Name: Drosophila Melanogaster에서 애벌레 CNS의 해부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: 배우세요 Drosophila melanogaster 3령 유충 중추신경계 해부법을 통해 신경발생 연구를 수행하는 방법을. 이 기술은 단백질 발현 분석과 신경계 구조 연구에 필수적인 모델 생물학 기법입니다.

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<ol><li> 표피에 부착된 CNS를 떠나, 3 차 instar의 유충을 해부하다. 1.5 ML 튜브에 놓습니다. </li><li> 락을 40 분 2 % 포름 알데히드를 포함하는 PBS (1X)에서 수정. ; 모든 50-10 해부 CNS에 대한 250ul를 사용하십시오. </li><li> 포름 알데히드를 제거하고 짧게 3 번 씻어 PBS + 0.1 % 트리톤 X - 100 (PBST). 조직의 손실을 피하기 위해 가늘게 뽑아 파스퇴르 피펫을 사용합니다. </li><li> 비 - 특정 단백질 바인딩 사이트를 차단하고 PBST에서 조직 1-8 시간을 잠복기하여 세포 세포막을 permeabilize + 4 락을 5 % BSA, ° C.를 </li><li> 4 ° C 하룻밤에 PBST + 5% BSA 락을에 희석 일차 항체에 품어. 최적의 항체 희석 다른 항체에 따라 다를 수 있습니다. </li><li> 4 두 30 분 세척 ° C. 다음 PBST로 3 배 린스 </li><li> PBST로 희석 이차 항체에 품어 + 4 락을 1-3 시간에 대한 5 % BSA ° C.를 4 두 30 분 세척 ° C. 다음 PBST로 3 배 린스 보조가 빛을 민감한 화합물을 복합하는 경우, 알루미늄 호일에 튜브를 바꿈. </li><li> 추가 조직을 해부하다 (필요한 경우) 및 슬라이드에 탑재합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

이 비디오는 세번째 instar Drosophila의 유충에서 CNS를 해부하다하는 방법을 보여줍니다. 절개 후, CNS는 표준 immunohistochemistry 프로토콜을 사용하여 얼룩하실 수 있습니다. 현재, 한결 성인 신경계가 그 상점 얼마나뿐만 아니라 생성되는 방법에 대해 알 수 있으며, 정보를 전송합니다. 개발 Drosophila 애벌레의 CNS의 연구 신경계 배선과 기능에 대한 지식을 강화해야합니다. Drosophila의 애벌레는 환경 신호에 대한 응답으로 stereotpyed 행동의 번호를 나타냅니다. 어떻게 이런 행동은 배운 그리고 신경 계통에 저장됩니다? 애벌레 개발 중에 신경 계통의 연구는이 질문에 대답하는 데 도움이 될 것입니다. Drosophila 개발이 단계에서는 유기체가 pupation 중에 발생하는 방대한 형태학의 변화를 받아야하는 준비하고 있습니다. 이 시간 동안, 신경근육학 시스템의 대규모 개조가 크롤 링 구더기에서 성인 플라이로 organsim 변환으로 발생합니다. 그것은 행동의 동일한 유형이 높​​...

drosophila melanogaster에서 애벌레 cns의 해부

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Drosophila의 애벌레의 중추 신경계 (CNS)는 복잡하고 제대로 이해합니다. CNS 조사 방법 중 하나는 각종 소설 및 마커 단백질의 표현을 검토하는 immunohistochemistry를 사용하는 것입니다. 어려운 표피가 뱃속 내부 관통 항체를 방지하기 때문에 전체 애벌레의 스테 이닝 것은 허무합니다. 이러한 조직을 얼룩하기​​ 위해서는 고정과 얼룩하기​​ 전에 동물을 해부하다하는 것이 필요합니다. 이 문서에서 우리는 CNS를 손상하지 않고 Drosophila의 유충을 해부하다하는 방법을 보여줍니다. 좋은 포셉 한 쌍의로 절반 유충을 찢어로 시작, 다음 CNS를 노출하기 위해 표피 &quot;내부 아웃&quot;을 설정합니다. 해부가 신중하게 수행하면 CNS는 표피에 부착된 상태로 유지됩니다. 우리는 보통 고정 및 얼룩 단계에 걸쳐 표피에 부착된 CNS를 유지하고, 오직 완전히 유리 슬라이드에 샘플을 장착하기 직전 표피에서 CNS를 제거합니다. 우리는 또한 이브, CNS의 뉴런의 집합으로 표현 전사 인자 물들일 애벌레 CNS의 일부 대표 이미지를 보여줍니다. 이 문서는이 기술과 발생할 수있는 잠재적인 문제의 실질적인 사용의 몇 가지 논의로 마칩니다.

