Name: Xenopus laevis 에그의 작성과 분류는 압축을 풉니다 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-27T12:38:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: 배우세요 Xenopus laevis 알 추출물을 세포질과 경막 분획으로 분리하는 방법을. 이 기술은 핵 조립 및 DNA 복제와 같은 세포 과정을 시험관 내에서 재구성하는 데 필수적입니다.

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이 실험 방법에 대한 전체 텍스트 프로토콜에서 사용할 수 있습니다 <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract ]">셀 생물학의 현재 프로토콜</a> .

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xenopus laevis 에그의 작성과 분류는 압축을 풉니다

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

원유 및 fractionated Xenopus 달걀 추출물은 형태학의 및 생화 학적 분석을위한 세포 프로세스를 reconstituting을위한 재료를 제공하는 데 사용할 수 있습니다. 계란 용해 및 차등 원심 분리가에 차례로 fractionated 추출물과 가벼운 막 준비를 준비하는 데 사용되는 원유 추출을 준비하는 데 사용됩니다.

Xenopus laevis 에그의 작성과 분류는 압축을 풉니다

정제되지 않은 Xenopus 난자 추출물 및 분획된 추출물은 형태학적 및 생화학적 분석을 위한 세포 과정의 재구성에 필요한 성분들을 제공하는 데 사용될 수 있습니다.

이전 영상에서 우리는 성숙한 XUS labis로부터 알을 얻고 젤리를 제거하는 방법을 시연했습니다. 이 알에서 추출한 암컷 조추출물은 핵 조립, 핵 단백질 수송 및 DNA 복제와 같은 세포 내 사건의 인비트로 재구성을 위한 세포질 및 세포소기관 물질의 유용한 공급원이 됩니다. 안녕하세요, 제 이름은 Marie Cross이며, 조지아주 애틀랜타에 위치한 Emory 대학교 세포생물학과의 Dr. Maureen Power 연구실 대학원생입니다.오늘은 난자 추출물을 가용성 세포질 분획과 경쇄 막 분획으로 분획하는 방법을 보여드리겠습니다. 이 절차는 난자 용해, 조추출물 수집, 조난자 추출물 분획, 그리고 세포질 추출물 및 난자 추출물의 경쇄 막 분획 수집 단계로 구성됩니다. 그럼 시작하겠습니다.먼저 난자를 용해하고 용해 전의 조추출물을 수집하는 것부터 시작하겠습니다. 파스퇴르 피펫을 부러뜨린 후 부러진 끝부분을 피펫 벌브에 조심스럽게 삽입하여 이송 피펫을 만들어야 합니다. 난자를 15 ml 폴리프로필렌 튜브로 옮깁니다.알의 용해를 방지하기 위해 광구 피펫(wide mouth pipette)이 필요합니다. 다음으로, 알을 30초 동안 원심분리합니다. 임상 원심분리기를 사용하여 400 ×g에서 원심분리한 후, 펠렛화된 알 상층의 알 버퍼를 흡입하여 제거합니다.충전된 난자의 부피를 확인하십시오. 이 부피를 기준으로 aprotinin 및 leptin 용액을 먼저 첨가한 다음, cytokine B를 난자 위에 직접 첨가하여 최종 농도가 5 µg/mL가 되도록 5 mg/mL 스톡 용액을 사용하십시오. 또한 10 mg/mL 스톡 용액을 사용하여 cyclo heide를 최종 농도 50 µg/mL가 되도록 첨가하십시오. Aprotinin과 leptin은 프로테아제(protease)를 억제합니다.Cytokine B는 액틴 중합을 억제하고 cyclo heide는 단백질 합성을 억제합니다. 이제 4°C에서 Sova HB 4 swinging bucket rotor를 사용하여 12,000 Gs로 15분간 원심분리하여 알을 용해하십시오. 용해된 알은 세 개의 층으로 분리됩니다.상단에는 노란색 지질층, 중간에는 조추출물, 그리고 하단에는 어두운 색의 펠릿이 형성됩니다. 3 mL 주사기에 장착된 18게이지 바늘로 폴리프로필렌 튜브의 측면을 찔러 조추출물을 제거하십시오. 조추출물에는 핵 및 세포질 성분, ER 유래 경량 막, 핵막, 리보솜, 그리고 미

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Xenopus의 달걀은 그대로, lysed, 및 / 또는 fractionated이 실험의 다양한 유용합니다 laevis. 이 프로토콜은, 달걀 누워을​​ 유도 달걀을 수집하고 dejelly, 및 손상된 계란을 제거하는 달걀을 정렬하는 방법을 보여줍니다.

