Name: 수막 림프관 평가를 위한 통합 프로토콜: 흉부 주사, 림프절 영상, 수막 박리, 전면 착색 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-29T14:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: 학습하세요 생쥐 수막 림프관 기능과 형태를 평가하는 통합 프로토콜을 통해 중추신경계 항상성 연구를 수행하는 방법을. 흉추 주사, 림프절 영상, 수막 박리 및 전면 착색 기법을 활용하여 약 3시간 내에 완료할 수 있습니다.

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<ol>
	<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels.">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523, 337-341 (2015).</li><li>Aspelund, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dural+lymphatic+vascular+system+that+drains+brain+interstitial+fluid+and+macromolecules.">A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules.</a> J Exp Med. 212, 991-999 (2015).</li><li>Sandrone, S., Moreno-Zambrano, D., Kipnis, J., Van Gijn, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+(delayed)+history+of+the+brain+lymphatic+system.">A (delayed) history of the brain lymphatic system.</a> Nat Med. 25, 538-540 (2019).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+aspects+of+meningeal+lymphatics+in+ageing+and+alzheimer's+disease.">Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and alzheimer's disease.</a> Nature. 560, 185-191 (2018).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+regulate+brain+tumor+drainage+and+immunity.">Meningeal lymphatic vessels regulate brain tumor drainage and immunity.</a> Cell Res. 30, 229-243 (2020).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+mediate+neurotropic+viral+drainage+from+the+central+nervous+system.">Meningeal lymphatic vessels mediate neurotropic viral drainage from the central nervous system.</a> Nat Neurosci. 25, 577-587 (2022).</li><li>Rustenhoven, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+alterations+in+meningeal+immunity+drive+impaired+cns+lymphatic+drainage.">Age-related alterations in meningeal immunity drive impaired cns lymphatic drainage.</a> J Exp Med. 220, (2023).</li><li>Kodama, T., Hatakeyama, Y., Kato, S., Mori, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+fluid+drainage+pathways+in+lymphatic+vessels+and+lymph+nodes+using+a+mouse+model+to+test+a+lymphatic+drug+delivery+system.">Visualization of fluid drainage pathways in lymphatic vessels and lymph nodes using a mouse model to test a lymphatic drug delivery system.</a> Biomed Opt Express. 6, 124-134 (2015).</li><li>Banerjee, R., Knauer, L. A., Yang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+in+vivo+and+in+vitro+study+of+lymphatic+valve+formation+driven+by+shear+stress+signaling+pathway.">Protocol for in vivo and in vitro study of lymphatic valve formation driven by shear stress signaling pathway.</a> STAR Protoc. 4, 102141 (2023).</li><li>Akwii, R. G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+dermal+lymphatic+endothelial+cell+isolation.">Murine dermal lymphatic endothelial cell isolation.</a> J Vis Exp. (197), e65393 (2023).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> J Vis Exp. (135), e57378 (2018).</li><li>Hsieh, Y. T., Chen, S. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+analysis+of+neuromuscular+junctions+using+immunofluorescence.">Visualization and analysis of neuromuscular junctions using immunofluorescence.</a> Bio Protoc. 14, e5076 (2024).</li><li>Banerji, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyve-1,+a+new+homologue+of+the+cd44+glycoprotein,+is+a+lymph-specific+receptor+for+hyaluronan.">Lyve-1, a new homologue of the cd44 glycoprotein, is a lymph-specific receptor for hyaluronan.</a> J Cell Biol. 144, 789-801 (1999).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatics+affect+microglia+responses+and+anti-abeta+immunotherapy.">Meningeal lymphatics affect microglia responses and anti-abeta immunotherapy.</a> Nature. 593, 255-260 (2021).</li><li>Betsholtz, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+controversies+in+meningeal+biology.">Advances and controversies in meningeal biology.</a> Nat Neurosci. 27, 2056-2072 (2024).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathol. 137, 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+eeg+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high eeg delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Sci Adv. 5, eaav5447 (2019).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+posture+on+brain+glymphatic+transport.">The effect of body posture on brain glymphatic transport.</a> J Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).</li></ol>

