Name: 트레 Recombinase의 분자 진화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-29T12:12:00.000+00:00
Duration: 12 min 2 s
Description: 배우세요 Tre recombinase의 분자 진화를 통해 HIV-1 프로바이러스를 특이적으로 절제하는 방법을. Cre recombinase를 기반으로 한 유도 진화 기법을 활용하여 감염된 인간 세포에서 바이러스를 제거하는 분자 수술 도구를 개발합니다.

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저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.

트레 recombinase의 분자 진화

Molecular Evolution of the Tre Recombinase

여기 우리는 감독, 분자 진화를 통해 트레 recombinase의 생성을보고. 트레 recombinase는 감염된 인간의 세포에서 provirus의 절단 및 박멸 그 결과, HIV - 1 provirus의 LTR 시퀀스 내에서 미리 정의된 대상 시퀀스를 인식합니다. 우리는 Cre 호텔, loxP로 알려진 34 - BP 더블 좌초된 DNA 시퀀스를 인식 38 KDA의 recombinase와 시작했다. Cre 호텔 효과적으로 게놈 시퀀스를 없앨 수 있기 때문에, 우리는 맞게하기 위해 통합 HIV - 1 provirus의 5&#39; - LTR과 3&#39; - LTR 사이의 순서를 제거할 수있는 recombinase를 설정합니다. 첫 단계로서 우리는 loxP 재조합과 유사하고 활동에 대한 검사를했던 LTR 사이트 내에서 시퀀스를 식별. 처음 Cre 호텔 및 mutagenized Cre 호텔 라이브러리는 HIV - 1 provirus의 선택 loxLTR 사이트를 재결합에 실패했습니다. 어떤 감독 분자 진화 과정의 시작은 적어도 잔류 활동을 필요로 원래의 비대칭 loxLTR 시퀀스는 하위 집합으로 분할 및 재조합 활동을 위해 다시 테스트되었습니다. 중간체 역할, 재조합 활동은 하위 집합으로 표시되었다. 다음 recombinase 라이브러리 되풀이하는 진화 사이클을 통해 풍부하게되었습니다. 이후, 풍부한 라이브러리가 단행하고 recombined했다. 다른 변이의 조합 시너지 입증하고 recombinases는 그 loxLTR1 및 loxLTR2를 재결합하는 수있었습니다 만들어졌습니다. 이 중간체를 통해 진화 전략은 성공할 수있다는 증거했습니다. 126 진화 사이클 총 후에 개인 recombinases은 기능과 구조적으로 분석했다. 가장 활성화된 recombinase - 트레은 - Cre 호텔에 비해 19 아미노산을 변경했다. 트레 recombinase는 소비세 게놈 HIV - 1 감염 헬라 세포 (참조 &quot;진화 Recombinase을 사용하여 HIV - 1 Proviral의 DNA 절단&quot;Hauber J., 실험 바이러스학 및 면역학에 대한 하인리히 - Pette - 연구소에서 HIV - 1 provirus을 수있었습니다 함부르크, 독일). 아직 초기에있는 동안, 감독 분자 진화는 &quot;분자 수술&quot;과 분자 의학의 도구가 될 것입니다 정의 효소의 생성을 허용합니다.

여기 우리는 감독, 분자 진화를 통해 트레 recombinase의 생성을보고. 트레 recombinase는 감염된 인간의 세포에서 provirus의 절단 및 박멸 그 결과, HIV - 1 provirus의 LTR 시퀀스 내에서 미리 정의된 대상 시퀀스를 인식합니다. 아직 초기에있는 동안, 감독 분자 진화는 분자 수술과 분자 의학의 도구가 될 것입니다 정의 효소의 생성을 허용합니다.

트레 Recombinase의 분자 진화

본 논문에서는 유도 진화(directed evolution)를 통한 Tre 재조합효소(recombinase)의 생성을 보고합니다. Tre 재조합효소는 ... 내의 미리 정의된 표적 서열을 인식합니다.

