Name: 체외에서 분리된 뉴런을 조작에 대한 레이저 족집게를 사용하여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 45 s
Description: 배우세요 체외 배양 뉴런을 레이저 족집게로 조작하는 방법을. 광학 트랩을 이용해 세포를 포착하고 이동시키는 기술로 신경과학 연구에 활용할 수 있습니다.

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연구는 NIH 보조금 EY012031과 EY0182175 및 FM 커비 재단에 의해 지원되었다.

문화 고립된 세포를 조작을위한 광학 핀셋 광학 핀셋의 트래핑 세력은 빛의 운동량 (.; Ashkin 외, 1986 Ashkin, 1991)에서 생성됩니다. 이러한 세력 쉽게 정지 세포를 함정에 있지만, 그들은 표면에 부착 세포를 이동할 수 없습니다. 따라서 세포가 갇혀있는 시점에서 문화 요리에 부착을 줄이기 위해, coverslip는 구충제 세포와 폴리 - 2 - hydroxyethylmethacrylate (폴리 - HEMA) (시그마 화학 (주), 세인트 루이스, MO), 독성 화합물로 코팅되어 속성은 이전에 내피 세포 (Folkman과 Moscona, 1978)에 접착 연구에 대한 고용. 폴리 - HEMA의 문화 요리 중 하나가 절반을 다루고 있지만, 다른 반쪽은 세포의 성장을 지원하는 기판과 코팅입니다. 저희 연구실에서는 샐 - 1 culturing의 샐러맨더 망막 세포에 대한 기판으로 사용됩니다. 살 - 1 fabricating 및 폴리 - HEMA 코팅 요리가 아래에 설명하는 절차 : 문화 요리 제작 <ol><li> 산이 클린 coverglasses (# 1 VWR 과학 주식 회사, 미디어, PA). 이 coverglass은 레이저를 초점에 필요한 높은 수치 조리개 목적에 필요한 단지 0.1mm의 두께의에 대한 선정되었습니다. </li><li> 셀 repellant 영역을 만들려면, 실온에서 하룻밤 95 % 에탄올의 1ml 20 MG 폴리 - HEMA를 (시그마 화학 (주), 세인트 루이스, MO) 디졸브. 가능한 한,이 솔루션은 준비 1 개월 이내에 사용해야합니다. </li><li> 같은 두건으로 먼지없는 환경에서 거의 수직 위치에서 coverglasses을 프로프. </li><li> 200μl micropipette의 플라스틱 팁에서 coverglass 상단의 폴리 - HEMA 솔루션 중 하나 또는 두 방울을 넣으십시오. 방울 (각 50 - 100μl 정도) coverglass의 절반으로 제한해야합니다. 가파른 경사면은 액체가 폴리 - HEMA의 얇은 코팅도를 제공하고, 아래로 coverglass의 표면 아래로 흐르는 보장합니다. 폴리 - HEMA 코팅 coverglasses는 실온에서 30~60분 위해 후드의 건조하도록 허용합니다. </li><li> 가장자리에 가까운 훌륭한 팁 펜으로 coverglass의 폴리 - HEMA 측면을 표시합니다. </li><li> 35mm 문화 접시의 바닥에 1cm의 구멍을 드릴. </li><li> 접착제 폴리 - HEMA 코팅 쪽이 접시의 안쪽 방향으로 얼굴을 너무 Sylgard 184 (다우 코닝 (주), 미들랜드, MI)와 문화 요리의 하단에 폴리 - HEMA 코팅 coverglass. 폴리 - HEMA 코팅의 가장자리를 확인은 구멍의 중심을 실행합니다. 요리 먼지없는 환경에서 실온에서 1-3일 위해 건조하실 수 있습니다. </li><li> 폴리 - HEMA 코팅의 가장자리 아래의 다이아몬드 팁 펜으로 coverglass의 외부에 라인을 스크래치. 그렇다면, 그것 떨어져 약 2mm에 직각에 두 줄을 건너 스크래치. 교차로의 두 지점이 참조 또는 현미경 단계에 문화 접시 같은 방향을 복제에 사용되는 fiducial 포인트 역할을합니다. </li><li> 야간 자외선 아래에서 요리를 소독. </li><li> 망막 세포 점막 (넉넉한 박사 피터 MacLeish, 의학 모어 하우스 학교에 의해 제공에 대해 제기된 마우스 방지 샐러맨더 항체를 포함하는 문화 요리의 휴대 자기편 반 코트 샐 - 1 이외의 폴리 - HEMA 절반을 만들려면 , 아틀란타, GA;. MacLeish 외 (1983)를 ​​참조). 첫째, 외투 약 100μl 0.1의 MG / ML 살균 염소 안티 - 마우스 IgG 항체 (Boehringer 만하임 공사, 인디애나 폴리스)와 살 - 1 면을, 폴리 - HEMA쪽으로을 통해 액체를 누설하지 않도록주의한다. 세 시간 동안 떠나 다음, 그것을 제거합니다. 한 두 번, 다음 접시의 폴리 - HEMA 측면에 액체를 누설하지 돌보는, 100μl 샐 - 1 뜨는 배치 살균 링어의 솔루션과 같은 영역을 씻으십시오. 첫 번째 항체는 살 - 1 알려진 농도에 코팅되어 보장합니다. </li><li> 살 - 1 하룻밤과 요리를 품다. </li><li> 살 - 1 항체 솔루션을 제거하고 멸균 링어의 솔루션으로 영역을 씻어. 전지 도금으로 직전 접시 2 ML 매체를 소개합니다. </li></ol> 수륙 양용 링어의 솔루션, 혈청없는 양용 매체 및 효소 소화에 대한 링어의 솔루션의 구성은 MacLeish와 타운스 - 앤더슨 (1988)과 멘델 외에서 발견됩니다. (1993). 세포 배양의 준비 이 동영상에 사용되는 세포에서 파생되었다 가벼운 적응, 성인, 수중 상 호랑이 도롱뇽은 (Ambystoma tigrinum), 길이 17~22센티미터 측정 (찰스 설리반 주식 회사, 내쉬빌, TN), 5 유지 ° C를에 12 H : 12 H 빛을 어두운주기. 프로토콜은 기관 애니멀 케어 승인 및 국립 보건원의 지침에 따라 엄격 의약과 뉴저지의 치과 대학위원회 (IACUC)를 사용했다. 망막 세포 문화를 준비하기위한 절차 Nachman - Clewner와 타운스 - 앤더슨 (1996)에 의해 설명 다음과 같이 있습니다 : <ol><li> 동물을 참살하고 속. 