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<ol><li>Winden, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberous+sclerosis+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Tuberous sclerosis complex.</a> Nat Rev Dis Primers. 12, 11(2026).</li>
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<li>Zabegalov, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+repetitive+behaviors+in+zebrafish+and+their+relevance+to+human+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Abnormal repetitive behaviors in zebrafish and their relevance to human brain disorders.</a> Behav Brain Res. 367, 101-110 (2019).</li>
<li>Scheldeman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-related+neuropathology+in+mutant+tsc2+zebrafish%3A+phenotypic%2C+transcriptomic+and+pharmacological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">mTOR-related neuropathology in mutant tsc2 zebrafish: phenotypic, transcriptomic and pharmacological analysis.</a> Neurobiol Dis. 108, 225-237 (2017).</li>
<li>Ilyin, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+intracerebroventricular+lipopolysaccharide+administration+on+behavioral%2C+neurochemical%2C+and+neurogenomic+responses+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of intracerebroventricular lipopolysaccharide administration on behavioral, neurochemical, and neurogenomic responses in adult zebrafish.</a> Behav Brain Res. 493, 115676(2025).</li>
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</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>보로실리케이트 유리 모세관 (외경 1.0 mm/ 내경 0.75 mm)</td><td>Sutter Instrument</td><td>BF150-75-10</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (칼슘 염화물)</td><td>Chempur</td><td>118748703</td><td></td></tr><tr><td>교정 슬라이드 (1/100 mm)</td><td>Bresser</td><td>5916710</td><td></td></tr><tr><td>모세관 홀더 (그립 헤드 세트 4 사이즈 0)</td><td>Fertilart Sp. z o.o</td><td>5196082001</td><td></td></tr><tr><td>플레이밍/브라운 마이크로파이펫 풀러</td><td>Sutter Instrument</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Chempur</td><td>115752837</td><td></td></tr><tr><td>Human IL6</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>200-06-20UG</td><td>재고 농도: 10 &micro;g/mL, 작업 농도: 2 pg/nL (0.9% NaCl에 희석)</td></tr><tr><td>인젝터 펌프 FemtoJet 4i</td><td>Eppendorf</td><td>E5252000021</td><td></td></tr><tr><td>KCl (칼륨 염화물)</td><td>Chempur</td><td>117397402</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot;6H2O (마그네슘 염화물 6수화물)</td><td>Chempur</td><td>116120500</td><td></td></tr><tr><td>Femtotips Microloader Tips for Femtojet Microinjector</td><td>Eppendorf</td><td>EPE 5242956003</td><td></td></tr><tr><td>현미경 Leica M165 FC 1983 배율</td><td>Leica Microsysytems</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/ light-microscopes/stereo-microscopes/p/leica-m165-fc/</td><td></td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (나트륨 염화물)</td><td>Chempur</td><td>117941206</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5147-1G</td><td>재고 농도: 20 mg/mL (초순수에 준비), 작업 농도: 0.5 mg/mL (E3에 희석)</td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>Tris 베이스</td><td>Carl Roth</td><td>4855.3</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 저용점 아가로오스</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>ZebraBox 확장 - 포토 모터 반응 EZBPMR</td><td>Animalab</td><td>https://animalab.eu/zebrabox-high-throughput-monitoring-system</td><td></td></tr><tr><td>Zebrabox</td><td>ViewPoint</td><td>https://www.viewpoint.fr/product/zebrafish/fish-behavior-monitoring/zebrabox</td><td>자동 분석 챔버</td></tr></tbody></table>
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신경정신질환과 유사한 행동을 연구하기 위한 tsc 제브라피시 유충 혈류에 인터루킨-6 미세주입

Microinjection of Interleukin-6 into the Bloodstream of TSC Zebrafish Larvae to Study Neuropsychiatric Disorder-Like Behaviors

신경정신질환과 유사한 행동을 연구하기 위한 TSC 제브라피시 유충 혈류에 인터루킨-6 미세주입

Patients with tuberous sclerosis complex (TSC1/TSC2 mutations) exhibit variable expressivity of autism spectrum disorder (ASD), and maternal immune ...

