Name: 마우스 뇌 미세혈관 내피세포의 분리 및 배양 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: 배우세요 신생아 마우스 대뇌피질에서 뇌 미세혈관 내피세포(BMEC)를 분리하고 배양하는 재현 가능한 프로토콜을. CD31 면역선별과 TEER 측정을 통해 혈뇌장벽 생리학 및 신경혈관 상호작용을 연구할 수 있습니다.

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<ol><li>Kadry, H., Noorani, B., Cucullo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blood-brain+barrier+overview+on+structure%2C+function%2C+impairment%2C+and+biomarkers+of+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">A blood-brain barrier overview on structure, function, impairment, and biomarkers of integrity.</a> Fluids Barriers CNS. , (2020).</li>
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</ol>

```html
<table>
 <tbody>
 <tr>
 <td>60 mm 배양 플레이트</td>
 <td>Corning</td>
 <td>430166</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>96 웰 배양 플레이트</td>
 <td>Corning</td>
 <td>41122107</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>아세트산</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A6283</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>항생제-항진균제(선택 사항)</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>15240062</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-CD31</td>
 <td>Santa Cruz</td>
 <td>sc-46694</td>
 <td>1:100</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-GFAP</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>13-0300</td>
 <td>1:500</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-GLUT1</td>
 <td>Abcam</td>
 <td>ab115730</td>
 <td>1:200</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-Iba1</td>
 <td>Santa Cruz</td>
 <td>sc-32725</td>
 <td>1:500</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-mouse IgG Alexa Fluor (594 Dye)</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>A-11005</td>
 <td>1:500</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor (488 Dye)</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>A-11008</td>
 <td>1:500</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>자동 및 혈청 파이펫</td>
 <td>Oxford LP</td>
 <td>OXL.OXL.OSP-5C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>기본 배지(콜라겐 용액용)</td>
 <td>Gibco (DMEM)</td>
 <td>11965092</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A9647</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase type II</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C6885</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DAPI</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>62248</td>
 <td>1 μg/mL</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM (고 포도당)</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>11965092</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EndoGRO-MV Complete Medium</td>
 <td>Merck Millipore</td>
 <td>SCME004</td>
 <td>내피 세포 성장 배지</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Falcon 튜브(15 및 50 mL)</td>
 <td>Corning</td>
 <td>352096 / 352070</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
 <td>Gibco (Thermo Fisher)</td>
 <td>16000044</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>형광 현미경</td>
 <td>Motic</td>
 <td>BA410</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>장갑, 마스크, 실험실 소모품</td>
 <td>다양한 공급업체</td>
 <td>—</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>헤파린(100 U/mL)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>H3393</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>역행 현미경</td>
 <td>Olympus</td>
 <td>CKX41</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>마그네틱 분리 자석</td>
 <td>EasySep</td>
 <td>NC9284020</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>오르비탈 셰이커(37 °C)</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>SK-0180-S</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Parafilm</td>
 <td>Bemis</td>
 <td>PM996</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PBS (1×)</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>10010023</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>냉장 원심분리기</td>
 <td>HITACHI</td>
 <td>CT5RE</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>스칼펠</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>다양함</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>가위 및 미세 핀셋</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>다양함</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>무균 니트로셀룰로스 멤브레인</td>
 <td>BIO-RAD</td>
 <td>1620094</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Type I 콜라겐</td>
 <td>Corning</td>
 <td>30394</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
```

마우스 뇌 미세혈관 내피세포의 분리 및 배양

Isolation and Culture of Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) are the main cellular component of the blood-brain barrier (BBB) and play a key role in regulating molecular ...

