Name: 유방 형태 형성을 재현하는 3차원 인간 유방 오가노이드를 생성하는 정의된 하이드로겔 기반 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: 배우세요 정의된 하이드로겔 매트릭스를 사용하여 3차원 인간 유방 오가노이드를 생성하는 방법을. 이 프로토콜은 유방 조직 공학 및 초기 암 발생 연구를 위한 생리학적으로 관련성 높은 모델을 제공합니다.

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	<li>Rauner G, Gupta PB, Kuperwasser C. From 2D to 3D and beyond: the evolution and impact of in vitro tumor models in cancer research. Nat Methods. 2025;22:1776-87.</li>
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	<li>Trepicchio C, et al. DDR1 regulates RUNX1-CBF&#946; to control breast stem cell differentiation [Preprint]. bioRxiv. 2024. Available from: https://doi.org/10.1101/2024.02.21.581255.</li>
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<table><tbody><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>조직 처리 및 원심분리를 위한 무균 튜브</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>단일 세포 현탁액 준비용 여과 장치</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer for low volumes</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>단일 세포 현탁액 준비용 여과 장치</td></tr><tr><td>Automated cell counter</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>세포 계수 및 생존율 결정에 사용되는 장치</td></tr><tr><td>Bovine pituitary extract</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>상피 세포 배지의 보충제</td></tr><tr><td>Cell counting slides</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>세포 계수용 이중 챔버 슬라이드</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>벤치톱 원심분리기/s는 500 x g 이상의 속도 기능과 15 mL 및 1.5 mL 튜브를 수용해야 합니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>Collagen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>하이드로젤 형성에 사용되는 세포외 기질 단백질</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>조직 분리에 사용되는 효소</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>시료의 극저온 저장용 무균 바이알</td></tr><tr><td>Culture vessels (e.g., chamber slides, multiwell plates)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>하이드로젤 침착 및 오르가노이드 배양의 플랫폼.</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>동결 배지에 사용되는 냉동 보호제</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>2차 조직 분리에 사용되는 효소</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>세포 분리 중에 사용되는 효소.</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>세척 및 중화 배지에 사용되는 혈청 보충제</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>세포외 기질 단백질 구성 요소</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>상피 세포 배지의 보충제</td></tr><tr><td>Human epidermal growth factor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>상피 세포 배지의 보충제</td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>상피 세포 배지의 보충제</td></tr><tr><td>Hyaluronic acid</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>하이드로젤 제형용 세포외 기질 구성 요소</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>조직 분리에 사용되는 효소</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>조직 배양 배양에 사용되는 장치</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>상피 세포 배지의 보충제</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>세포외 기질 단백질 구성 요소</td></tr><tr><td>Mammary epithelial basal medium</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>상피 세포의 성장 배지</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>소량 반응에 사용되는 튜브</td></tr><tr><td>Orbital rotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>효소 분리 중 조직 분산에 사용되는 회전기</td></tr><tr><td>P1000 pipette</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>최대 1,000 &mu;L의 볼륨을 혼합 및 옮기는 데 사용되는 장치</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>상피 세포 배지의 항생제 보충제</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>세척 및 헹굼에 사용되는 완충 용액</td></tr><tr><td>Precision balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>조직 무게 측정에 사용되는 저울</td></tr><tr><td>Serological pipette</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>비접착성 상피 세포 수확에 사용되는 피펫</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>콜라겐 중화에 사용되는 시약</td></tr><tr><td>Sterile scalpels</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>기계적 조직 분쇄에 사용되는 도구</td></tr><tr><td>Trypan blue solution</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>세포 생존율 평가에 사용되는 염료</td></tr><tr><td>Trypsin (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>세포 분리에 사용되는 효소 시약</td></tr><tr><td>Water bath (37 &deg;C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>시료의 제어 해동에 사용되는 장치</td></tr></tbody></table>

유방 형태 형성을 재현하는 3차원 인간 유방 오가노이드를 생성하는 정의된 하이드로겔 기반 방법

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

본 연구는 인간의 유방 발달 및 수유, 조직 구성, 환경적 노출, 그리고 암의 생물학적 변화를 유도하는 유전적 요인에 중점을 둡니다. 기존 모델들은 인간 유방 조직의 구조, 발달 시기 및 미세환경을 정확하게 반영하지 못합니다. 본 프로토콜은 인간 시스템 내에서 2D 모델과 동물 모델의 간극을 메우는 방법을 제시합니다.최소 24시간 동안 초저온 보존된 소화된 인간 유방 조직을 준비합니다. 세포 사멸을 최소화하기 위해 크라이오 바이알의 캡 부분까지 37 °C 항온수조에 즉시 담그고 1분 동안 빠르게 해동합니다. 완전히 해동되면, 크라이오 바이알의 내용물을 10 mL의 유선 상피 성장 배지(MEGM)가 들어 있는 15 mL 원심분리관으로 옮기고 250g에서 5분 동안 원심분리합니다.상층액을 제거한 후, 0.25%trypsin이 포함되고 37 °C로 미리 가온된 500 µL의 해리 효소 용액에 펠릿을 재현탁합니다. 현탁액을 1.5 mL 마이크로원심분리 튜브로 옮깁니다. P1000 피펫을 사용하여 샘플을 20회 파이펫팅하여 해리를 촉진합니다.튜브를 37 °C에서 3~5분 동안 배양합니다. P1000 피펫을 사용하여 20~30회 파이펫팅(trituration)함으로써 시료를 기계적으로 분리합니다. 효소 반응을 중화시키기 위해 세척 배지가 포함된 혈청 1 mL를 첨가합니다.500g에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액을 제거한 후, 펠렛을 300 µL의 dispase 용액에 재현탁합니다. DNA 용액 30 µL를 추가하고 37 °C에서 3~5분 동안 배양합니다.피펫팅을 15~20회 반복하여 샘플을 기계적으로 분리합니다. 현탁액에 세척 배지가 포함된 혈청 700 µL를 추가합니다. 세포 현탁액을 40 µm 세포 스트레이너로 걸러 깨끗한 튜브에 옮깁니다.세포 현탁액 10 µL를 동일한 부피의 trypan blue와 혼합합니다. 혼합액 10 µL를 자동 세포 계수기에 로드하여 세포 생존율을 측정합니다. 현탁액을 상온에서 500g로 5분 동안 원심분리합니다.상층액을 제거한 후, 하이드로젤 시딩(seeding)에 필요한 원하는 농도가 되도록 MEGM으로 세포 펠렛을 다시 현탁합니다. 냉동 보관된 laminin, hyaluronic acid, fibronectin 용액과 PBS를 사용 전 0~4°C의 얼음 위에서 천천히 해동합니다. 세포외 기질(extracellular matrix, ECM) 보충제 스톡 용액을 준비합니다.튜브를 3~

