Name: Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 Microapplicator를 이용한 감염 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-23T13:32:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: 배우세요 미세분주기를 이용한 Baculovirus 감염 기법으로 나비목 애벌레의 살충 효능을 평가하는 방법을 익히세요. 직접 주사와 경구 접종 기법을 통해 바이러스 전파와 치사율을 정밀하게 분석할 수 있습니다.

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방문하십시오 <a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">스프링거 프로토콜을</a> insecidical 에이전트로 엔지니어링 baculovirus이 분석에서 사용되는 microapplicator 기술에 대한 자세한 내용은.

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baculovirus과 lepidopteran 애벌레의 microapplicator를 이용한 감염 프로토콜

Protocols for Microapplicator-assisted Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculoviruses 널리 단백질 발현 벡터로서 그리고 곤충 해충 관리 요원으로 모두 사용됩니다. . 이 동영상은 lepidopteran의 애벌레가 baculovirus의 polyhedra와 창자와 budded 바이러스 hemolymph에 microapplicator 기법에 감염된 수있는 방법을 보여줍니다. 이 동반 스프링거 프로토콜 섹션 insecticidal 요원 baculoviruses의 baculovirus 수명주기 및 사용에 대한 개요를 제공합니다. 해충 제어 목적을 위해 baculoviruses의 책정 및 응용 프로그램을 다른 곳으로 설명되어 있습니다.

이 비디오에서는, 우리는 insecticidal 효율성을 결정하기 위해 baculovirus와 lepidopteran 유충의 감염에 사용이 microapplicator 기술을 보여줍니다.

Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 Microapplicator를 이용한 감염 프로토콜

바쿨로바이러스는 단백질 발현 벡터와 해충 방제제로 모두 널리 사용됩니다. 본 영상에서는 나비목 유충을 어떻게 ...