```html
<table>
 <tbody>
 <tr>
 <td>ACSF (인공 뇌척수액)</td>
 <td>Tocris&nbsp;&nbsp;</td>
 <td>Cat# 3525</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alexa Fluor 488 당나귀 항-쥐 IgG (1:1000 희석)</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>Cat# A-21208</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>안티페이드 장착 매체</td>
 <td>Beyotime</td>
 <td>Cat# P0126</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>둔한 끝 힘센 집게</td>
 <td>RWD Life Science</td>
 <td>Cat# F12011-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>BSA</td>
 <td>Beyotime</td>
 <td>Cat# ST023</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>커버슬립</td>
 <td>CITOTEST</td>
 <td>Cat# 80312-3161</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>곡선 날카로운 집게</td>
 <td>RWD Life Science</td>
 <td>Cat# F11003-11</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DAPI</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>Cat# D9542</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>탈모 크림</td>
 <td>Veet</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dish-10 cm</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>Cat# 150464</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>일회용 정맥 (IV) 주입 바늘</td>
 <td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>에탄올-75%</td>
 <td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td>
 <td>Cat# 80176961</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>태아 소 혈청</td>
 <td>Excell</td>
 <td>Cat# FSD500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>필터-0.22 &micro;m</td>
 <td>Merck Millipore&nbsp;</td>
 <td>Cat# SLGPR33RB</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>유리 슬라이드</td>
 <td>CITOTEST</td>
 <td>Cat# 80340-3610</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>이소아밀 알코올</td>
 <td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td>
 <td>Cat# 10003218</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>IVIS Spectrum</td>
 <td>PerkinElmer</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>마이크로 힘센 집게</td>
 <td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td>
 <td>Cat# ZD372RB&nbsp;</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>마이크로 가위</td>
 <td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td>
 <td>Cat# ZO13056R</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>마이크로 주사 바늘 (25 &micro;L)</td>
 <td>Shanghai Gaoge Industry &amp; Trade&nbsp;</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>마이크로 주사 펌프</td>
 <td>Voyage Power</td>
 <td>Cat# QHZS-001A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>마우스: C57BL/6 야생형, 8주령, 남성&nbsp;</td>
 <td>Cavens</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>바늘-30G</td>
 <td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Normal Saline</td>
 <td>Beyotime</td>
 <td>Cat# ST341</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ovalbumin, Alexa Fluor&trade; 647 Conjugate</td>
 <td>Thermo Fisher Scientific</td>
 <td>Cat# O34784</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Paraformaldehyde 고정 용액-4%</td>
 <td>Beyotime</td>
 <td>Cat# P0099</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PE-10 튜빙</td>
 <td>Shanghai Qiujing Biochemical Reagent and Instrument</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>인산염 완충 식염수 (1x PBS)</td>
 <td>Beyotime</td>
 <td>Cat# ST447</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>항-LYVE-1 (1:200 희석)</td>
 <td>Santa Cruz</td>
 <td>Cat# sc-65647</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>스테레오 현미경</td>
 <td>Jonec</td>
 <td>Cat# JSZ6</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>스테레오탁시 프레임</td>
 <td>RWD Life Science</td>
 <td>Cat# 68030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>곧은 가위</td>
 <td>RWD Life Science</td>
 <td>Cat# S12007-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>주사기-1-mL&nbsp;</td>
 <td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>조직 접착제 I</td>
 <td>3M Vetbond</td>
 <td>Cat# 1469SB</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tribromoethanol</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>Cat# T48402</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triton X-100&nbsp;</td>
 <td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td>
 <td>Cat# T8787</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>VS120 고처리량 형광 이미징 시스템</td>
 <td>Olympus</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
```

