Name: 크기 배제 크로마토그래피를 이용한 쥐 골격근 및 골수에서 작은 세포외 소포 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-23T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 배우세요 크기 배제 크로마토그래피를 이용한 쥐 골격근 및 골수에서 작은 세포외 소포 분리 방법을. 차등 원심분리와 SEC를 결합하여 최소 조직 입력으로 고순도 sEV를 얻을 수 있으며, 분자 및 기능 분석에 적합합니다.

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	<li>Whitham, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+provide+a+means+for+tissue+crosstalk+during+exercise.">Extracellular vesicles provide a means for tissue crosstalk during exercise.</a> Cell Metab. 27 (1), 237-251.e4 (2018).</li><li>Kumar, M. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+tools+and+targets+in+therapy+for+diseases.">Extracellular vesicles as tools and targets in therapy for diseases.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 27 (2024).</li><li>Fonseka, P., Mathivanan, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+biogenesis,+cargo+sorting+and+implications+in+disease+conditions.">Extracellular vesicles biogenesis, cargo sorting and implications in disease conditions.</a> Cells. 12 (2), (2023).</li><li>Taraboletti, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioavailability+of+VEGF+in+tumor-shed+vesicles+depends+on+vesicle+burst+induced+by+acidic+pH.">Bioavailability of VEGF in tumor-shed vesicles depends on vesicle burst induced by acidic pH.</a> Neoplasia. 8 (2), 96-103 (2006).</li><li>Dakup, P. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+state-of-the-art+proteomics+analysis+for+biomarker+development+from+plasma+extracellular+vesicles.">Challenges and opportunities in state-of-the-art proteomics analysis for biomarker development from plasma extracellular vesicles.</a> Proteomics. , (2025).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EV-origin:+Enumerating+the+tissue-cellular+origin+of+circulating+extracellular+vesicles+using+exLR+profile.">EV-origin: Enumerating the tissue-cellular origin of circulating extracellular vesicles using exLR profile.</a> Comput Struct Biotechnol J. 18, 2851-2859 (2020).</li><li>Shero, J. A., Lindholm, M. E., Sandri, M., Stanford, K. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+as+a+mediator+of+interorgan+crosstalk+during+exercise:+Implications+for+aging+and+obesity.">Skeletal muscle as a mediator of interorgan crosstalk during exercise: Implications for aging and obesity.</a> Circ Res. 136 (11), 1407-1432 (2025).</li><li>Vanhie, J. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+exercise-+and+high-fat+diet-induced+bone+marrow+extracellular+vesicles+in+stress+hematopoiesis.">The role of exercise- and high-fat diet-induced bone marrow extracellular vesicles in stress hematopoiesis.</a> Front Physiol. 13, 1054463 (2022).</li><li>Pinto, A. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+therapeutic+potential+of+contracting+skeletal+muscle-released+extracellular+vesicles+in+cancer:+Current+insights+and+future+directions.">Exploiting the therapeutic potential of contracting skeletal muscle-released extracellular vesicles in cancer: Current insights and future directions.</a> J Mol Med (Berl). 102 (5), 617-628 (2024).</li><li>Welsh, J. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+(MISEV2023):+From+basic+to+advanced+approaches.">Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches.</a> J Extracell Vesicles. 13 (2), e12404 (2024).</li><li>De Sousa, K. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+extracellular+vesicles+and+future+directions+in+diagnosis+and+therapy.">Isolation and characterization of extracellular vesicles and future directions in diagnosis and therapy.</a> Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 15 (1), e1835 (2023).