절지동물 특이적 바큘로바이러스(baculovirus)는 진핵세포 단백질 발현 시스템을 위한 표준 연구 도구로 사용될 뿐만 아니라, 자연계의 나비목과 같은 초식 곤충을 사멸시킬 수 있는 환경 친화적인 살충제로도 개발되고 있습니다. 나비목 유충은 감염된 잎을 먹을 때 바큘로바이러스에 감염됩니다. 유충 또는 애벌레는 다면체(polyhedron)라고 알려진 형태로 바큘로바이러스를 섭취하는데, 이는 바이러스를 건조로부터 보호하는 거대한 결정성 단백질 구조 내에 바이러스 입자들이 포장된 복합체입니다.유충이 감염되면, 침입한 바이러스가 곤충 내부로 감염을 확산시킵니다. 바이러스는 호스트의 핵산 및 단백질 합성 기전을 가로채어 더 많은 바이러스와 다면체를 생성합니다. 결과적으로 유충은 바이러스에 매우 심하게 감염되어 다면체의 끈적한 액체 상태로 녹아내리며, 이것이 곤충이 섭식하는 식물 표면에 떨어지면서 사이클이 다시 시작됩니다. 이는 특정 Baca의 살충 효능을 결정하기 위함입니다.Avir 균주 마이크로 어플리케이터 기술과 바이오어세이를 결합하여 사용할 수 있습니다. Leid dorin 유충의 HemosIL 또는 체강에 바이러스를 직접 주입하여 감염시킨 후 사망률을 평가할 수 있습니다. 또한, 구강 마이크로 어플리케이터 보조 주입법을 사용하여 유충에 polyhedra를 감염시킬 수 있으며, 장 및 기타 조직의 감염 시점을 분석할 수 있습니다.안녕하세요, 저는 아이오와 주립대학교 곤충학과의 Brian e boning 연구실에 소속된 Wendy Sparks이며, boning snap에서도 활동하고 있습니다. 오늘은 실험실 사육 오리(lab duck DI)를 백로그 바이러스(backlog virus)로 감염시키는 두 가지 절차를 보여드리겠습니다. 두 방법 모두 마이크로 어플리케이터(micro applicator)를 사용합니다.먼저, 마이크로 어플리케이터를 사용하여 프로브를 통해 헤니에 바디 바이러스를 주입하는 방법을 보여드리겠습니다. 그다음, 마이크로 어플리케이터를 사용하여 마우스의 입을 통해 미드 가드에 폴리 헤더를 주입하는 방법을 보여드리겠습니다. 그럼 시작하겠습니다.살충 목적으로 개발될 때, balo 바이러스는 보통 해충 유충의 경구 감염을 용이하게 하기 위해 polyhedron 유전자를 포함합니다. 하지만 때로는 polyhedron 음성 baccala 바이러스의 잠재적 살충 효과를 테스트하거나 곤충의 장을 우회해야 할 이유가 있습니다. 이 경우, 분석을 시작하기 전 마이크로 어플리케이터를 사용하여 버티드 바이러스를 주입함으로써 유충을 감염시킬 수 있습니다.접종용 바이러스 working stock의 역가는 플라크 분석법(plaque assay) 또는 종말 희석 분석법(endpoint dilution assays)을 사용하여 결정해야 합니다. 생리학적 실험의 경우, 5령 H VNS당 5 × 10⁴ PFU를 주입하는 것이 일반적입니다. 이 생물학적 분석을 시작하려면, 각 단계별로 희석된 접종용 바이러스를 28.5 또는 32 gauge 샤프 니들 팁이 장착된 1 cc 플라스틱 헐큐(hercule) 시린지에 충전하십시오.일반적으로 1mL당 10⁷~10⁸의 타이터(titer)를 가진 희석된 바이러스 용액을 유충당 1~3µL 사용하며, 대부분의 경우 시린지에 300~500µL를 충전하는 것으로 충분합니다. 그다음, 시린지를 수직으로 세워 공기가 바늘 끝으로 모이게 한 뒤 배출하여 시린지 내부의 기포를 제거합니다.그 다음 시린지를 시린지 지지 튜브에 고정합니다. 이제 부피를 1.0 µL로 설정하십시오. 마이크로 어플리케이터의 마이크로프로세서 제어 장치에서 각 액적에 대해, 먼저 제어 장치를 보정하여 정확한 부피가 분주되는지 확인하십시오. 액적이 분주되는 속도는 0에서 9까지의 단계로 설정할 수 있습니다.일반적으로 0에서 1 사이의 범위를 사용합니다. 풋 스위치를 눌러 용액이 적절하게 분사되는지 확인하십시오. 용액이 너무 많이 분사되거나 분사 속도가 너무 느린 경우, 적절한 양의 용액이 정확한 속도로 도포될 때까지 부피 및 속도 설정을 조정할 수 있습니다.이제 H VNS 감염을 위한 주입을 시작하겠습니다. 일반적으로 5령 초기 유충에 주입하는데, 후기 령의 더 큰 크기가 주입 과정을 용이하게 하기 때문입니다. 바늘 끝을 가슴다리 중 하나의 발바닥(plana)을 통해 체강 내로 삽입하십시오.참고로, 바늘 끝이 전흉절에 삽입될 때 유충의 몸 위치가 변하므로, 장과 체벽이 손상되지 않도록 주의하십시오. 이제 풋 스위치를 네 번 눌러 4 µL의 바이러스 용액을 혈강으로 주입합니다. 주입이 완료되면 모든 유충을 28 °C 인큐베이터로 옮깁니다. 