눈을 제거하고 각막과 홍채를 해부하다. 망막은 세안 컵 안에 약간 분리해야합니다. 망막 밑에 곡선 포셉를 배치함으로써, 망막을 특종. 렌즈가이 단계에있는 망막에 연결된 경우 그것은 중요하지 않습니다. </li><li> 40 분 대한 샐러맨더 링어의 솔루션에 14 U / ML papain (워싱턴, 프리 홀드, NJ)에서 망막을 소화. </li><li> 사용하기 전에, papain 링어의 솔루션은 30 분 대한 95% O 5분의 2 %의 CO 2 가스로 부풀어 오른해야합니다. 다음, 0.22 미크론 필터 (Millipore, Carrigtwohill, 아일랜드)를 통해 통과 소독. </li><li> 무균 샐러맨더 링어의 솔루션을 세 번있는 망막을 씻어. </li><li> 링어의 솔루션에서 렌즈를 제거하고 부드럽게 세포 현탁액을 양보하는 피펫을 보어 3mm로 망막 조직을 씹다. </li></ol> 절연 뉴런의 레이저 핀셋 조작 <ol><li> 무대에 기준점과 함께 접시에 표시를 정렬하여 요리를 orienting, 현미경 단계에 문화 접시를 놓습니다. 컴퓨터에 fiducial 지점의 좌표를 저장합니다. </li><li> 플레이트 살 - 1 모두에 세포와 요리의 폴리 - HEMA 반쪽. </li><li> 세포는 항체 기판에 연결하는 요리의 점착 성의 측면에 전지 오래되는, 약 20 분에 대한 해결하실 수 있습니다. </li><li> 접시의 살 - 1 점착 성의 측면에서 셀을 선택합니다. x와 y 단계의 세포에 가까운 위치의 좌표를 표시합니다. 우리의 경우에는, 요점은 선택된 셀의 기본 dendrites에서 약 10μm했다. 컴퓨터에 좌표를 저장합니다. </li><li> 접시의 폴리 - HEMA 측면에 우리 사건 photoreceptor에 두 번째 신경 세포를, 선택하고 그것을 함정에 레이저 트위터 도구를 사용하십시오. 트래핑은 전력 수준의 넓은 범위에서 얻을 수 있습니다. 그러나, 우리는 10 % 세포와 함께 트래핑 파편을 피하기 위해 충분히 낮은 -20 %에서 레이저의 전원을 설정하지만, 매체를 통해 세포를 전송하기에 충분한. </li><li> 트랩에서 셀을 누른 상태에서 세포가 잘 문화 접시의 표면 위 및 연결된 뉴런 위에 있도록 무대를 낮춥니다. 살 - 1 측면에 이전에 저장한 x와 y 좌표로 세포를 가지고 컴퓨터를 제어에서 단계를 이동합니다. 무대의 움직임은 8 20μm / s의 설정했지만, 최대 속도는 경험적으로 결정하여야한다. 살 - 1 면에 대상 지점에 도착, 접시의 표면에 갇혀있는 셀을 가져 무대를 올립니다. 셀 배치 몇 미크론의 정밀도로 만들 수 있습니다. 세포가 살 - 1 기판을 준수하도록 허용합니다. </li><li> 쌍 형성 전후 쌍의 두 세포의 디지털 이미지를 취득하는 것은 유용한 기록을 제공합니다. </li><li> 인큐베이터에있는 셀 쌍을 유지합니다. 샐러맨더 세포 들어, 10 humidified 챔버에서 요리를 배치 ° C. 세포 영상 시간 경과에 의해 모니터링하고 필요한 세포 생물 학적 기법과 함께 사용할 수 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Ashkin, A., Dziedzic, J. M., Bjorkholm, J. E., Chu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+of+a+Single-Beam+Gradient+Force+Optical+Trap+for+Dielectric+Particles%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Observation of a Single-Beam Gradient Force Optical Trap for Dielectric Particles.</a> Opt. Lett. 11, 288-290 (1986).</li>
<li>Clarke, R. J., Hoegnason, K., Brimacombe, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cone+and+rod+cells+have+different+target+preferences+in+vitro+as+revealed+by+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vision%22%5BJournal%5D)">Cone and rod cells have different target preferences in vitro as revealed by optical tweezers.</a> Mol. Vision. 14, 706-720 (2008).</li>
<li>Folkman, J., Moscona, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+cell+shape+in+growth+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Role of cell shape in growth control.</a> Nature. 273, 345-349 (1978).</li>
<li>Liu, Y., Cheng, D. K., Soneck, G. J., Berns, M. W., Chapman, C. F., Tromberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+localized+cell+heating+induced+by+infrared+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Evidence of localized cell heating induced by infrared optical tweezers.</a> Biophysical Journal. 68, 2137-2144 (1995).</li>