이 문서에서 우리는 세번째 instar Drosophila의 유충에서 중추 신경계를 해부하다하는 방법을 보여줍니다.

Drosophila Melanogaster에서 애벌레 CNS의 해부

초파리 유충의 중추신경계(CNS)는 복잡하며 이에 대한 이해가 부족한 실정입니다. 중추신경계를 연구하는 한 가지 방법은 면역조직화학법을 사용하여...

제 이름은 Nate Fer이며, 이곳 Princeton의 대학원생입니다. 우선, 벌레를 찾아 PBS가 담긴 접시로 옮겨야 합니다.이렇게 보일 것입니다. 이를 반으로 찢으면 내부 기관들이 모두 쏟아져 나옵니다. 여기 큐티클과 여러 내부 구조물들이 있는데, 내부가 밖으로 뒤집혔는지 확인하고 중추신경계(CNS)가 여전히 붙어 있는지 확인해야 합니다. 자, 됐습니다. 네, 바로 여기에 있습니다.바로 여기입니다. 어느 것인가요? 제 오른쪽 포셉으로 잡고 있는 것을 보실 수 있습니다.여기 두 개의 서로 다른 엽이 있고, 그 다음에는 마치 원뿌리처럼 아래로 뻗어 있는 CNS 자체가 있습니다. 그것은 어두운 색의 구강 갈고리와 나머지 큐티클의 오른쪽 부분에 위치해 있습니다. CNS를 이렇게 분리해 보시겠습니까? 네, 좋습니다.떼어낼 수 있습니다. 위에서 아래로 내려다보면 두 개의 엽과 CNS 자체가 보입니다.그렇다면 왜 이 실험을 수행하는 것일까요? 우리는 유충의 신경계에서 단백질의 발현을 관찰하고자 합니다. 이를 위한 가장 좋은 방법은 유충 조직을 분리하는 것입니다.전체 조직의 큐티클을 통해 항체가 침투하기 어렵기 때문에, 먼저 유충의 CNS를 박리한 다음 박리된 조직을 사용하여 원하는 단백질 염색 분석을 수행합니다. 구체적으로 왜 이렇게 하는 것일까요?음, 분석 관점에서 여러분의 관심사가 무엇인지에 따라 달라지기 때문입니다. 제가 연구하고 있는 단백질은 발달 과정 전반에 걸쳐 발현되며, 우리는 단백질의 위치가 어떻게 변하는지, 그리고 어떤 유형의 세포들이 우리 단백질을 발현하고 있는지 확인하고자 합니다. 따라서 발달 과정 전반에 걸친 시계열 데이터를 얻고자 합니다.이 실험의 구체적인 문제점은 무엇일까요? 앞서 언급했듯이, 한 가지 문제는 조직을 해부해야 한다는 점입니다. 따라서 최소한 초기에는 유충을 안정적으로 고정하고, 조심스럽게 분리하며, 도립법(inverted technique)을 수행할 수 있는 기술적 숙련도가 많이 요구됩니다.중추신경계(CNS)를 노출시키려면 끝이 미세한 핀셋(fine tips forceps)이 필요합니다. 핀셋의 끝이 충분히 미세하지 않으면, 마치 손가락 대신 벙어리장갑을 끼고 작업하는 것과 같기 때문입니다. 따라서 처음에는 기술을 익히는 것이 다소 까다로울 수 있지만, 익숙해지고 나면 그리 어렵지 않습니다.그리고 염색 과정은 실제로 그리 어렵지 않습니다. 일반적인 항체 염색법을 따르면 됩니다.

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연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 해부하다하는 방법을...

Drosophila 애벌레 NMJ의 해부

Drosophila melanogaster의 애벌레가 애벌레 segmental 신경 이내 axonal 수송의 메커니즘을 조사하기 위해 이상적인 모델 시스템을 제공합니다. 이 절차를 사용하여 다양한 변이를 갖고 제 3 instar의 애벌레는 야생 타입 애벌레 비교할 수 있습니다.

