Name: 단계 대비 및 차등 간섭 대비 (DIC) 현미경 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: 학습하세요 위상 대비 및 차등 간섭 대비(DIC) 현미경법으로 투명한 생물학적 표본의 미세 구조를 고해상도로 관찰하는 방법을. 이 기법은 생물의학 연구에서 필수적인 광학 이미징 도구입니다.

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여러 비디오 클립은 위상 명암을 입증하고 DIC 현미경이 곡은 다른 동영상 문서에서 찍은 <a href="details.stp?ID=197">공생의 레이어</a> . 조브는 기꺼이 레드 버터 연구실 만든이 기여를 인정한다.

이 실험 방법에 대한 전체 텍스트 프로토콜에서 사용할 수 있습니다 <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">셀 생물학의 현재 프로토콜.</a>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

단계 대비 및 차등 간섭 대비 (dic) 현미경

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

위상 콘트라스트 현미경은 주로 투명, 비, 생물 학적 표본을 빛의 흡수에 대한 대비를 생산하는 데 사용됩니다. 이 기술은 그의 업적에 대해 노벨상을받은 1942 년 저나 이크,에 의해 발견됐다. 그것이, 시료 구조의 세부 가장자리를 강조 조직 세포, 계란, 그리고 배아를 포함한 두께 표본의 고해상도 광학 부분을 제공하고 위상 halos 전형에서 고생하지 않기 때문에 1960 년대 후반에 도입된 DIC 현미경은 생명 의학 연구에 인기가되었습니다 위상 콘트라스트 이미지. 이 프로토콜은 이러한 현미경 기술의 원칙과 실질적인 응용 프로그램을 강조 표시합니다.

이 프로토콜은 위상 및 차등 간섭 대비의 원칙 및 실질적인 응용 프로그램 (DIC) 현미경을 강조

단계 대비 및 차등 간섭 대비 (DIC) 현미경

위상차 현미경(Phase-contrast microscopy)은 투명하고 빛을 흡수하지 않는 생물학적 시료의 대비를 만들기 위해 자주 사용됩니다. 이 기술은 ...에 의해 발견되었습니다.