본 연구는 IL-6로 유도된 염증이 자폐증 유전적 위험 돌연변이와 어떻게 상호작용하여 뇌 발달 및 기능에 영향을 미치는지 조사합니다. 광범위한 LPS 유도 염증과 달리, 이 프로토콜은 선택적으로 IL-6를 증가시켜 사이토카인 특이적인 신경 발달 효과를 정밀하게 조사할 수 있게 합니다. 시작하기 위해, 미세주입용 바늘, 필요한 시약 및 수정 후 2일 된 제브라피쉬 배아를 준비하십시오.E3 배지에서 1% 중량 대 부피 비율(weight per volume)의 아가로스 용액을 준비하고, 아가로스가 완전히 용해되어 용액이 투명해질 때까지 가열합니다. 아가로스 용액을 잠시 식힙니다. 표면에 균일한 층이 형성되도록 100mm 페트리 접시에 약 30mL를 붓습니다.아가로스가 아직 액체 상태이지만 굳기 시작할 때, 실리콘 몰드를 표면에 부드럽게 올려 균일한 홈을 만듭니다. 수정 후 2일 된 난막 형성 배아 약 100개를 아가로스가 코팅된 작은 50 millimeter 페트리 접시에 옮깁니다. 배아가 완전히 잠기도록 갓 준비한 pronase 용액 4 milliliters를 접시에 넣습니다.실온에서 3~5분 동안 배양합니다. 실체 현미경 하에서 배아가 난막으로부터 방출되는지 모니터링합니다. 난막의 효소적 제거를 돕기 위해 디쉬를 간헐적으로 부드럽게 회전시키거나 흔들어 줍니다.대부분의 배아가 난막에서 분리될 때까지 계속합니다. 신선한 E3 배아 배지를 5~6회 교체하여 배아를 철저히 세척합니다. 유충의 손상을 방지하고 최적의 배양 조건을 유지하기 위해 모든 난막과 pronase 잔여물이 제거되었는지 확인하십시오.유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 탈각된 유충 약 50마리를 40 mL의 E3 배지가 들어 있는 100 mm 페트리 접시에 옮깁니다. 미세주입 전까지 유충을 E3 배지에서 유지합니다. 실체 현미경 하에서 미세 핀셋을 사용하여 미리 준비한 유리 모세관의 끝을 조심스럽게 부러뜨려 직경이 약 3 µm인 마이크로피펫을 제작합니다.대조군 주입을 위해 0.9% w/v 염화나트륨 용액을 준비합니다. IL-6 주입을 위해서는 0.9% 염화나트륨에 Interleukin 6(IL-6)가 2 pg/nL 농도로 포함된 용액을 준비합니다. 주입 시 시각화를 용이하게 하기 위해 주입 용액 10 µL당 0.05% Trypan blue 1 µL를 첨가합니다.피펫을 사용하여 마이크로로더 팁에 용액을 채웁니다. 그다음 마이크로로더 팁을 이용해 준비된 마이크로피펫 주입 바늘에 약 3 µL의 주입 용액을 역충전(backfill)하며, 이때 기포가 유입되지 않도록 주의합니다. 용액이 채워진 주입 바늘을 마이크로인젝션 시스템에 연결될 모세관 홀더에 고정합니다.그 다음, 보정 슬라이드 위에 미네랄 오일을 소량 떨어뜨립니다. 미네랄 오일 속에 액적을 배출하여 주입 부피를 보정합니다. 0.01 millimeter 눈금이 있는 보정 슬라이드를 사용하여 액적의 직경을 측정합니다.방울 부피가 약 1 nanoliter가 되도록 주입 압력을 조절하십시오. 스트레스를 최소화하고 일관된 진정을 보장하기 위해, E3 배지에 tricaine을 최종 1X 농도로 첨가하여 유생을 소량씩 나누어 마취시키십시오. 수정 후 2일 된 개별 유생을 응고된 아가로스 주입 플레이트로 옮기십시오.디쉬를 실체 현미경 아래에 놓습니다. 