죽은 유충이 있는지 자주 확인하고, 생존한 유충이 충분한 먹이를 섭취할 수 있는지 확인하십시오.종령 유충은 주입으로 인한 큐티클 손상으로 사망하지는 않지만, 세균 감염으로 인한 장 손상이 발생할 수 있으므로 주입 24시간 후에 유충 상태를 확인해야 합니다. 이러한 조기 사망 사례는 데이터 분석에서 제외되어야 합니다. 치사 농도 생물 검정을 위해 버톤 바이러스(butted virus)를 이용한 마이크로 어플리케이터 보조 생물 검정을 수행하는 경우, 생물 검정은 서로 다른 시기에 3~4회 반복해서 실시해야 합니다.각 바이러스 또는 대조군 처리당 용량별로 30마리의 개체를 사용하십시오. polo 또는 SAS와 같은 적절한 확률 분석 프로그램을 사용하여 LC₅₀ 값, 95% 신뢰 구간 및 적절한 통계치를 계산하십시오. 이 생물학적 분석법은 일정 용량의 바이러스를 접종한 후의 ST₅₀ 생존 시간 값을 결정하는 데에도 사용할 수 있습니다.이 사례에서는 4~8시간마다 유충의 사망률을 측정하며, 더 빈번한 관찰을 수행합니다. 사망률이 높을 경우, S-Plus 또는 SAS 프로그램을 이용한 Kaplan-Meyer 추정법을 통해 95% 신뢰 구간 내의 중앙 생존 시간을 계산합니다. 이제 Harran이 부토바이러스(butted virus)를 이용한 마이크로 어플리케이터 보조 생물검정법을 보여드렸습니다.분석 방법을 보여드리겠습니다. 다면체(polyhedra)를 사용한 방법으로, 감염 시점이 매우 중요한 경우 다면체를 곤충의 장으로 직접 경구 접종합니다. 예를 들어, 바이러스가 곤충 내에서 어떻게 확산되는지 모니터링할 때 이 분석법을 사용합니다. 이 분석을 시작하려면 다면체를 글리세린과 물의 3:2 중성 부력 용액에 10~300 농도로 현탁시킵니다.예를 들어, 4령 유충의 생존율을 높이기 위해 Polyhedra를 사용할 수 있습니다. 그런 다음, 이 용액을 32게이지 뭉툭한 팁 바늘이 장착된 1 CC 플라스틱 또는 유리 투베르쿨린 주사기에 충전합니다. 현미경으로 관찰하며 주사기를 마이크로 어플리케이터의 지지 튜브 위에 놓습니다.4령 또는 5령의 star larva를 잡고, 바늘을 입을 통해 중장의 앞부분으로 삽입한 다음 polyhedra를 주입합니다. 이 기술은 어느 정도의 숙련도가 필요합니다. 우선, 장갑을 낀 상태에서 유충을 찌그러뜨리지 않고 잡는 것이 까다로울 수 있습니다.둘째, 입 부분을 지나 바늘을 삽입하는 데에는 어느 정도의 연습이 필요합니다. 약 30마리의 유충에 PBS를 접종하며 연습하는 것을 권장합니다. 만약 실수로 장을 천자하게 되면, 유충이 매우 빠르게 멜라닌화되어 검게 변하므로 쉽게 확인할 수 있습니다.마이크로 어플리케이터를 이용한 경구 접종은 정확한 감염 시간을 제공하므로, 바이러스가 곤충 내에서 어떻게 확산되는지를 결정하는 데 감염 시간이 중요한 실험에 이 방법이 가장 유용합니다. 예를 들어, 베타 갈락토시다아제(beta galactosidase)를 발현하는 바이러스를 유충에 경구 접종한 후, 다양한 시점에서 해부하여 어떤 조직이 감염되는지 확인할 수 있습니다. 여기서는 마이크로 어플리케이터를 이용한 두 가지 감염 방법을 보여드리겠습니다. 첫 번째는 바이러스를 전흉다리(proleg)를 통해 직접 접종하는 방법으로, 이를 통해 장의 생리적 특성을 배제하고 관심 있는 바이러스의 치사율과 치사 시간을 평가할 수 있습니다.두 번째 기술은 다면체(polyhedra)를 사용하여 중장으로 직접 접종하는 것입니다. 이 방법을 통해 중장에 매우 정밀한 용량을 직접 전달할 수 있으며, 사건의 발생 타이밍을 매우 정밀하게 제어할 수 있습니다. 그 후 바이러스의 치사율 및 기타 표현형 또한 연구할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때, baula 바이러스가 처리된 사체 유충은 일반적으로 취약하며 쉽게 파열되어 바이러스를 방출할 수 있다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 따라서 작업 표면을 멸균하고, 오염된 장갑과 일회용 재료를 적절한 방식으로 폐기하여 오염을 방지하십시오. 이것으로 모든 과정을 마칩니다.시청해 주셔서 감사합니다. 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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이 비디오에서는, 우리는 insecticidal 효율성을 결정하기 위해 baculovirus와 lepidopteran 유충의 경구 감염 기법을 보여줍니다.

Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 구강 감염 프로토콜

방법은의 hemocoel에 entomopathogenic 박테리아의 직접 분사을 이용하여 여기에서...

의 양육 및 분사<em&gt; Manduca sexta</em박테리아 독성을 평가하기&gt; 애벌레

이 비디오는 큰밀랍나방인 Galleria mellonella의 유충에서 Mycobacterium bovis 감염 모델을 확립하는 방법을 보여줍니다. Mycobacterium bovis BCG의 생물 발광 균주를 유충의 혈림프에 주입하여 감염을 확립하고, 감염 진행 상황을 연구하기 위해 미리 정의된 간격으로 생물 발광을 측정합니다.

곤충 유충에서 세균 감염 모델을 확립하는 기술

이 비디오는 Bacillus Calmette-Guérin, BCG, 럭스에 감염된 곤충 유충을 사용하여 생체 내 박테리아 부담을 측정하는 방법을 보여줍니다. 이 프로세스에는 유충 균질화, 루시페라제 기질 처리, 박테리아 부담과 상관관계가 있는 상대적 광 단위를 결정하기 위한 생물 발광 측정이 포함됩니다.

곤충 유충에서 루시페라아제를 발현하는 박테리아의 생체 내 부담 측정(Measurement of the In vivo Burden of Bacteria Expressing Luciferase in an Insect Larva)

지중해초파리(medfly) Ceratitis capitata(Diptera: Tephritidae)는 전 세계 농업 해충입니다. 이 식물의 생물학에 대한 깊은 이해는 메드플라이 개체군을 통제하여 경제적 영향을 줄이는 데 중요합니다. 배아 미세주입(embryo microinjection)은 이 종에서 생식세포 형질전환(germ-line transformation)과 역유전학(reverse genetics) 연구를 모두 가능하게 하는 근본적인 도구입니다.

세계적인 농업 해충 곤충의 배아 미세 주입을 통해 핵산 배달,<em&gt; Ceratitis의 capitata</em

이 프로토콜 열 충격 유발 단백질 식 시스템 (pDHsp/V5-그 의/sf9 셀 시스템), 외국 단백질을 표현 하거나 안티 apoptotic 활동의 잠재적인 외국 단백질 및 그들의 잘린 아미노 평가에 사용 될 수 있는 설명 곤충 세포에서 산입니다.

과도 식의 외국 유전자 단백질 기능 분석 결과 대 한 곤충 세포 (sf9)

이 프로토콜에서 잠재 Sf9 세포로 잠재 플라스 미드의 과도 transfection에 의해 생산 이며 혈 청 무료 현 탁 액 문화에서 증폭. 상쾌한 덤플링 친화성 크로마토그래피에 의해 순화 하 고 ultracentrifugation에 의해 더 집중. 이 프로토콜은 생산 및 유전자 치료 응용 프로그램에 대 한 잠재의 정화에 대 한 유용 합니다.

생산 및 유전자 치료 응용 프로그램에 대 한 잠재의 정화

여기, 우리 제시 집 플라이 carboxylesterase 단백질에서 생체 외에서 잠재 중재 곤충 세포 표현 시스템으로 생산 하 고 나중 기능 metabolizing permethrin에 그들의 역할을, 특성화를 프로토콜 pyrethroid 부여 셀 기반 MTT 분석 결과 및 체 외에서 대사 연구를 실시 하 여 저항.

살충제 내성 집 파리, 파리 자리 부채 에 Carboxylesterases의 기능 특성

여기, 선물이 곤충 세포 및 잠재 단백질 식 시스템 단백질 결정 화에 대 한 분 비 하는 식물 단백질의 대량 생산에 활용에 대 한 프로토콜. 잠재 식 벡터 GP67 또는 곤충 hemolin 신호 펩 티 드 식물 곤충 세포에서 단백질 분 비 식에 대 한 수정 되었습니다.

식물 단백질 곤충 세포에서 분 비 생산 잠재 식 벡터를 수정

바쿨로바이러스 발현 벡터 시스템(BEVS)은 생화학, 생물리, 구조 연구에 사용되는 단백질 아르기닌 메틸 트랜스퍼라제(PRMT)의 발현 선별 및 생산을 위한 견고한 플랫폼이다. 밀리그램 수량의 물질은 대부분의 PRMT 및 진핵 발현 플랫폼을 요구하는 관심있는 다른 단백질을 위해 생성될 수 있다.

바쿨로바이러스 발현 벡터 시스템을 이용한 재조합 PRMT 단백질 생산

인간 막 수송체의 구조 및 생화학적 연구에는 밀리그램 단위의 안정적이고 온전하며 균질한 단백질이 필요합니다. 여기서는 코돈 최적화 유전자를 사용하여 인간 용질 운반체 수송체를 스크리닝, 발현 및 정제하는 확장 가능한 방법을 설명합니다.

구조 및 생화학 연구를 위한 Human Solute Carriers의 High-Throughput Expression and Purification of Human Solute Carriers for Structural and Biochemical Studies(구조 및 생화학 연구를 위한 인간 용질 담체의 고처리량 발현 및 정제)

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Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 Microapplicator를 이용한 감염 프로토콜

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