본 연구에서는 건강한 상태와 질환 상태에서의 신경혈관 기능을 조사하기 위해 뇌 혈관내피세포를 분리하고 배양하는 방법을 살펴봅니다. 이 프로토콜은 신경발달 및 임신 관련 질환에서 태아의 뇌 혈관내피를 연구하는 데 활용될 수 있습니다.먼저, 생후 5일 된 새끼 쥐 5마리를 준비합니다. 새끼 쥐를 안락사시킨 후, 층류 생물안전작업대 내에서 뇌를 적출하여 멸균된 차가운 PBS가 들어 있는 50-milliliter 원심분리관에 넣습니다. 멸균된 니트로셀룰로오스 막 위에 각 뇌를 조심스럽게 굴려 뇌수막을 분리합니다. 뇌를 차가운 PBS가 담긴 100-millimeter 플레이트로 옮깁니다. 멸균 메스를 사용하여 뇌간, 소뇌, 시상 및 후각구를 제거합니다. 뇌수막이 제거된 대뇌 피질을 수집한 즉시, 얼음 위에 놓인 5 milliliters의 PBS가 담긴 50-milliliter 원심분리관으로 옮깁니다. 멸균 가위를 사용하여 조직을 기계적으로 분쇄합니다. 1-milliliter 피펫을 사용하여 눈에 보이는 파편이 없는 균질한 현탁액이 얻어질 때까지 피펫팅합니다. 샘플을 2 milliliters의 collagenase type 2 용액이 들어 있는 멸균 15-milliliter 원심분리관으로 옮깁니다. 튜브를 37 degrees Celsius의 오비탈 쉐이커에 넣고 180 revolutions per minute로 2시간 동안 반응시킵니다. 현탁액에 10% FBS가 첨가된 5 milliliters의 Dulbecco's modified Eagle medium 또는 DMEM을 추가합니다. 3000 g에서 10분 동안 원심분리합니다. 상층액을 제거한 후, 펠릿을 4 milliliters의 20% BSA in PBS에 재현탁합니다. 세포를 3000 g에서 20분 동안 원심분리합니다. 파스퇴르 피펫을 사용하여 마이엘린이 포함된 상단의 우윳빛 층을 제거하고 나머지 상층액을 버립니다. 펠릿을 10% FBS가 포함된 2 milliliters의 DMEM에 재현탁하고 다시 10분 동안 원심분리합니다. 상층액을 버린 후, 최종 펠릿을 10% FBS가 첨가된 1 milliliter의 DMEM에 부드럽게 재현탁합니다. 그런 다음 준비된 배양 플레이트에서 코팅 용액을 제거하고 각 웰을 멸균 PBS로 두 번 헹굽니다. 재현탁한 세포를 코팅된 플레이트에 접종하고, 세포가 90%에서 100% 합류도(confluence)에 도달할 때까지 배양합니다.배양된

isolation-and-culture-of-mouse-brain-microvascular-endothelial-cells

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

여기, 우리는 murine 폐동맥 내피 세포의 격리와 문화 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 정비사 및 효소 폐 조직 분리뿐만 아니라 안티 - PECAM - 1과 대부분 microvascular 원산지 순수한 내피 세포 인구를 생산 자성 비즈에 복합 백신 ICAM - 2 항체를 사용하여 2 단계 정화 과정으로 구성됩니다.

신생아 마우스의 폐 내피 세포의 분리 및 문화

이 방법은 마우스의 뇌에서 microvascular 내피 세포를 분리하고 불멸하게하다하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 뇌 조직, 소화 단계, 시딩하고 세포의 불멸화의 균질화부터 단계별로 절차를 설명합니다. 보통, 그것은 동질, 불후의 microvascular 내피 세포 라인을 얻기 위해 다섯 주 소요됩니다.

로 불후의 손쥐 뇌 Microvascular 내피 세포 라인의 생성<em&gt; 체외에서</em&gt; 혈액 뇌 장벽 모델

이 비디오는 밀도 구배 원심분리와 효소 소화 메호드의 조합을 사용하여 쥐의 뇌에서 미세혈관을 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 미세혈관은 콜라겐과 피브로넥틴 매트릭스로 사전 코팅된 배양 플라스크에서 배양하여 내피 세포 콜로니를 얻을 수 있습니다.