유리 피펫을 사용하여 각 유충의 큐비에관(duct of Cuvier)이 명확하게 보이고 접근 가능하도록 조심스럽게 방향을 잡습니다. 실체 현미경 하에서 심장으로 이동하는 혈구의 움직임을 추적하여 마이크로피펫 팁을 큐비에관의 진입점에 위치시킵니다.준비된 용액의 첫 번째 방울을 퀴비에 관(duct of Cuvier)에 주입합니다. 약 20초 후에 두 번째 방울을 퀴비에 관에 주입합니다. 주입 후, 유충을 40 mL의 E3 배지가 담긴 새로운 100 mm 페트리 접시로 조심스럽게 옮깁니다.유충을 회복을 위해 28.5 °C의 인큐베이터로 옮깁니다. 다음 날, 이전에 시연한 대로 미세주입 절차를 반복합니다. 수정 후 5일째에 행동 분석, 뇌 영상 촬영 또는 면역형광 분석을 포함한 후속 응용 분석에 유충을 사용합니다.IL-6 미세주입은 염화나트륨 주입과 비교했을 때 치어의 생존율에 영향을 미치지 않았습니다. 수정 후 5일째의 생존율은 IL-6 주입군과 NaCl 주입군 간에 차이가 없었으며, 이는 투여법이 잘 용인되고 비특이적 독성을 유발하지 않음을 나타냅니다. 미세주입은 주입하지 않은 형제 개체들과 비교했을 때 생존율을 약간 감소시켰습니다.동형접합 Tuberous Sclerosis Complex 2(TSC2) 돌연변이체는 야생형 형제들에 비해 기저 prostaglandin E2(PGE2) 수치가 유의미하게 높게 나타났습니다. 이형접합 TSC2 돌연변이체는 야생형 형제들에 비해 기저 PGE2 수치가 소폭 상승했으나 유의미하지 않았습니다. IL-6 미세주입 후 이형접합 TSC2 돌연변이체의 PGE2 수치는 급격히 상승했습니다.오픈 필드 테스트 결과, 주입하지 않은 대조군에서 TSC2 돌연변이체는 야생형 형제들에 비해 불안 유사 행동이 증가한 것으로 나타났으며, IL-6 미세주입은 이러한 행동에 영향을 미치지 않았습니다. 비주입 대조군 내의 이형 접합 및 동형 접합 TSC2 돌연변이체는 야생형 형제들과 IL-6가 주입된 TSC2 유생에 비해 경기장의 외곽 구역에서 훨씬 더 많은 시간을 보냈으며 중심부 탐색이 감소한 모습을 보였습니다. IL-6 주입은 특히 이형 접합 TSC2 돌연변이체에서 반복적이고 정형화된 수영 패턴을 증가시켰습니다.반복적 루핑(looping)을 보이는 IL-6 주입 헤테로 접합체 TSC2 돌연변이체의 비율은 염화나트륨을 주입한 대조군에 비해 유의미하게 증가했습니다. 이 프로토콜은 제브라피시의 신경 발달 및 행동에 미치는 유전자 환경의 영향을 평가하기 위해 조절된 IL-6 염증 연구를 가능하게 합니다. 이 프로토콜을 수행할 때 주요 고려 사항은 일관된 바늘 크기, 정밀한 2 nL 주입 부피, 그리고 유생이 E3 용액 밖에 머무는 시간을 최소화하는 것입니다. 향후 연구에서는 IL-6 염증과 유전적 위험이 뇌 발달 및 행동에 어떻게 함께 영향을 미치는지 조사할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Microinjection은 수정된 zebrafish의 배아에 이물질을 소개하는 잘 설립하고 효과적인 방법입니다. 여기, 우리는 강력한 mRNA의 overexpression을 수행하기위한 microinjection 기술 및 zebrafish에서 morpholino의 oligonucleotide 유전자 최저 연구를 보여줍니다.