제 이름은 Frank Alz입니다. 저는 드레스덴에 위치한 Maxx Plunk Institute for Macular Cell Biology and Genetics의 그룹 리더입니다. 지금부터 분자 수술을 위한 부위 특이적 재조합 효소를 개발하기 위한 저희의 연구에 대해 말씀드리겠습니다.기본적으로 게놈에서 미리 정의된 서열을 절제할 수 있는 도구로서, 더 구체적으로는 바이러스로부터 HIV 감염 세포를 제거하려는 것입니다. 즉, 감염된 세포의 게놈에서 HIV 프로바이러스를 절제하는 것입니다. 또 다른 개념은 이미 잘 확립된 유전자 도구인 Cre Recombinase를 맞춤화하여, 우리가 미리 정의한 표적 부위를 결합하고 인식하며 활용하는 것입니다.따라서 우리는 HIV 바이러스의 LTR에 자연적으로 존재하는 부위에 결합하는 부위 특이적 재조합효소를 만들 수 있을지 확인하고자 했습니다. 만약 그것이 가능하다면, 게놈에서 프로바이러스를 절제하는 것 또한 가능할 것이라고 예측했습니다. 기본적으로 바이러스의 생애 주기는 바이러스가 세포 내로 통합되는 단계를 거치며, 역전사를 통해 두 개의 말단 반복 서열로 둘러싸인 DNA 템플릿을 생성하게 됩니다.이들은 긴 말단 반복 서열 또는 짧게 LTR이라고 불립니다. 그리고 이것이 핵 내부로 이동하여 숙주 게놈의 게놈 내에 거의 무작위로 통합됩니다. 따라서 이제 통합되어 두 개의 긴 말단 반복 서열, 즉 두 개의 LTR에 의해 측면이 둘러싸인 소위 프로바이러스 상태가 됩니다.현재의 개념은 만약 우리가 LTR에 존재하는 서열을 인식하는 재조합효소를 만들 수 있다면, 숙주 게놈으로부터 프로바이러스를 고리 형태로 절제하여 세포에서 바이러스를 제거할 수 있을 것이라는 점이었습니다. 그것이 개념적인 아이디어였습니다. 사실 재조합효소는 DNA 결합 단백질이며 매우 특정한 부위를 찾아냅니다.따라서 이 효소는 DNA 내의 특정 서열을 인식하는 DNA 결합 도메인을 가지고 있습니다. 이 정확한 서열을 찾았을 때에만 효소가 활성화되며, 그 외의 다른 서열에서는 활성화되지 않습니다.분자 진화의 원리는 기본적으로 누구나 알고 있는 내용인데, 이는 육종과 다름없기 때문입니다. 분자 진화의 원리는 돌연변이를 도입한 다음 선택 과정을 거쳐 특정 특성을 선택하는 것입니다. 이는 식물 육종을 수행할 때와 동일합니다.특정 크기나 특정 색상과 같은 원하는 형질이 있다면, 다음 세대 자손 중에서 해당 특징을 가진 개체

molecular-evolution-of-the-tre-recombinase

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

현재 HIV - 1 전략은 바이러스 생활주기를 억제하지만, 효과적으로 감염을 근절하지 행동. 여기, 우리는 입증되는 감염된 세포의 게놈에서 설계 recombinase 수 효율적으로 소비세 통합 HIV - 1 proviral DNA.

인터뷰 : 진화 Recombinase을 사용하여 HIV - 1의 DNA 절단 Proviral

에서 상동 재조합 구문을 Recombineering<em&gt; 초파리</em

효모 미토콘드리아 핵 양체 단백질, Mgm101이 큰 올리고머 고리를 형성하는 Rad52 형 재조합 단백질이다. 프로토콜은 말토오스 결합 단백질 (MBP) 태그 양이온 교환 및 크기 배제 크로마토 그래피와 결합 전략을 사용하고 수용성 재조합 Mgm101 준비를 설명합니다.

MBP 기반 태깅 전략에 의해 Mgm101 재조합 단백질의 제조

여기에서는 T-세포 수용체 절제원(TREC)과 K-삭제 재조합 절제원(KREC)을 동시에 정량화하는 방법을 설명합니다. TREC/KREC 분석은 흉선 및 골수 배출량의 마커로 사용할 수 있습니다.