</li><li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+simplified+dichotomic+size-exclusion+chromatography+for+isolating+extracellular+vesicles+toward+clinical+applications.">Establishment of a simplified dichotomic size-exclusion chromatography for isolating extracellular vesicles toward clinical applications.</a> J Extracell Vesicles. 10 (11), e12145 (2021).</li><li>Ahmadian, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+storage+and+freezing+protocols+for+extracellular+vesicles:+A+systematic+review.">Different storage and freezing protocols for extracellular vesicles: A systematic review.</a> Stem Cell Res Ther. 15 (1), 453 (2024).</li><li>Watanabe, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+releases+extracellular+vesicles+with+distinct+protein+and+microRNA+signatures+that+function+in+the+muscle+microenvironment.">Skeletal muscle releases extracellular vesicles with distinct protein and microRNA signatures that function in the muscle microenvironment.</a> PNAS Nexus. 1 (4), pgac173 (2022).</li><li>Magalhaes-Gama, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+cell-derived+extracellular+vesicles+in+peripheral+blood+and+bone+marrow+of+B-cell+acute+lymphoblastic+leukemia+pediatric+patients:+Proof-of-concept+study.">Exploring cell-derived extracellular vesicles in peripheral blood and bone marrow of B-cell acute lymphoblastic leukemia pediatric patients: Proof-of-concept study.</a> Front Immunol. 15, 1421036 (2024).</li><li>Potter, D. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-derived+extracellular+vesicles+attenuate+pulmonary+vascular+permeability+and+lung+injury+induced+by+hemorrhagic+shock+and+trauma.">Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles attenuate pulmonary vascular permeability and lung injury induced by hemorrhagic shock and trauma.</a> J Trauma Acute Care Surg. 84 (2), 245-256 (2018).</li><li>Osteikoetxea, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+detergent+sensitivity+of+extracellular+vesicle+subpopulations.">Differential detergent sensitivity of extracellular vesicle subpopulations.</a> Org Biomol Chem. 13 (38), 9775-9782 (2015).</li><li>Kim, T., Hong, J. W., Lee, L. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+methods+of+isolation+and+purification+of+extracellular+vesicles.">Efficient methods of isolation and purification of extracellular vesicles.</a> Nano Converg. 12 (1), 45 (2025).</li><li>Bracht, J. W. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choice+of+size-exclusion+chromatography+column+affects+recovery,+purity,+and+miRNA+cargo+analysis+of+extracellular+vesicles+from+human+plasma.">Choice of size-exclusion chromatography column affects recovery, purity, and miRNA cargo analysis of extracellular vesicles from human plasma.</a> Extracell Vesicles Circ Nucl Acids. 5 (3), 497-508 (2024).</li><li>Mo, W., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle-mediated+bidirectional+communication+between+the+liver+and+other+organs:+Mechanistic+exploration+and+prospects+for+clinical+applications.">Extracellular vesicle-mediated bidirectional communication between the liver and other organs: Mechanistic exploration and prospects for clinical applications.</a> J Nanobiotechnology. 23 (1), 190 (2025).</li></ol>

```html
<table><tbody><tr><td>1.5 mL 원심분리 튜브</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>프로토콜 전반에 사용되는 일반 마이크로원심분리 튜브</td></tr><tr><td>1.5 mL 저단백질 결합 튜브</td><td>Sarstedt</td><td>72.706.600</td><td>EV 취급, SEC 분획 회수 및 저장에 사용</td></tr><tr><td>0.2 mL PCR 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-222-262</td><td>파켓-튜브 골수 추출 설정에 사용</td></tr><tr><td>16 G 바늘</td><td>BD</td><td>305197</td><td>0.2 mL PCR 튜브를 뚫는 데 사용</td></tr><tr><td>30 &micro;m 세포 여과기</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-098-458</td><td>골격근 샘플 여과에 사용</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.11727</td><td>핀셋 소독에 사용</td></tr><tr><td>바이오안전 