Zebrafish 태아의 mRNA와 Morpholino의 안티 센스 Oligonucleotides의 Microinjection.

이 동영상은 morpholino 또는 mRNA가 감소 또는 후속 개발 중에 특정 유전자 제품의 수준을 높일 수있는 한 세포 단계에서 zebrafish 배아에 주입 수있는 방법을 보여줍니다.

유전자 기능을 분석 Zebrafish 배아들 중 Microinjection

zebrafish의 급속한 발전, 소형 크기 및 투명성은 감염의 타고난 면역 제어 연구를위한 엄청난...

Zebrafish 애벌레의 분해해 칸디다 증의 비침습 이미징

이 비디오는 신경 염증을 유발하기 위해 제브라피시 유충의 뇌에 지질다당류(LPS)를 미세 주입하는 방법을 보여줍니다. 유충은 아가로스를 깐 접시에 놓고 바늘을 뇌실에 삽입하고 LPS를 주입합니다. 주입된 LPS는 신경 염증을 유발하는 면역 반응을 유발합니다.

Inducing Neuroinflammation in Zebrafish Larvae with a Lipopolysaccharide Injection(제브라피시 유충에서 지방다당류 주사로 신경염증 유발)

이 문서에서는, 우리는 안티센스 모르의 올리고 뉴클레오티드를 이용하여 성인 제브라 피쉬 telencephalon의 심실 세포에서 유전자 발현을 조작하는 방법을 보여줍니다. 우리는 성인 척추 뇌 기능 연구에 사용할 수있는 효율적이고 빠른 프로토콜로이 방법을 제시한다.

모르 올리고 뉴클레오티드의 Cerebroventricular 미세 주입을 사용하여 성인 Zebrafish의 두뇌에서 유전자 발현의 미세 조작

Zebrafish 태아 그리고 애벌레의 microinjection 많은 zebrafish 모델에서 사용 되는 중요 하지만 어려운 기술 이다. 여기, 우리 미 도구 안정화에 도움의 범위와 microinjection 및 이미징 zebrafish의 방향 제시.

최적화 된 Microinjection 및 Zebrafish 애벌레의 이미징 microstructured 장치

여기서, 우리는 DEPDC5 유전자의 일시적인 억제로 인한 간질의 제브라피시 모델의 개발 및 특성화를 위한 프로토콜을 제시한다.

간질의 제브라피시 모델의 행동 및 생리학적 분석

이 프로토콜은 결과적인 신경 염증 반응과 신경 독성을 연구하기 위해 제브라 피쉬 애벌레 모델에서 뇌실 영역에 지질 다당류를 미세 주입하는 것을 보여줍니다.

신경 염증 및 신경 독성을 평가하기 위해 유충 제브라피쉬에 지질 다당류의 뇌실 미세 주입

우리는 빠른 스캐닝 컨포칼 현미경을 활용하여 개발 중인 제브라피시 시신경 구조에서 미세아교세포의 실시간 이미징을 수행하는 방법을 시연하여 생체 내에서 이러한 세포의 역학을 분석할 수 있습니다.

Zebrafish 배아에서 Microglia Dynamics의 실시간 이미징 및 특성 분석

RASopathies는 RAS-MAPK 경로 과활성화에 의해 발생하는 다계통 유전 증후군입니다. 검증을 기다리는 잠재적인 병원성 변이가 지속적으로 나타나고 있으며, 전임상 근거가 부족하여 치료가 제한됩니다. 여기에서는 Teen-reporter 제브라피시의 라이브 FRET 이미징에 의한 배아 발생 중 RASopathy 관련 ERK 활성화 수준과 약리학적 조절을 테스트하고 교차 검증하기 위한 생체 내 프로토콜에 대해 설명합니다.

Live FRET 현미경 검사 및 면역형광을 통해 초기 제브라피시 누난 증후군 모델에서 ERK 활동 조절을 평가하기 위한 효율적인 프로토콜

International Institute of Molecular Mechanisms and Machines, IMol, Polish Academy of Sciences.  유전적으로 감수성이 있는 유기체에서 염증 신호가 신경 발달에 미치는 영향을 모델링하기 위해, 우리는 제브라피시 유충의 Cuvier관(공중정맥)에 IL-6를 미세주입하는 프로토콜을 제시하여, 결절성 경화증 복합체(TSC) 맥락에서 염증을 통제된 유도하고 발달 영향을 평가할 수 있게 합니다.

신경정신질환과 유사한 행동을 연구하기 위한 TSC 제브라피시 유충 혈류에 인터루킨-6 미세주입

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