Xenopus laevis 여성의 난자를 구하기

핵 막 어셈블리는 세포 분열주기에서 중요한 단계이며이 과정은 Xenopus의 정자 염색질, cytosol, 가벼운 멤브레인 분수를 결합하여 시험관에서 복제하실 수 있습니다. 완료 핵은 기공 단지와 함께 핵 세포막을 포함하여 형성하고, 이러한 재구성 핵 정상 핵 프로세스의 수입니다.

Fractionated Xenopus 에그 추출물을 사용하여 체외 핵 어셈블리

Xenopus 배아 상피 조직은 상피 morphogenesis 동안 극성 개발 및 형태의 변화와 같은 세포 행위를 연구하는 이상적인 모델 시스템입니다. 고정 샘플 전통 조직학 점점 라이브 셀 이미징 공촛점에 의해 보완되고있다. 여기 개구리 조직을 분리 및 라이브 세포 공촛점 현미경을 사용하여 라이브 상피 세포 및 cytoskeleton을 시각화하는 방법을 보여줍니다.

라이브 셀 이미징 및 배아 상피 세포의 정량 분석 Xenopus laevis</em

이 비디오 프로토콜은 유전자 변형을 생성하는 방법을...

트렌스 제닉 생산 Xenopus laevis 제한 효소 중재 통합 및 핵 이식에 의해

Xenopus 계란 추출물은 DNA 손상 검사 점을 조사 할 수있는 유용한 모델 시스템입니다. 이 프로토콜은 Xenopus의 알 추출물과 DNA 손상 검사 점 유도 시약의 준비입니다. 이 기술은 DNA 손상 검사 점 신호의 연구에서 DNA 손상 방식의 다양한에 적용 할 수 있습니다.

사용하여 DNA의 손상 세키의 연구<em&gt; Xenopus</em&gt; 달걀 압축을 풉니 다

우리는 살려서 살짝 익히고의 컬렉션을...

생산<em&gt; Xenopus의 tropicalis</em&gt; 달걀은 미세 소관 관련 RNA를 식별하기 위해 추출

방법은 Xenopus의 계란 추출물 및 단백질 분해의 저분자 변조기에 대한 고 처리량 스크리닝을 위해 그 적응 방사성 표지와 루시퍼 라제 융합 단백질을 이용하여 단백질 분해 분석에 대해 설명한다.

β-catenin의 저하의 재구성<em&gt; Xenopus의</em&gt; 계란 추출

고도로 압축된 유사분열 염색질의 축합의 분자 메커니즘은 잘못 정의되어 있습니다. 당사는 HeLa 세포와 Xenopus laevis 난자 추출물에서 분리한 유사분열 염색질 클러스터를 기반으로 in vitro에서 응축 과정을 충실하게 재구성하는 cell-free 분석을 제시합니다.

셀 무료 분석은 유사 분열의 끝에서 염색질 Decondensation을 공부하기

세포 및 세포 내 스케일링의 메커니즘은 여전히 파악하기 어렵습니다. Xenopus 배아 추출물의 사용은 세포 기관 크기 조절의 메커니즘을 밝히기 위해 점점 더 보편화되고 있습니다. 이 방법은 배아 추출물 준비와 핵 크기 조절 메커니즘을 확인할 수 있는 새로운 핵 스케일링 분석을 설명합니다.

사용하여 셀 - 무료 분석<em&gt; Xenopus의의 laevis의</em&gt; 배아 핵 크기 규제의 메커니즘을 연구하기 위해 추출

달걀 추출 물 물에서 기름 microemulsions에서 Xenopus laevis 의 캡슐화 하 여 방법을 생체 외에서 자기 지속적인된 mitotic 진동 단일 세포 수준에서의 세대를 위한 선물이.

Microemulsions 셀 무료 Xenopus 달걀 추출 물에서 세포 주기 진동의 재구성

우리는 Xenopus laevis 알에서 희석되지 않은 세포질 추출물의 제조 및 라이브 이미징 방법을 설명합니다.

제노푸스 라에비스 동적 세포질 조직을 시각화하기 위한 계란 추출물 준비 및 라이브 이미징 방법

배우세요 Xenopus laevis 알 추출물을 세포질과 경막 분획으로 분리하는 방법을. 이 기술은 핵 조립 및 DNA 복제와 같은 세포 과정을 시험관 내에서 재구성하는 데 필수적입니다.

Xenopus laevis 에그의 작성과 분류는 압축을 풉니다

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