Name: Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 구강 감염 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-03T23:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 학습하세요 Lepidopteran 애벌레의 baculovirus 구강 감염 기술로 살충 효율을 평가하는 방법을 배우세요. droplet feeding과 diet plug bioassay를 활용한 생물학적 방제 연구에 활용할 수 있습니다.

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방문하십시오 <a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">스프링거 프로토콜을</a> insecidical 대리인이 분석에서 사용되는 경구 감염 기법으로 엔지니어링 baculovirus에 대한 자세한 내용은.

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

baculovirus과 lepidopteran 애벌레의 구강 감염 프로토콜

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculoviruses 널리 단백질 발현 벡터로서 그리고 곤충 해충 관리 요원으로 모두 사용됩니다. 이 동영상은 lepidopteran의 애벌레가 비말 먹이와 다이어트 플러그인 기반 bioassays로 polyhedra에 감염 수있는 방법을 보여줍니다. 이 동반 스프링거 프로토콜 섹션은 살충제로 baculoviruses의 사용에 대한 찬반의 토론을 포함 insecticidal 요원 baculoviruses의 baculovirus 수명주기 및 사용 개요와 개선 insecticidal 효능에 대한 baculoviruses의 유전 향상에서 만든 진전을 제공합니다.

이 비디오에서는, 우리는 insecticidal 효율성을 결정하기 위해 baculovirus와 lepidopteran 유충의 경구 감염 기법을 보여줍니다.

Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 구강 감염 프로토콜

바큘로바이러스(Baculoviruses)는 단백질 발현 벡터와 해충 방제제 모두로 널리 사용됩니다. 이 영상에서는 나비목 유충을 어떻게 ...