캐비닛</td><td>NA</td><td>NA</td><td>무균 조직 취급에 사용</td></tr><tr><td>뼈 절단 도구</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-001-976</td><td>대퇴골과 경골을 분리하고 골수를 노출시키는 데 사용</td></tr><tr><td>우청백질(BSA)</td><td>BioShop</td><td>ALB001</td><td>웨스턴 블롯 블록킹 및 항체 희석에 사용</td></tr><tr><td>염화 칼슘 이수화물(CaCl2&middot;2H2O)</td><td>BioShop</td><td>CCL302</td><td>HEPES 버퍼 준비에 사용</td></tr><tr><td>탄소 코팅 구리 그리드, 200-메시</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>930342</td><td>TEM 샘플 준비에 사용</td></tr><tr><td>원심 필터, 100 kDa MWCO</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC810096</td><td>EV 농축에 사용</td></tr><tr><td>콜라게나제 D</td><td>Roche</td><td>11088858001</td><td>골격근 효소 소화에 사용</td></tr><tr><td>크리오바이얼</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>조직 및 골수 저장에 사용</td></tr><tr><td>디이온화수(초순수)</td><td>NA</td><td>NA</td><td>버퍼 준비 및 TEM 세척 단계에 사용</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>11284932001</td><td>골격근 효소 소화에 사용</td></tr><tr><td>드라이아이스</td><td>NA</td><td>NA</td><td>샘플 냉각 및 운송에 사용</td></tr><tr><td>엔한스드 화학발광 기질</td><td>Biorad</td><td>1705061</td><td>웨스턴 블롯 검출에 사용</td></tr><tr><td>필터 유닛, 0.22 &micro;m</td><td>Sarstedt</td><td>83.3941.501</td><td>해당되는 경우 PBS 필터에 사용</td></tr><tr><td>포스셉/핀셋</td><td>MilliporeSigma</td><td>F3892</td><td>조직 취급에 사용</td></tr><tr><td>글루타르알데하이드</td><td>NA</td><td>NA</td><td>TEM 고정에 사용</td></tr><tr><td>글리신</td><td>NA</td><td>NA</td><td>TEM 그리드 세척 단계에 사용</td></tr><tr><td>Hank's Balanced Salt Solution(HBSS)</td><td>Gibco</td><td>14175-095</td><td>DNase I 스톡 준비에 사용</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>BioShop</td><td>HEP001.500</td><td>HEPES-NaOH 버퍼 준비에 사용</td></tr><tr><td>호박 과산화물 결합 스트렙타비딘</td><td>Thermo Fisher</td><td>S911</td><td>웨스턴 블롯 검출에 사용</td></tr><tr><td>화학발광 이미징 시스템</td><td>Biorad</td><td>12003153</td><td>웨스턴 블롯 멤브레인 이미지화에 사용</td></tr><tr><td>KCl</td><td>BioShop</td><td>POC308</td><td>HEPES 버퍼 준비에 사용</td></tr><tr><td>염화 마그네슘(MgCl2)</td><td>BioShop</td><td>MAG510.500</td><td>HEPES 버퍼 준비에 사용</td></tr><tr><td>2-메틸부탄</td><td>Thermo Fisher</td><td>78-78-4</td><td>골격근 스냅 동결에 사용</td></tr><tr><td>밀리그램 저울</td><td>MilliporeSigma</td><td>Z741359</td><td>조직 및 골수 무게 측정에 사용</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>BioShop</td><td>SOD004.1</td><td>HEPES 버퍼 준비에 사용</td></tr><tr><td>나노입자 추적 분석 기기</td><td>Malvern Panalytical</td><td>NanoSight NS300</td><td>입자 크기 및 계수에 NanoSight NS300 사용</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>BioShop</td><td>SHY500.500</td><td>pH 조절에 사용</td></tr><tr><td>니트로셀룰로스 멤브레인</td><td>BioRad</td><td>1704271</td><td>웨스턴 블롯 전이에 사용</td></tr><tr><td>뉴테이팅 믹서</td><td>Labnet</td><td>&nbsp;S0500</td><td>효소 소화 중 사용</td></tr><tr><td>P1000 피펫</td><td>MilliporeSigma</td><td>FA10006M-1EA</td><td>조직 전달에 사용</td></tr><tr><td>피펫 팁, 1 mL</td><td>Sarstedt</td><td>70.3050.275</td><td>조직 단편 전달을 위해 팁이 잘려 구멍이 넓어짐</td></tr><tr><td>인산염 완충 생리 용액(PBS)</td><td>Wisent</td><td>INC 811.012-FL</td><td>프로토콜 전반에 사용; SEC ��

크기 배제 크로마토그래피를 이용한 쥐 골격근 및 골수에서 작은 세포외 소포 분리

Isolation of Small Extracellular Vesicles from Murine Skeletal Muscle and Bone Marrow by Size-Exclusion Chromatography

Small extracellular vesicles (sEVs) are nanosized, lipid-bound particles that mediate intercellular communication through the transfer of proteins, ...

isolation-small-extracellular-vesicles-from-murine-skeletal-muscle

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

출처: Watson, DC, et al. 대장균 및 기타 박테리아로부터 세포외 소포의 확장 가능한 분리 및 정제. J. Vis. 경험. (2021년)이 비디오는 박테리아 배양 여과액에서 박테리아 세포외 소포(EV)를 분리하기 위해 다공성 수지 비드를 사용한 크기 배제 크로마토그래피를 사용하는 방법을 보여줍니다. 더 큰 EV는 수지 기공을 우회하여 조기에 용리되는 반면, 더 작은 단백질은 기공으로 들어가 나중에 용리됩니다.

크기배제 크로마토그래피를 이용한 박테리아 세포외 소포의 분리 

이 비디오에서는 박테리아에서 유래한 외막 소포 또는 OMV의 이질적인 집단을 분리하는 기술(크기 배제 크로마토그래피)을 시연합니다. 이러한 소포는 나노 크기의 구형 구조이며 크기 배제 크로마토그래피를 통해 크기에 따라 크고 작은 하위 모집단으로 분리됩니다.