수막 림프관 평가를 위한 통합 프로토콜: 흉부 주사, 림프절 영상, 수막 박리, 전면 착색

Integrated Protocol for Assessing Meningeal Lymphatics: Cisterna Magna Injection, Lymph Node Imaging, Meningeal Dissection, and Whole-Mount Staining

Meningeal lymphatic vessels (MLVs) have emerged as critical regulators of central nervous system (CNS) homeostasis, and MLVs dysfunction has been ...

integrated-protocol-for-assessing-meningeal-lymphatics-cisterna-magna

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기는 시스테 마그나 cannulation (CMc), 뇌 척추 액체 (CSF)에 추적기, 기판 및 신호 분자를 제공 하는 최소 침 습 방법을 수행 하는 프로토콜에 설명 합니다. 다른 이미지 형식으로 결합, CMc glymphatic 시스템 및 CSF 역학 평가 뿐만 아니라 다양 한 화합물의 두뇌 전체 배달 수 있습니다.

설치류의 시스테 마그나에 정 맥 주입

이 프로토콜은 장기 구조의 변화없이 림프절을 배출하는 다른 세포 집단을 이미지화하는 기술을 설명합니다.

전 생체 내 공초점 현미경을 사용하여 림프절 구조 및 세포 국소화 시각화

우리는 두개골에 안정될 수 있는 끝에 바늘을 구부린, 따라서 근본적인 자렌치에 손상의 리스크를 제거하는 intracisternal 주입을 기술합니다. 이 접근법은 렙토메닝 세포의 유전적 운명 매핑 및 조작및 뇌척수액 이동 추적에 사용될 수 있습니다.

내분비주주입을 통한 렙토메닝 세포 변형 유도

프로토콜은 뇌척수액(CSF) 및 척추 경막수액을 수집하는 림프관 및 림프절(LNs)의 3차원 및 세포 분해성 이미지를 얻기 위해 조직 클리어링과 가벼운 시트 형광 현미경 검사법(LSFM)을 결합하여 제시된다.

iDISCO+ 및 라이트 시트 형광 현미경 검사를 사용하여 척추 림프관 및 배수의 3 차원 이미징

이 논문은 뇌, 척수 및 수막을 포함한 중추 신경계 내에서 상주 및 말초 유래 면역 세포를 검사하기 위한 두 가지 최적화된 프로토콜을 제시합니다. 이러한 각 프로토콜은 정상 상태 및 염증 조건에서 이러한 구획을 차지하는 세포의 기능과 구성을 확인하는 데 도움이 됩니다.

면역 세포의 다운스트림 분석을 위한 중추신경계 조직 및 관련 수막 분리

생체 내에서 뇌의 혈류 조절을 연구하기 위해 전통적인 약리학적 방법은 침습적이며 종종 두개골, 경막 및 연수막을 손상시킵니다. 이 연구에서 우리는 나노인젝터 유도 시스터내 마그나(ICM) 주입과 레이저 스페클 대비 이미징을 결합하여 두개골과 연극의 무결성을 보존하는 최소 침습 기술을 개발했습니다.

Paired Cisterna Magna Nanoinjection 및 Laser Speckle Contrast Imaging Assay를 통해 In Vivo에서 대뇌 혈류 조절 연구

이 프로토콜은 경피적 천자 경로를 통해 종양 세포를 수조 마그나로 주입하여 마우스의 연수막 전이를 강력하게 유도하여 외상 및 두개외 종양 부담을 줄이는 방법을 설명합니다.

마우스의 연수막 전이 연구를 위한 최소 침습적 수조 마그나 주입 모델

여기에서는 다른 변수의 영향을 최소화하고 수술 기반 연구 수행을 표준화하기 위해 쥐의 심부 경부 림프절 또는 구심성 림프관을 안면 후방 정맥과 문합하는 단계를 명확하게 정의하는 프로토콜을 제시합니다.

쥐 모델에서 심부 경추 림프정맥 문합을 위한 수술 프로토콜: 림프절 및 림프관 문합

이 실험 프로토콜은 두부 영역에서 림프 배출을 직접적이고 정량적으로 평가할 수 있는 깊은 경추 림프관 캐뉼레이션 쥐 모델을 시연합니다. 이 모델은 중추신경계(CNS) 유래 용질, 면역 세포 집단, 그리고 CNS 표적 치료제의 분배 및 제거에 대한 상세한 분석을 지원합니다.

경추 림프관 캐뉴럴 쥐 모델을 이용한 머리와 뇌로부터의 림프 수송 평가

이 프로토콜은 인도시아닌 그린(ICG) 근적외선 영상과 초음파를 결합하여 골절 후 림프관 배출을 평가하여 쥐에서 족저 ICG 클리어와 슬와림프절 확대를 정량화합니다.

골절 후 ICG 근적외선 영상 및 초음파를 이용한 림프 배출 평가

학습하세요 생쥐 수막 림프관 기능과 형태를 평가하는 통합 프로토콜을 통해 중추신경계 항상성 연구를 수행하는 방법을. 흉추 주사, 림프절 영상, 수막 박리 및 전면 착색 기법을 활용하여 약 3시간 내에 완료할 수 있습니다.

수막 림프관 평가를 위한 통합 프로토콜: 흉부 주사, 림프절 영상, 수막 박리, 전면 착색

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