 통합 플라스미드를 사용하여 바이러스 프리 iPSCs에 냉동 버피 코트로부터 얻은 인간의 말초 혈 단핵 세포 (PBMNCs)를 재 프로그래밍 상세한 프로토콜을 제시한다.

비 통합 에피 솜 플라스미드를 사용하여 냉동 버피 코트에서 유도 만능 줄기 세포의 생성

우리는 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 유도만능줄기세포(iPSC)로 재프로그래밍하는 프로토콜을 제안합니다. 원심분리를 통해 형질도입된 혈액 세포를 매트릭스 코팅된 플레이트에 도금함으로써 부유 세포에서 iPSC를 성공적으로 유도할 수 있습니다. 이 기술은 PBMC 및 CBMC와 같은 셀에 대한 간단하고 효과적인 재프로그래밍 프로토콜을 제안합니다.

센다이 바이러스 원심 분리를 이용하여 혈액 세포로부터 유도 만능 줄기 세포의 생성

이 프로토콜은 인간 성인 말초 혈액 세포에서 통합이 없는 iPSC를 효율적으로 생성하기 위한 자세한 방법을 설명합니다. 재프로그래밍 인자를 발현하기 위해 KLF4, MYC, BCL-XL 또는 OCT4 및 SOX2와 같은 4개의 oriP/EBNA 기반 에피솜 벡터를 사용하여 1mL의 말초 혈액에서 수천 개의 iPSC 콜로니를 얻을 수 있습니다.

에피 솜 벡터를 이용하여 인간 말초 혈액 단핵 세포로부터의 통합없이 유도 다 능성 줄기 세포의 생성

이 프로토콜은 기본 양수 액체와 막 중간 엽 줄기 세포의 화학적으로 완벽 하 게 정의 된 조건에서 비 통합 episomal 접근을 사용 하 여 유도 만능 줄기 세포로 재프로그래밍 설명 합니다. 추출, 문화, 프로그래밍, 그리고 엄격한 방법으로 결과 유도 만능 줄기 세포의 특성의 절차 자세히 나와 있습니다.

기본 양수 및 Pluripotency 이종 무료 조건에서 막 셀 프로그래밍

여기 우리 재활 요인 인코딩 수정된 mRNAs를 사용 하 여 유도 만능 줄기 세포로 인간의 기본 섬유 아 세포를 재 설 정할 임상 관련, 높은 효율, 피더 무료 메서드를 설명 하 고 성숙한 예측에 관한-367/302 모방. 또한는 재활 효율성을 평가 하는 방법 클론 iPSC 식민지 확장 및 pluripotency 마커 TRA-1-60의 식을 확인 있습니다.

인간의 기본 섬유 아 세포의 유도 만능 줄기 세포로 재프로그래밍 RNA 기반

세포 재프로그래밍은 다능성 세포 상태를 조절하고 유지하는 주요 유전자의 도입을 요구합니다. 기술된 프로토콜은 바이러스/통합 방법 없이 인간 진피 섬유아세포로부터 유도된 만능 줄기 세포(iPSCs) 콜로니의 형성을 가능하게 하지만, 세포 방어 메커니즘을 감소시키는 면역 회피 인자와 결합된 비변형 RNA(NM-RNAs)를 사용한다.

비통합 방법을 사용하여 복부 피부에서 성인 인간 진피 섬유 아세포의 분리 및 유도 만능 줄기 세포의 생성

배우세요 냉동 버피 코트에서 유도된 다능성 줄기세포주 재프로그래밍 방법을. 밀도 높은 적아세포 형태를 확인하고 Sendai 바이러스를 이용한 Yamanaka 인자 도입으로 줄기세포를 생성하는 전략을 익히세요.

냉동 버피 코트 샘플에서 유도된 다능성 줄기세포주 재프로그래밍

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