Size Exclusion Chromatography Based Separation of Bacterial Extracellular Vesicles: A technique to separateing of gram-negative bacterial outer membrane vesicles (박테리아 세포외 소포체의 이질성 집단을 크기에 따라 분리하는 기술)

이 동영상은 결핵균(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)의 배양 여과액에서 박테리아 세포외 소포체(EV)를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 기술을 보여줍니다. 이 기술은 다공성 수지 충전 컬럼을 사용하여 EV의 정제된 분획을 얻습니다. 다공성 입자는 더 작은 단백질이 기공으로 들어가도록 선택적으로 허용하여 용리 속도를 늦춥니다. 동시에 EV는 크기가 크기 때문에 모공으로 들어가는 것이 배제되고 먼저 용출됩니다.

Mycobacterial Extracellular Vesicles를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피 기술

이 프로토콜은 1) 성체 마우스 비복근에서 일차 섬유아세포를 분리하고 배양하는 방법과 2) 자당 밀도 구배와 웨스턴 블롯 분석을 결합한 차등 초원심분리 방법을 사용하여 엑소좀을 정제하고 특성화하는 방법을 보여줍니다.

골격근 섬유아세포(Skeletal Muscle Fibroblast)에서 엑소좀의 분리 및 특성 분석(Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts)

세균성 소포는 병인에 중요한 역할을 하고 유망한 생명 공학 응용 프로그램이 있습니다. 소포의 이질성은 분석과 사용을 복잡하게 합니다. 따라서 다양한 크기의 소포를 분리하는 간단하고 재현 가능한 방법이 필요합니다. 여기에서, 우리는 Aggregatibacter actinomycetemcomitans에의해 생성된 이기종 소포를 분리하기 위하여 크기 배제 크로마토그래피의 사용을 보여줍니다.

크기 배제 크로마토그래피는 세균 외부 막 소포 이질성을 분석

여기서 프로토콜은 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 세포외 소포가 컨디셔닝 세포 배양 배지로부터 적절하게 분리될 수 있음을 보여줍니다.

조절된 세포 배양 배지에서 세포외 소포를 분리하기 위한 크기 배제 크로마토그래피

이 프로토콜은 간단한 실험실 규모의 벤치탑 설정으로 인간 탯줄 유래 중간엽 줄기 세포의 작은 세포외 소포(hUC-MSC-sEV)를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 hUC-MSC-sEV의 크기 분포, 단백질 농도, sEV 마커 및 형태는 각각 나노입자 추적 분석, BCA 단백질 분석, 웨스턴 블롯 및 투과 전자 현미경으로 특성화됩니다.

인간 중간엽 줄기세포에서 작은 세포외 소포를 분리하는 간단한 탁상형 여과 방법

이 프로토콜은 공기 분무 노즐의 크기, 시스 유체 압력, 샘플 흐름 압력, 전압, 이득 및 트리거링 임계값 매개변수를 최적화하여 작은 세포외 소포에 대한 신속하고 크기별 분리 방법을 제공합니다.

small extracellular vesicle의 High-throughput Isolation and Purification (고처리량 분리 및 정제를 위한 유세포 분석 분류 파라미터 최적화)

세포외 소포체는 생물의학 응용 분야에 엄청난 가능성을 가지고 있지만, 현재의 분리 방법은 시간이 많이 걸리고 임상적으로 사용하기에는 비실용적입니다. 이 연구에서는 최소한의 단계로 연속적으로 많은 양의 생체 유체에서 세포외 소포체를 직접 분리할 수 있는 미세유체 장치를 제시합니다.

분기된 A4F 미세유체 장치를 사용한 대용량 시료에서 세포외 소포의 단일 단계 분리

이 프로토콜은 기계적 분리, 효소 해리, 여과 및 차등 초원심분리를 통해 설치류 근육 조직에서 골격근 간질성 세포외 소포체(SkM-EV)를 분리하고 정제하는 것을 목표로 합니다. 일관성과 신뢰성을 보여줍니다. 분리된 SkM-EV는 근육 항상성 및 질병에 대한 통찰력을 제공하며, 진단 바이오마커 또는 치료 수단으로 응용될 수 있습니다.

골격근 간질성 세포외 소포체의 효소 분리

배우세요 크기 배제 크로마토그래피를 이용한 쥐 골격근 및 골수에서 작은 세포외 소포 분리 방법을. 차등 원심분리와 SEC를 결합하여 최소 조직 입력으로 고순도 sEV를 얻을 수 있으며, 분자 및 기능 분석에 적합합니다.

크기 배제 크로마토그래피를 이용한 쥐 골격근 및 골수에서 작은 세포외 소포 분리

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