광학 현미경은 생의학 연구 분야에서 가장 유용하거나, 혹은 그에 못지않게 필수적인 도구 중 하나입니다. 응용 분야에 따라 시료 관찰에 적합한 조명 방식이 달라집니다. 이 영상에서는 투과광 조명의 두 가지 광학 방식인 위상차 현미경과 DIC(미분 간섭 대비) 현미경에 대해 시연하겠습니다.안녕하세요, 저는 텍사스 대학교 헬스 사이언스 센터 샌안토니오 캠퍼스의 광학 이미징 코어 시설의 Victoria San Frolic입니다. 오늘은 위상차 현미경과 미분 간섭 대비 현미경을 사용하여 시료를 올바르게 관찰하는 방법을 보여드리겠습니다. 그럼 시작하겠습니다.표준 명시야 현미경은 투명하고 색이 없는 시료를 관찰하기에 적합하지 않습니다. 위상차 현미경은 빛을 흡수하지 않는 투명한 생물학적 시료의 대비를 생성하기 위해 자주 사용됩니다. 이 기술은 1942년 Zernike에 의해 발견되었으며, 그는 이 업적으로 노벨상을 수상하였습니다.위상차 현미경은 위상판 또는 링이 포함된 특수 위상차 대물렌즈와 다이어프램 대신 콘덴서 환형 조리개(annulus)가 추가된 명시야 광학 현미경입니다. 환형 조리개는 보통 콘덴서 터렛에 위치하며, 사용하는 대물렌즈에 맞춰 환형 조리개의 크기를 선택해야 합니다. 쾰러 조명(Kohler illumination)을 설정한 후, 적절한 위상차 대물렌즈를 선택하고 콘덴서 내에서 그에 맞는 위상차 환형 조리개를 회전시켜 위치시킵니다.대물렌즈 위상 환과 콘덴서 환이 적절히 정렬되어 동심원을 이루며 겹쳐지면, 시편을 관찰하고 초점을 적절히 조절할 수 있습니다. 이제 현미경을 통해 본 위상차 모습이 어떠한지 보여드리겠습니다. 여기 쥐 간 조직 절편의 모습이 있습니다.위상차 현미경 하에서의 모습입니다. 이 방법은 대조도를 다양한 회색조에서 흑백조로 변화시켜 생물학적 시료의 가시성을 높여줍니다. 하지만 시료 주변에 후광(halo) 현상이 나타나 미세 구조가 가려지는 것을 확인할 수 있습니다.이 헤일로는 위상환(phase annulus) 조명으로 인해 발생하는 아티팩트입니다. 이제 명시야(brightfield)로 전환하면, 이 시료를 관찰하기가 매우 어렵다는 것을 알 수 있습니다. 다시 위상차(phase contrast)로 전환하면, 1960년대 후반 도입된 이래로 쥐 간 조직 내 세포의 구조와 형태를 명확하게 확인할 수 있습니다.미분 간섭 대비 또는 DIC 현미경은 대비가 강한 인터페이스를 강화하여 미세 구조의 고해상도 이미지를 생성하기 때문에 생의학 연구에서 널리 사용되어 왔으며, 생성된 이미지는 매우 얇은 광학 단면의 형태를 띱니다. 실제로 DIC의 광학 단면 생성 능력은 공초점 현미경의 보완적인 투과광 조명 방식으로 유용하게 활용되어 왔습니다. DIC 현미경은 명시야 광학 현미경에 광원과 콘덴서 사이에 편광자가 추가된 형태의 장치입니다.콘덴서 부분의 DIC 빔 분할 프리즘, 대물렌즈 바로 뒤의 DIC 빔 결합 프리즘, 그리고 두 렌즈 사이의 무한 공간에 위치한 분석기가 있습니다. DIC 광학계에서 최상의 성능을 얻으려면, 먼저 광학 현미경을 쾰러 조명(Kohler illumination)에 맞게 정렬한 후 광로에 DIC 구성 요소를 배치하는 것이 중요합니다. 광원으로부터 나온 빛은 편광판을 통과한 후 첫 번째 프리즘에 의해 분할됩니다.이 쌍을 이룬 빔들은 서로 근접하여 이동합니다. 만약 이 쌍이 모두 시편 내의 동일한 물질을 통과했다면, 두 번째 프리즘에 의해 재결합될 때 서로 간섭하지 않으므로 회색으로 보입니다. 하지만 구조의 가장자리에서는 쌍을 이룬 빔 중 하나가 상대 빔과는 다른 물질을 통과하게 되어 변화가 일어납니다.이 광선들이 두 번째 프리즘에 의해 다시 결합되면, 보강 간섭을 일으켜 밝은 점을 생성하거나 상쇄 간섭을 일으켜 어두운 점을 생성하게 됩니다. 여기 DIC 대비로 관찰한 규조류의 모습이 있습니다. 규조류 구조의 미세한 세부 사항이 쉽게 확인되는 것을 알 수 있습니다.하지만 DIC 광학계를 제거하면 이러한 세부 사항들은 사라집니다. 시료 전체의 대비는 한쪽은 밝고 다른 쪽은 더 어둡게 나타납니다. 이는 지형적인 입체감을 주는 것처럼 보이지만, 사실 이는 착시 현상입니다.편광판을 교차 지점을 지나 반대편 대비 방향으로 회전시키면 그림자 효과의 방향을 반전시킬 수 있습니다. 지금까지 위상차 및 DIC의 광학 모드에 대해 살펴보았습니다. 다시 한번 상기시켜 드리자면, 위상차 제거(phase contrast elimination)는 대비가 있는 시료를 검은색에서 흰색으로 강화하여, 색이 없고 투명한 시료를 관찰하는 데 유용합니다.DIC는 시료에 대비(contrast)를 생성하기도 합니다. 이는 얇은 광학 단면의 고해상도 이미지를 생성함으로써 이루어집니다. 이것이 전부입니다.시청해 주셔서 감사합니다. 귀하의 현미경 연구에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Neisseria meningitidis (NM), g 부정적인 인간 특정 호흡기 병원체가 인간 α - actinin에 바인딩할 수 있습니다. 여기 우리는 인간의 뇌 microvascular 내피 세포 (HBMECs)에 세균 입국 후 α - actinin 세포와 세균의 colocalisation의 시각화를위한 프로토콜을 제시한다.