3 애벌레 Segmental 신경의 시각화 차 Instar Drosophila 애벌레 준비

우리는 조직에 특정한 FLP는 Gal80 표현식 패턴을 결정 수 있도록 Flippase 유도된 교차 Gal80/Gal4 억압 (FINGR) 메서드를 설명합니다. 어디서나 Gal4 및 FLP의 중복은 Gal4 표현은 켜져 있습니다 (Gal80가 정신이 나갔죠) 또는 해제 (Gal80가 뒤집혀). FINGR 방법은 clonal 분석과 신경 회로 매핑을위한 다목적 있습니다.

매핑 및 애벌레와 성인의 확장기 - 트랩 Flippase의 표현의 응용 Drosophila CNS

이 비디오는 성체 초파리의 뇌를 해부하고 분리하는 방법을 설명하며, 이는 큐티클, 눈 및 기관 조직에 의해 가려진 장기를 시각화하는 데 필요한 절차입니다. 예시 프로토콜은 초파리 신경생물학의 면역염색 및 이미징 방법에 사용할 수 있는 고품질 제제를 산출하는 상세한 시연을 보여줍니다.

초파리 성인 뇌 해부: 파리 신경생물학의 방법

이 비디오는 초파리 유충의 뇌 이식 부위를 해부하고 장착하는 방법을 보여줍니다. 안구 디스크에 부착된 중추신경계(CNS)를 유충에서 추출한 다음 생리식염수 용액의 유리 슬라이드에 장착합니다.

초파리 유충 뇌 이식의 해부 및 장착

중추 신경계 재생 및 수리를 조사 Drosophila 애벌레의 복부 신경 코드를 사용하여 부상 패러다임이 설명되어 있습니다. 의도적으로 개발 한 소프트웨어 및 유전학과 정량 분석​​과 함께 시간 경과 및 고정 표본에서 공 촛점 현미경을 스캔 레이저, 다음 찌른 곳은 CNS 재생 및 수리의 분자 메커니즘을 조사하는 데 사용됩니다.

에 중추 신경 시스템 복구를 조사하기 위해 상해 패러다임<em&gt; Drosophila</em

이 프로토콜은 그대로 애벌레 뇌의 맥락에서 라이브 세포 이미징을 수행하는 데 사용하는 효율적인 방법을 자세히 설명합니다. 라이브 세포 이미징 방식은 지속적으로 이전에 간과 된 메커니즘을 밝혀, 비대칭 신경 줄기 세포 분열의 연구뿐만 아니라 다른 신경 인성과 발달 과정에 대한 귀중한 있습니다.

의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레 Neuroblasts

이 프로토콜 설명 해 부와 성인 초파리 melanogaster 의 immunostaining 뇌 조직. 특히,이 프로토콜은 신경 개발의 많은 측면을 기본 일반적인 원리를 밝히기 위해 정확 하 게 사용할 수 있는 예제 신경 하위 집합으로 초파리 버섯 몸과 포토 리셉터 뉴런의 사용을 강조 표시 합니다.

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

이 프로토콜은 이미징을 위해 유충 및 성체 초파리 시신경엽을 준비하는 세 가지 단계인 1) 뇌 절개, 2) 면역조직화학, 3) 장착을 설명합니다. 3단계에 중점을 두었는데, 이는 특정 시신경엽 구조를 시각화하기 위해 뚜렷한 장착 방향이 필요하기 때문입니다.

Dissection, Immunohistochemistry and Mounting of Larval and Adult Drosophila Brains for Optic Lobe Visualization(시신경엽 시각화를 위한 유충 및 성체 초파리 뇌의 해부, 면역조직화학 및 마운팅)

여기에서 우리는 생리학적 조건에서 세포 및 세포 내 역학을 관찰하기 위해 Drosophila melanogaster 세 번째 instar 유충에서 살아있는 외식편 뇌를 준비, 해부, 장착 및 이미지화하는 워크플로에 대해 논의합니다.

Drosophila melanogaster Third Instar 애벌레 뇌의 생세포 이미징

배우세요 Drosophila melanogaster 3령 유충 중추신경계 해부법을 통해 신경발생 연구를 수행하는 방법을. 이 기술은 단백질 발현 분석과 신경계 구조 연구에 필수적인 모델 생물학 기법입니다.

Drosophila Melanogaster에서 애벌레 CNS의 해부

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