Name: 대 장균 으로부터 수소포빈 SC16의 재조합 생산 및 정제 및 형광 분석법을 이용한 자기 조립 모니터링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: 배우세요 대장균에서 SC16 수소포빈의 재조합 생산 및 정제 방법과 형광 분석법을 이용한 자기 조립 모니터링 기술입니다. 이 프로토콜은 단백질 생화학 연구에 활용됩니다.

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<table><tbody><tr><td>2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>145224-94-8</td><td>자기조립 분석용 버퍼 구성 요소</td></tr><tr><td>5 mL 원형 바닥 폴리스티렌 튜브</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td>저용량 자기조립 분석에 사용</td></tr><tr><td>96웰 검은색 폴리스티렌 마이크로플레이트</td><td>Grenier</td><td>655076</td><td>마이크로플레이트 판독기에서 형광 측정에 사용</td></tr><tr><td>아크릴아마이드/비스-아크릴아마이드 (29:1) 용액 (40%)</td><td>BioShop</td><td>ACR004.500</td><td>SDS-PAGE 겔 준비에 사용</td></tr><tr><td>아가르</td><td>BioShop</td><td>AGR002.1</td><td>암피실린 내성 LB 플레이트 제조에 사용되는 아가르</td></tr><tr><td>암피실린</td><td>IBI Scientific</td><td>IB02040</td><td>LB-아가르 플레이트에 사용되는 항생제</td></tr><tr><td>2.8 L Fernbach 플라스크 (배플 포함)</td><td>Fisher Scientific</td><td>955239</td><td>대용량 박테리아 배양 성장에 사용</td></tr><tr><td>β-머캅토에탄올</td><td>TCI Chemicals</td><td>60-24-2</td><td>SDS-PAGE 샘플 준비에 사용되는 환원제</td></tr><tr><td>칼럼 (1.5 cm 직경 중력 칼럼)</td><td>Bio-Rad</td><td>7371522</td><td>니켈 친화성 정제에 사용</td></tr><tr><td>투석 튜빙 (3500 kDa MWCO)</td><td>BioDesign</td><td>D302</td><td>정제 중 버퍼 교환에 사용</td></tr><tr><td>발광 필터</td><td>Edmund Optics</td><td>84080</td><td>ThT 분석에 사용 (494 nm, 대역통과 20 nm)</td></tr><tr><td>자극 필터</td><td>Edmund Optics</td><td>67012</td><td>ThT 분석에 사용 (438 nm, 대역통과 24 nm)</td></tr><tr><td>형광 마이크로플레이트 판독기</td><td>Tecan</td><td>Infinite F200 Pro</td><td>ThT 형광 강도 측정에 사용</td></tr><tr><td>핫플레이트</td><td>Lab Fish</td><td>HS5C</td><td>온도 모니터링이 있는 수조 설정에 사용</td></tr><tr><td>염산 (HCl)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A144-212</td><td>버퍼 pH 조정에 사용</td></tr><tr><td>이미다졸</td><td>TCI Chemicals</td><td>288-32-4</td><td>IMAC 정제 (세척 및 용출 버퍼)에 사용</td></tr><tr><td>아이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노시드 (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367-93-1</td><td>E. coli에서 단백질 발현 유도</td></tr><tr><td>LB 브로스 (Lennox)</td><td>BioShop</td><td>LBL405.5</td><td>박테리아 배양을 위한 성장 배지</td></tr><tr><td>저속 냉장 원심분리기</td><td>Beckman Coulter</td><td>360291</td><td>세포 저장 전 세포를 펠릿화하는 데 사용</td></tr><tr><td>니켈 NTA 아가로스 비드</td><td>GoldBio</td><td>H-350-50</td><td>His-태그 단백질의 친화성 정제에 사용되는 수지</td></tr><tr><td>SC16 플라스미드</td><td>BioBasic</td><td>N/A</td><td>H-GB1-SC16 융합 단백질을 암호화하는 사용자 지정 DNA 구성</td></tr><tr><td>SHuffle T7 Express 컴피턴트 E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C3029J</td><td>재조합 단백질 발현에 사용되는 호스트 균주</td></tr><tr><td>나트륨 염화물 (NaCl)</td><td>BioShop</td><td>SOD001.5</td><td>버퍼 구성 요소 및 이온 강도 조절제</td></tr><tr><td>수산화 나트륨 (NaOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS255-1</td><td>버퍼 pH 조정에 사용</td></tr><tr><td>나트륨 인산염</td><td>BioShop</td><td>SPD579.1</td><td>pH 유지를 위한 버퍼 구성 요소</td></tr><tr><td>분광 광도계</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>5096</td><td>SC16 정량에 사용</td></tr><tr><td>티오플라빈 T (ThT)</td><td>Acros Organics</td><td>2390-54-7</td><td>단백질 자기조립 모니터링에 사용되는 형광 염료</td></tr><tr><td>트롬빈 프로테아제</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>04-04-9002</td><td>H-GB1-SC16 융합 단백질 분리에 사용</td></tr><tr><td>트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스)</td><td>BioShop</td><td>TRS001.5</td><td>정제 및 분석 용액에 사용되는 버퍼</td></tr><tr><td>고속 냉장 원심분리기</td><td>Sorvall</td><td>46915</td><td>세포 용해 후 용해액을 맑게 하는 데 사용</td></tr><tr><td>SDS-PAGE 설정</td><td>Bio-Rad</td><td>1658000EDU</td><td>SDS-PAGE 겔 준비 및 실행에 사용</td></tr></tbody></table>
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대 장균 으로부터 수소포빈 sc16의 재조합 생산 및 정제 및 형광 분석법을 이용한 자기 조립 모니터링

Recombinant Production And Purification of Hydrophobin SC16 From Escherichia coli And Monitoring of Its Self-Assembly Using Fluorescence Assays

대 장균 으로부터 수소포빈 SC16의 재조합 생산 및 정제 및 형광 분석법을 이용한 자기 조립 모니터링

Hydrophobins are small amphipathic proteins that self-assemble at hydrophobic&#8211;hydrophilic interfaces to form stable waterproof coatings over fungal ...

recombinant-production-purification-hydrophobin-sc16-from-escherichia

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이후 인간 게놈 시대에 원시 conformations에서 재조합 단백질의 가용성은 구조적 기능적 및 치료 연구와 개발에 매우​​ 중요합니다. 여기서는 테스트 및 재조합 단백질의 다양한 생산하는 데 사용할 수있는 인간의 배아 신장 293T 세포에 대규모 단백질 발현 시스템을 설명합니다.