의 세포 상호 작용 Visualisation 및 부량 Neisseria meningitidis</em공촛점 이미징에 의해 α - actinin>과 인간

우리는 형광 광 활성화 국소화 현미경(FPALM)을 사용하여 세포 내에서 여러 유형의 형광 표지 분자를 동시에 이미지화하는 방법을 보여줍니다. 설명된 기술은 단일 세포 내에서 수십 나노미터의 정밀도로 수천 개에서 수십만 개의 개별 형광 표지 단백질의 국소화를 산출합니다.

Simultaneous Multicolor Imaging of Biological Structures with Fluorescence Photoactivation Localization Microscopy(형광 광활성화 국소화 현미경을 사용한 생물학적 구조의 동시 다색 이미징)

명시야와 미분 간섭 대비 이미지의 조합을 통해 세포 질량, 부피 및 밀도의 정량적 측정을 수행하기 위해 표준 광학 현미경을 사용하는 방법을 설명합니다.

양이 광학 현미경 : 세포 생물 물리학의 측정​​ 표준 광학 현미경과 특징

공 초점 현미경은 매력적인 현탁액을위한 모델 시스템으로 공부하는 이미지 정지 흐르는 콜로이드 폴리머의 혼합물에 사용된다. 이미지 분석 알고리즘은 기하 구속에 의한 변화를 측정 콜로이드 입자의 구조 및 동적 메트릭을 계산하는 데 사용된다.

밀폐 무부하 흐르는 콜로이드 중합체 혼합물의 공 촛점 이미징

여기에 우리가 현재 기존의 피 형광 이미징, 단일 분자 검출 기반 슈퍼 해상도 이미징, 및 다중 색상 단일 분자 검출 병합, 통합된 현미경 시스템 구축의 실용적인 가이드 포함 단일 분자 형광 공명 에너지 비용 효율적인 방법으로 하나의 설정으로 이미지를 전송 합니다.

실시 한 형광 현미경으로 여러 영상 모드

이 프로토콜의 목표는 혈장 나노 입자 샘플의 제조를 위한 입증 된 접근법을 상세히 설명 하 고 차동 간섭 대비 (DIC) 현미경을 사용 하 여 단일 입자 분광학을 수행 하는 것입니다.

투과 형 Nomarski 타입 차동 간섭 콘트라스트 현미경을 사용 하 여 플라스 몬 Ic 나노 입자에 대 한 분광학 수행

이 원고는 단일 세포 형광 현미경 검사를 사용하여 공동 문화에서 세균 경쟁을 시각화하고 정량화하는 방법을 설명합니다.

단세포 형광 화상 진찰을 사용하여 세균 간 경쟁의 정량화

차동 동적 현미경 (DDM)은 동적 광산란과 현미경의 기능을 결합합니다. 여기서, DDM을 사용하여 비멘틴 네트워크에서 입자의 서브확산 및 케이징된 역학을 정량화함으로써 재구성된 세포골격 네트워크를 특성화하는 과정과 활성 미오신 구동 액틴-미세소관 복합체의 탄도 운동이 제시된다.

차등 동적 현미경을 사용하여 세포 골격 역학 정량화

이 프로토콜은 고해상도 셀룰러 및 아셀룰러 이미징을 위한 다중화 배열 검출기와 통합된 레이저 스캐닝 공초점 현미경 시스템의 첨단 영상 응용과 공유 자원 관리를 상세히 설명합니다. 이 워크플로우는 단일 플랫폼 내에서 공초점에서 초해상도(~120 nm)까지 다중 모달 이미징을 가능하게 하여 나노스케일 시각화를 더욱 쉽게 접근할 수 있게 합니다.

초해상도 영상 및 공유 관리: 다중화 검출이 포함된 공초점 현미경 프로토콜

새로운 줄기 세포 요법의 평가는 생체내에 주입된 세포를 추적 비 invasively하는 것이 중요합니다. 이 동영상은 생체내의 후속 MR 영상에 대한 생체내의 철 산화물 기반의 콘트라스트 에이전트와 인간 mesenchymal와 배아 줄기 세포를 레이블하는 방법을 보여줍니다.

이런 산화물로 hESCs과 hMSCs을 라벨링하는 MR 영상과 생체내 추적 비침습에 대한 Nanoparticles

학습하세요 위상 대비 및 차등 간섭 대비(DIC) 현미경법으로 투명한 생물학적 표본의 미세 구조를 고해상도로 관찰하는 방법을. 이 기법은 생물의학 연구에서 필수적인 광학 이미징 도구입니다.

단계 대비 및 차등 간섭 대비 (DIC) 현미경

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