Vao 바이러스는 단백질 발현을 위해 곤충 세포주와 결합하여 사용하는 DNA 벡터로 흔히 이용됩니다. 하지만 이 바이러스가 곤충을 효율적으로 감염시켜 치명적인 결과를 초래한다는 점은 이를 효과적인 살충제로 활용할 수 있게 합니다. 예를 들어 브라질에서는 벨벳콩나방을 방제하기 위해 매년 100만 헥타르 이상의 대두 작물에 야생형 balo 바이러스를 적용하고 있습니다. 살충 효능을 높이기 위해 balo 바이러스는 곤충의 HemosIL 내에서 활성화되는 곤충 특이적 독소 인코딩 유전자를 통해 유전적으로 조작되었습니다.본 영상에서는 살충 효능을 분석하기 위해 나비목 유충에 bacao virus를 경구 감염시키는 방법을 시연합니다. 안녕하세요, 아이오와 주립대학교 안과 및 생물학과의 Blind Boning 연구실 소속 연구원입니다. 그리고 저 또한 boning 연구실의 Wendy Sparks입니다. 오늘은 나비목 유충의 VA virus 감염을 위한 두 가지 절차를 보여드리겠습니다.먼저 액적 급이 바이오어세이(droplet feeding bioassay)를 사용하여 신생 유충을 감염시키는 방법을 보여드리겠습니다. 그다음으로 사료 혈액 바이오어세이(diet blood bioassay)를 사용하여 중기 및 후기령 유충을 감염시키는 방법을 보여드리겠습니다. 그럼 시작하겠습니다.방울 먹이 생물 검정(Droplet feeding bioassays)은 아바카비르(abacavir)의 치사량 결정 및 balo 바이러스에 감염된 유충의 생존 시간 측정에 사용될 수 있습니다. 이 검정에는 일반적으로 초기령 또는 신생 유충이 사용됩니다.시작하기 전에 적절한 사료가 담긴 사료 컵이 준비되어 있는지 확인하십시오. 또한, 부피 기준 4% 농도의 녹색 식용 색소를 포함하여 적절한 바이러스 희석액을 준비하십시오. 치사 바이러스 농도를 결정하기 위해, 희석액은 1%에서 99% 사이의 사망률 범위를 나타내어야 합니다. 적절한 바이러스 농도 범위를 결정하기 위해 예비 생물학적 분석(bioassay)이 필요할 수 있습니다. 다면체(polyhedra)의 침전물을 방지하기 위해 튜브를 볼텍싱(vortexing)한 후, 60 millimeter 페트리 접시에 바이러스 용액을 작은 방울 형태로 두 개의 동심원을 그리며 떨어뜨리십시오.사용되는 각 바이러스 농도마다 음성 대조군으로 모의 감염(mock infection)을 함께 설정해야 함을 기억하십시오. 다음 처리 단계로, 멸균된 붓을 사용하여 신생 유충 25~30마리를 동심원의 중앙으로 옮깁니다. 배양 접시의 뚜껑을 덮고 파라필름으로 밀봉하여 유충이 탈출하는 것을 방지합니다.이상적으로는, 처리군 간의 오염을 방지하기 위해 바이러스 유형별 전이 시 서로 다른 페인트 브러시를 사용하십시오. 유충이 용액을 마실 수 있도록 디쉬를 실온에 10분에서 15분 동안 그대로 둡니다. 식이를 섭취한 유충은 녹색 식용 색소의 전이로 인해 전장(anterior gut)이 녹색으로 변한 것을 통해 식별할 수 있습니다. 식이를 섭취한 유충만을 식이가 들어 있는 1온스 플라스틱 컵으로 옮기며, 컵당 유충 한 마리씩 전이합니다.유충을 옮긴 후, 컵의 뚜껑을 덮고 감염 후 28 °C에서 24시간 동안 배양합니다. 죽은 유충이 들어 있는 컵은 모두 제거하십시오. 이러한 초기 폐사는 취급 중 발생한 손상으로 인한 것일 가능성이 높습니다.치사량을 결정하기 위해 이 생물학적 분석법을 사용할 때는, 모의 감염된 유충과 생존한 바이러스 처리 유충이 번데기가 되거나 번데기가 되기 위해 흙 속으로 파고들 때까지 2~3일마다 유충을 확인해야 합니다. 바이러스에 감염된 유충은 먹이 위에 그대로 머물다가 며칠 후 죽게 됩니다. 죽은 유충은 때때로 쭈그릇해지며 검게 변합니다. 감염되어 죽은 유충은 기본적으로 다면체 포함체 주머니가 되며, 이 시점에 기계적인 자극이 가해지면 완전히 용해됩니다. 각 처리군에서의 유충 사망률을 기록하십시오.치사 농도 생물 분석은 서로 다른 시기에 3~4회 반복 실시해야 합니다. 각 바이러스 처리군 또는 대조군 처리당 농도별로 30마리의 개체를 사용하십시오. polo 또는 SAS와 같은 적절한 프로빗 분석 프로그램을 사용하여 LC₅₀ 값, 95% 신뢰 구간 및 적절한 통계치를 계산하십시오.이 액적 공급 분석법은 ST 50 생존 시간 값을 결정하는 데에도 사용할 수 있습니다. 이 경우, 더 빈번한 관찰을 통해 4~8시간마다 유충의 폐사율을 측정합니다. 폐사율이 높을 경우, 바이러스의 lc 99 용량을 사용하여 생존 시간 생물 분석을 수행하며, s plus 또는 SAS 프로그램을 이용한 Kaplan Mayer 추정법을 통해 중앙 생존 시간과 95% 신뢰 한계를 계산합니다.Harang이 액적 급이 생물검정법(droplet feeding bioassay)을 보여주었으므로, 이제 제가 식이 플러그 생물검정법(diet plug bioassay)을 보여드리겠습니다. 식이 플러그 생물검정법에서는, 치사량 또는 LD 50을 결정하기 위해 중기에서 후기령 유충에게 알려진 용량의 바이러스로 처리된 식이 플러그를 급이합니다. 이 검정을 수행하기 전날, 컵에서 식이를 제거하여 유충을 하룻밤 동안 굶깁니다.이 단계는 유충이 바이러스를 섭취하는 속도를 높여줍니다. 다음 날, 먹이를 약 2mm³ 크기의 작은 정육면체로 잘라 접종용 먹이 큐브를 준비하십시오. 먹이 큐브의 크기가 너무 작으면 쉽게 건조해집니다.식이 큐브의 크기가 너무 크면 유충이 하룻밤 사이에 큐브 전체를 섭취하지 못할 수 있습니다. 이제 각 식이 큐브에 다면체 suspension 1~2 µL를 첨가합니다. 이 suspension에는 부피 대비 4%의 식용 색소가 포함되어 있습니다.현탁액이 먹이에 충분히 스며들도록 5분에서 15분 동안 둡니다. 음성 대조군으로 모의 바이러스 처리 먹이 큐브도 함께 준비해야 함을 기억하십시오. 다음으로, 각 컵에 있는 4령 유충에게 먹이 큐브를 하나씩 옮겨 줍니다.그 후 컵을 28 °C 인큐베이터에 넣고 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 먹이 큐브를 완전히 다 먹지 않은 유충은 제거합니다. 그런 다음 남은 유충들이 들어 있는 각 컵에 큰 조각의 먹이를 추가합니다. 모사 감염된 유충과 생존한 바이러스 감염 유충이 먹이를 다 먹거나 번데기가 되기 시작할 때까지 필요에 따라 먹이를 추가하며 유충을 28 °C에서 유지합니다.이 시점에서 죽은 곤충과 살아남은 곤충의 수를 기록하십시오. 곤충을 baculovirus로 감염시키는 두 가지 방법인 bleeding(출혈) feeding biopsy(섭식 생검)와 diet plaque biopsy(먹이 플라크 생검)를 보여드리겠습니다. 이 절차를 수행할 때, baculovirus로 인해 죽은 유충의 사체는 일반적으로 취약하며 쉽게 파열되어 바이러스가 방출될 수 있다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.따라서 오염을 방지하기 위해 작업 표면을 멸균하고, 오염된 장갑과 일회용 재료를 적절한 방법으로 폐기하십시오. 이것으로 모든 과정을 마칩니다. 시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오에서는, 우리는 insecticidal 효율성을 결정하기 위해 baculovirus와 lepidopteran 유충의 감염에 사용이 microapplicator 기술을 보여줍니다.

Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 Microapplicator를 이용한 감염 프로토콜

방법은의 hemocoel에 entomopathogenic 박테리아의 직접 분사을 이용하여 여기에서...

의 양육 및 분사<em&gt; Manduca sexta</em박테리아 독성을 평가하기&gt; 애벌레

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곤충<em&gt; 갤러리아 mellonella</em&gt; 세균 Pathogenesis를 조사 할 수있는 강력한 감염 모델로

이 비디오는 큰밀랍나방인 Galleria mellonella의 유충에서 Mycobacterium bovis 감염 모델을 확립하는 방법을 보여줍니다. Mycobacterium bovis BCG의 생물 발광 균주를 유충의 혈림프에 주입하여 감염을 확립하고, 감염 진행 상황을 연구하기 위해 미리 정의된 간격으로 생물 발광을 측정합니다.

곤충 유충에서 세균 감염 모델을 확립하는 기술

지중해초파리(medfly) Ceratitis capitata(Diptera: Tephritidae)는 전 세계 농업 해충입니다. 이 식물의 생물학에 대한 깊은 이해는 메드플라이 개체군을 통제하여 경제적 영향을 줄이는 데 중요합니다. 배아 미세주입(embryo microinjection)은 이 종에서 생식세포 형질전환(germ-line transformation)과 역유전학(reverse genetics) 연구를 모두 가능하게 하는 근본적인 도구입니다.

세계적인 농업 해충 곤충의 배아 미세 주입을 통해 핵산 배달,<em&gt; Ceratitis의 capitata</em

이 프로토콜 열 충격 유발 단백질 식 시스템 (pDHsp/V5-그 의/sf9 셀 시스템), 외국 단백질을 표현 하거나 안티 apoptotic 활동의 잠재적인 외국 단백질 및 그들의 잘린 아미노 평가에 사용 될 수 있는 설명 곤충 세포에서 산입니다.

과도 식의 외국 유전자 단백질 기능 분석 결과 대 한 곤충 세포 (sf9)

이 프로토콜에서 잠재 Sf9 세포로 잠재 플라스 미드의 과도 transfection에 의해 생산 이며 혈 청 무료 현 탁 액 문화에서 증폭. 상쾌한 덤플링 친화성 크로마토그래피에 의해 순화 하 고 ultracentrifugation에 의해 더 집중. 이 프로토콜은 생산 및 유전자 치료 응용 프로그램에 대 한 잠재의 정화에 대 한 유용 합니다.

생산 및 유전자 치료 응용 프로그램에 대 한 잠재의 정화

여기, 우리 제시 집 플라이 carboxylesterase 단백질에서 생체 외에서 잠재 중재 곤충 세포 표현 시스템으로 생산 하 고 나중 기능 metabolizing permethrin에 그들의 역할을, 특성화를 프로토콜 pyrethroid 부여 셀 기반 MTT 분석 결과 및 체 외에서 대사 연구를 실시 하 여 저항.

살충제 내성 집 파리, 파리 자리 부채 에 Carboxylesterases의 기능 특성

여기, 선물이 곤충 세포 및 잠재 단백질 식 시스템 단백질 결정 화에 대 한 분 비 하는 식물 단백질의 대량 생산에 활용에 대 한 프로토콜. 잠재 식 벡터 GP67 또는 곤충 hemolin 신호 펩 티 드 식물 곤충 세포에서 단백질 분 비 식에 대 한 수정 되었습니다.

식물 단백질 곤충 세포에서 분 비 생산 잠재 식 벡터를 수정

바쿨로바이러스 발현 벡터 시스템(BEVS)은 생화학, 생물리, 구조 연구에 사용되는 단백질 아르기닌 메틸 트랜스퍼라제(PRMT)의 발현 선별 및 생산을 위한 견고한 플랫폼이다. 밀리그램 수량의 물질은 대부분의 PRMT 및 진핵 발현 플랫폼을 요구하는 관심있는 다른 단백질을 위해 생성될 수 있다.

바쿨로바이러스 발현 벡터 시스템을 이용한 재조합 PRMT 단백질 생산

인간 막 수송체의 구조 및 생화학적 연구에는 밀리그램 단위의 안정적이고 온전하며 균질한 단백질이 필요합니다. 여기서는 코돈 최적화 유전자를 사용하여 인간 용질 운반체 수송체를 스크리닝, 발현 및 정제하는 확장 가능한 방법을 설명합니다.

구조 및 생화학 연구를 위한 Human Solute Carriers의 High-Throughput Expression and Purification of Human Solute Carriers for Structural and Biochemical Studies(구조 및 생화학 연구를 위한 인간 용질 담체의 고처리량 발현 및 정제)

학습하세요 Lepidopteran 애벌레의 baculovirus 구강 감염 기술로 살충 효율을 평가하는 방법을 배우세요. droplet feeding과 diet plug bioassay를 활용한 생물학적 방제 연구에 활용할 수 있습니다.

Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 구강 감염 프로토콜

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