a-defined-hydrogel-based-method-for-generating-three-dimensional

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

호르몬 작용을 연구하기에 적합한 인간 유방 상피의 3D 배양 모델을 설명합니다.

인간의 유선 상피의 호르몬 응답 3D 문화 모델

이 원고는 3 차원 (3D)의 균일 한 배열 세포 외 기질에 둘러싸여 정의 형상의 상피 조직을 설계 할 수있는 소프트 리소그래피 기반 기술을 설명합니다. 이 방법은 세포 형태 및 실험 문맥 다양한 의무가 있고 동일한 복제의 높은 처리량의 선별을 허용한다.

세포 외 매트릭스 내에서 임베디드 공학 3 차원 상피 조직

마우스 유 방 땀 샘에서 개발 된 소기관을 조사 하 고 면역 세포와의 상피 특성과 상호 작용을 평가 하는 것을 특징으로 한다. 조사 된 유기 체는 조사 된 정상 조직에서 종양 세포 모집을 유도할 수 있는 세포-세포 상호작용을 더 잘 평가 하기 위해 사용 될 수 있다.

유 방 땀 샘에서 조사 된 유기 체의 성장과 특성화

상피 및 기질 세포로 구성되는 인간 1 차 자궁내막 오르가노이드를 생성하고 네이티브 자궁내막 조직의 특성을 유지하는 프로토콜이 제시된다. 이 프로토콜은 자궁 조직 획득에서 자궁 내막 오르가노이드의 조직학적 처리에 이르는 방법을 설명합니다.

다세포 인간 1 차 자궁 내막 오르가노이드의 생성

유방 동맥은 외부 근상피 및 내부 발광 상피 세포를 포함하는 이중 층 구조입니다. 제시된 것은 차동 트립시니화를 이용하여 오르가노이드를 준비하는 프로토콜이다. 이 효율적인 방법은 연구원이 별도로 유선 양식 및 기능에 있는 그들의 역할에 관하여 질문을 탐구하기 위하여 이 2개의 세포 모형을 조작하는 것을 허용합니다.

차동 시도에 의한 모자이크 유방 오르가노이드 생성

이 프로토콜의 목표는 약물 선별 연구에 사용될 수 있는 3D 유방 내피 상양 모델을 빠르게 만들기 위해 사전 형성된 내피 네트워크에 다세포 스페로이드로서 유방 상피 세포를 직접 바이오프린트하는 것입니다.

내피 네트워크에 3D 다세포 유방 스페로이드의 직접 생체 인쇄

이 프로토콜의 목표는 심장 조직 공학, 약물 스크리닝 및 질병 모델링을 위해 심장 섬유아세포(CFs)와 공동 배양된 줄기 세포 유래 심근세포(CFs)로 구성된 고도로 정렬된 인간 심장 조직의 3차원(3D) 미세유체 모델의 개발을 설명하고 시연하는 것이다.

미세 유체 플랫폼 내에서 3D 조직 된 인간 심장 조직 개발

이 프로토콜은 차등 원심분리를 통해 원발성 정상 및 종양 유방 조직에서 상피 오가노이드를 생성하는 접근 방식에 대해 논의합니다. 또한 3차원 배양 및 포매된 오가노이드의 면역형광 이미징에 대한 지침이 포함되어 있습니다.

계대증 없이 정상 및 종양 유방 조직에서 마우스 및 인간 상피 오가노이드 생성 및 이미징

여기에서는 흉선 상피 세포(TEC) 성숙 및 장기간의 유지 관리, 체외 흉선형성을 지원하는 것을 목표로 하는 3D 피브린 하이드로겔에서 성장한 인간 iPSC 유래 흉선 오가노이드 형성을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.

3차원 피브린 하이드로겔에서 인간 흉선 오가노이드의 형성

암 전이를 연구하기 위해 이세포성 누화를 캡처하는 3D 암 모델이 매우 필요합니다. 우리의 연구는 침입 및 세포 공간 분포를 연구하는 데 사용할 수 있는 골격 및 골격이 없는 환경에서 이종 다세포 기질-상피의 생성을 제시합니다.

상피암 세포의 스캐폴드가 없는 3D 배양에서 이종다세포 기질 세포(Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion)

배우세요 정의된 하이드로겔 매트릭스를 사용하여 3차원 인간 유방 오가노이드를 생성하는 방법을. 이 프로토콜은 유방 조직 공학 및 초기 암 발생 연구를 위한 생리학적으로 관련성 높은 모델을 제공합니다.

유방 형태 형성을 재현하는 3차원 인간 유방 오가노이드를 생성하는 정의된 하이드로겔 기반 방법

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