쥐 뇌 미세혈관에서 내피 세포 배양: 쥐 뇌의 미세혈관에서 내피 세포를 분리 및 배양하는 절차

이 비디오는 쥐의 뇌에서 대뇌 주피세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 세포는 주피세포 증식을 촉진하기 위해 주피세포 특이적 배지에서 배양됩니다.

Isolating and Culturing Mouse Cerebral Pericytes(쥐 대뇌 주위 세포의 분리 및 배양)

이 비디오는 쥐의 대뇌 실질에서 내피관을 분리하는 방법을 보여줍니다. 효소 분해와 기계적 해리의 조합을 통해 이 과정은 내피 세포가 있는 온전한 튜브를 생성합니다.

Preparing Cerebral Endothelial Tubes from Mouse Parenchymal Arterioles(쥐 실질 세동맥에서 대뇌 내피관 준비)

뇌 미세혈관 내피 세포(BMEC)는 혈액과 중추신경계(CNS), 이른바 혈액-뇌-장벽(BBB)을 분리하는 고도로 조절되는 장벽을 형성하는 특정 접합 단백질에 의해 상호 연결되어 있습니다. 이 프로토콜에서 논의된 바와 같이 1차 쥐 뇌 미세혈관 내피 세포의 분리는 BBB의 상세한 체외 연구를 가능하게 합니다.

차 설치류 뇌 미세 혈관 내피 세포의 분리

혈관 내피 세포는 많은 중요한 심혈관 질환에서 중요한 역할을 합니다. 이 기사에서는 특별한 장비를 사용하지 않고 쥐 대동맥에서 내피 세포를 분리하고 확장하는 간단한 방법을 설명합니다. 당사의 프로토콜은 내피 세포 생리병리학에서 메커니즘을 식별하는 효과적인 수단을 제공합니다.

분리 및 마우스 대동맥 내피 세포의 차 문화

우리는 쥐의 뇌의 혈관 구획을 정화할 수 있는 프로토콜을 설명합니다. 고립된 뇌 혈관에는 긴밀한 연접으로 연결되어 있고 연속적인 기저 층막, 주위 세포, 혈관 평활근 세포 및 혈관 주위 성상교세포로 둘러싸인 내피 세포가 포함됩니다.

마우스 뇌 혈관의 정화

혈액 뇌 장벽의 범위를 유지하는 것은 중추 신경계의 항상성을 유지하기위한 열쇠입니다. 이 프로토콜은 혈액 - 뇌 장벽 범위를 조정하는 근본적인 병적 과정을 묘사하는 체외 기술을 설명합니다.

혈액 뇌 장벽 메쉬와 유사한 혈관 형성 및 분열을 평가하기위한 In vitro 시험 법

Microvascular 내 피 세포 골격 근육 (MMEC)의 근육 모세 혈관의 안 벽을 형성 하 고 둘 다 조절 근육 조직과 혈액 사이 (면역) 세포의 마이그레이션 및 체액/분자의 교환. 기본 murine MMEC의 격리, 여기에 설명 된 대로 "myovascular 단위"의 종합 체 외 조사 수 있습니다.

기본 Murine 골격 근육 Microvascular 내 피 세포의 고립

대뇌 실질 세동맥으로부터의 무손상 마우스 대뇌 내피 "튜브"의 집중적 인 준비는 뇌 혈류 조절을 연구하기 위해 예시된다. 또한, 우리는 세포 내 [Ca2+] 및 막 전위의 변화를 포함한 주요 세포 신호 전달 경로의 형광 이미징 및 전기 생리학 측정을위한 내피 연구 모델의 실험 강점을 입증합니다.

마우스 뇌 실질의 동맥 내피의 분리 및 기능 분석

배우세요 신생아 마우스 대뇌피질에서 뇌 미세혈관 내피세포(BMEC)를 분리하고 배양하는 재현 가능한 프로토콜을. CD31 면역선별과 TEER 측정을 통해 혈뇌장벽 생리학 및 신경혈관 상호작용을 연구할 수 있습니다.

마우스 뇌 미세혈관 내피세포의 분리 및 배양

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