T 세포 수용체 절제술 원의 동시 정량 (TRECs)와 K-삭제 재조합 절제술 원 (KRECs) 실시간 PCR에 의한

새로운 서열 특이성을 가진 제한 endonucleases는 부분적으로 퇴화한 서열을 인식하는 효소로부터 개발될 수 있다. 여기에서 우리는 우리가 성공적으로 NlaIV 효소의 순서 특이성을 바꾸기 위하여 이용된 상세한 프로토콜을 제공합니다. 프로토콜의 주요 성분은 전사/번역 반응의 생체외 구획화 및 새로운 서열 특이성을 가진 변이체의 선택이다.

더 엄격한 특이성을 가진 제한 endonuclease의 시험관 진화

특정 사이트 recombinase (SSR) 기술과 Cre 호텔 / 훈제 연어 시스템의 출현은 분자 생물학에 많은 발전을 주도하고, 유전자 변형 동물의 유전자 기능을 평가하기위한 유용한 도구로 자신을 증명되었습니다. 이 인터뷰는 Cyclization recombinase (Cre 호텔) 방법과이 효소의 사용이 전략을 밖으로 전통 노크에 비해 상당한 장점을 가지고 조건부 돌연변이 유발의 개발 하였다하여 사이트 특정 재조합의 메카니즘을 설명합니다.

특정 사이트 Recombinase (SSR) 기술의 원리

우리는 predation 위험이 상승 스트레스의 요구를 충족하기 위해식이 변경 사항을 유도하여 herbivore의 먹이의 화학 품질을 변경할 수있는 방법을 평가하기위한 방법을 제시하는 방법이 스트레스 herbivores에서 시체의 분해는 토양 미생물에 의해 후속 식물 쓰레기 분해 속도가 느려집니다.

Predation 위험, Herbivore 생리적 스트레스와 식물 돼지 미생물 분해를 연결

우리의 GPCR의 다양한 타겟 위치에 부 자연스러운 아미노산, P-아지도-L-페닐알라닌을 유전자 인코딩 및 다른 응용 프로그램에서 아지 그룹의 다양성을 보여줍니다. 이들은 GPCR의 리간드 결합 주머니에 잔류를 확인하는 대상으로 광 가교 기술 및 펩티드 에피토프 태그 또는 형광 프로브의 GPCR의 특정 사이트 bioorthogonal 수정이 (가) 있습니다.

유전자 인코딩 분자 프로브는 G 단백질 결합 수용체를 연구하는

Provided는 열 순환기 또는 현미경 및 스테이지 히터를 사용하여 DNA 샘플의 초기 농도를 정량화하기 위한 실시간 재조합효소 중합효소 증폭 분석을 개발하기 위한 프로토콜입니다. 또한 내부 양성 대조군의 개발도 설명되어 있습니다. 원시 실시간 형광 데이터를 처리하기 위한 스크립트가 제공됩니다.

내부 양성 대조군과 양적 재조합 효소 중합 효소 증폭 분석 개발

윤충류는 생태독성학 및 노화 연구에서 모델로 사용되는 미세한 동물성 플랑크톤입니다. 여기에서는 Brachionus 윤충류의 생존 시간을 강력하고 재현 가능하게 측정하기 위한 프로토콜을 제공합니다. 여러 세대에 걸친 배양 조건의 동기화는 모계 조건이 자손의 생활사에 영향을 미치기 때문에 특히 중요합니다.

생존 시간의 측정에<em&gt; Brachionus</em&gt; 로티퍼 : 산모 조건의 동기화

배우세요 Tre recombinase의 분자 진화를 통해 HIV-1 프로바이러스를 특이적으로 절제하는 방법을. Cre recombinase를 기반으로 한 유도 진화 기법을 활용하여 감염된 인간 세포에서 바이러스를 제거하는 분자 수술 도구를 개발합니다.

트레 Recombinase의 분자 진화

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