인간의 세포에서 분비 단백질의 생산을위한 편리하고 일반적인 표현 플랫폼

심사 양적, 높은 처리량의 표현과 소규모 대장균 문화의 융합 단백질의 분석 정화하기위한 프로토콜을 설명하고 이황화 풍부한 동물 독의 표적 단백질의 발현에 적용됩니다.

에서 생산 재조합 이황화 풍부한 독 단백질에 적용되는 높은 처리량 정량 식 검사 및 정화<em&gt; E. 대장균</em

엘라스틴 같은 폴리펩티드는 재조합 단백질 정제의 약물 전달에 이르기까지 다양한 응용 프로그램과 자극 - 반응 생물 고분자 물질이다. 이 프로토콜은 크로마토 그래피를 간단한 대안으로 그들의 낮은 임계 용액 온도 상전이 거동을 이용하여 대장균에서 엘라스틴 같은 폴리펩티드 및 그 펩티드 또는 단백질 융합체의 정제 및 특성을 설명한다.

에서 펩타이드 및 단백질과 재조합 엘라스틴 같은 폴리 펩타이드 및 그 융해의 비 크로마토 그래피 정제<em&gt; 대장균</em

포유류 시스템에 의한 재조합 단백질의 발현은 구조 생물학을 위한 단백질 복합체를 생산하는 매력적인 방법이 되고 있습니다. 여기에서 우리는 구조 연구를 위해 단백질 복합체를 정제하기 위해 현탁액 성장 포유류 세포를 사용하는 간단하면서도 매우 효율적인 발현 시스템을 제시합니다.

소설 및 액세스 접근 : 구조 HEK 293F 서스펜션 세포의 생물학에 대한 재조합 단백질 발현

녹색 형광 단백질에 융합을 기반으로 대장균에서 재조합 막 단백질의 발현에 대한 심사에 대한 효율적인 접근 방법이 제시된다.

막 단백질의 녹색 형광 단백질 기반의 표현 상영에<em&gt; 대장균</em

세포 내 단백질 접힘에 대한 고유한 품질 관리 메커니즘을 가진 Escherichia coli twin-arginine translocation pathway를 사용하여 항체 단편 라이브러리에서 결합 친화도 및 세포질 용해도를 동시에 스크리닝하여 내막에 항체 단편을 표시하는 방법을 제공합니다.

항체 단편의 라이브러리를 스크리닝에 대한 세균 내부 멤브레인 디스플레이

이 프로토콜 세부 단계, 비용, 그리고 대장균을 생성 하는 데 필요한 장비-셀 추출 물 및 단백질 합성 반응을 시험관에서 4 일 안에 구현. 광범위 한 응용 프로그램에 대 한이 플랫폼의 유연한 특성을 활용 하 여 우리는 적응 되 고 최적화 될 수 있는 반응 조건 논의.

대장균-셀 무료 단백질 합성 기반: 강력 하 고 유연 하며 액세스할 수 있는 플랫폼 기술에 대 한 프로토콜

본 문서는 S. 세레비시아 및 HEK293T 세포 모두에서 단백질 자가 조립을 정량화하는 FRET 기반 유동 세포 분석 프로토콜에 대해 설명합니다.

유세포분석으로 생체내 단백질 자가 조립 검출 및 특성화

백신 개발에 사용하기 위한 자가 조립 단백질 나노입자(SAPN)의 정제, 재접이식 및 특성화를 설명하는 상세한 방법이 여기에 제공된다.

삼중 에피토프 프리젠 테이션을 필요로하는 백신을위한 대장균- 발현 자가 조립 단백질 나노 입자의 생산

유기 및 수성 용매의 계면에서 맞춤형 양피 성 엘라스틴과 같은 단백질은 환경 매개 변수에 의해 유발되는 소포, 섬유 및 응고체와 같은 복잡한 상분자 구조로 조립됩니다. 설명된 조립 프로토콜은 튜닝 가능한 특성을 가진 단백질 멤브레인 기반 구획(PMBC)을 생성하여 다양한 화물을 캡슐화할 수 있도록 합니다.

엘라스틴과 같은 단백질을 체외에서 정의된 수분자 구조 및 화물 캡슐화로 조립하도록 지시

이 프로토콜은 재조합 인간 SLFN14 리보뉴클레아제의 생성과 질량 광도계를 통한 화학양론 분석을 설명합니다.<br...

재조합 인간 SLFN14 리보뉴클레아제의 신속 생성 및 질량 광도계를 통한 화학양론 분석

배우세요 대장균에서 SC16 수소포빈의 재조합 생산 및 정제 방법과 형광 분석법을 이용한 자기 조립 모니터링 기술입니다. 이 프로토콜은 단백질 생화학 연구에 활용됩니다.

대 장균 으로부터 수소포빈 SC16의 재조합 생산 및 정제 및 형광 분석법을 이용한 자기 조립 모니터링

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