<li>MacLeish, P. R., Barnstable, C. J., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monoclonal+antibody+as+a+substrate+for+mature+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Use of a monoclonal antibody as a substrate for mature neurons in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80, 7014-7018 (1983).</li>
<li>MacLeish, P. R., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+synapse+formation+among+major+classes+of+adult+salamander+retinal+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Growth and synapse formation among major classes of adult salamander retinal neurons in vitro.</a> Neuron. 1, 751-760 (1988).</li>
<li>Mandell, J. W., MacLeish, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Townes-Anderson+E.+Process+outgrowth+and+synaptic+varicosity+formation+by+adult+photoreceptors+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Townes-Anderson E. Process outgrowth and synaptic varicosity formation by adult photoreceptors in vitro.</a> J. Neurosci. 13, 3533-3548 (1993).</li>
<li>Nachman-Clewner, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injury-induced+remodelling+and+regeneration+of+the+ribbon+presynaptic+terminal+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Injury-induced remodelling and regeneration of the ribbon presynaptic terminal in vitro.</a> J. Neurocytol. 25, 597-613 (1996).</li>
<li>Townes-Anderson, E., St Jules, R. S., Sherry, D. M., Lichtenberger, J., Hassanain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micromanipulation+of+retinal+neurons+by+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis.%22%5BJournal%5D)">Micromanipulation of retinal neurons by optical tweezers.</a> Mol. Vis.. 4, (1998).</li>
</ol>

라이트 추진력을 가지고 있으며, 그것이 세포를 통해 전달과 같은 광선이 굴절 때 힘이 추진력의 방향을 변경해야합니다. 때문에 운동량 보존의 법칙의 반대 방향으로 포스가 차례로, 휴대폰으로 다시 반응해야합니다. Ashkin (1991)은 현미경의 목적 렌즈의 초점 레이저 빔을에 의해 생성되는 힘은 초점의 중심 방향으로 셀 이동합니다 것으로 나타났다. 레이저 광선의 힘을 몇 piconewtons를 생성하더라도,이 힘을는 매체를 통해 세포를 해낼 수있다는 것을 충분하다. 제대로 물에 의해 흡수되는 적외선 근처의 파장은 셀 (리우 외 1995)에 손상을 방지하는 데 사용됩니다. 저희 연구실에서 사용되는 레이저 트위터 워크 스테이션은 (셀 로봇 주식 회사, 알버커키 NM) 980nm 파장의 1 승, 지속적인 웨이브 다이오드 레이저를 사용합니다. 레이저 빛은 현미경과 같은 초점 비행기에서 빔을 초점을 맞춘 높은 수치 구경의 40x 기름 침지 계획 neofluor 목표 렌즈 (NA1.3) (칼 자이스 혈구 주식 회사)를 통해 세포로 전송됩니다. 레이저 핀셋 제어...

<table><tbody><tr><td>25mm 원형 No.1 커버글라스</td><td>VWR international</td><td>48380 080</td><td></td></tr><tr><td>poly-2-hydroxyethylmethacrylate (poly-HEMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-3932</td><td>95% ethanol에 용해</td></tr><tr><td>Goat anti-mouse IgG 항체</td><td>Chemicon International</td><td>AP181</td><td>1mg/1ml, 사용 시 10배 희석</td></tr><tr><td>mouse anti-salamander 항체를 포함하는 Sal-1 상층액</td><td>Dr. Peter MacLeish 제공</td><td></td><td>Dr. Peter MacLeish, Morehouse School of Medicine, Atlanta, GA</td></tr><tr><td>3 mm bore 5ml pyrex 일회용 피펫</td><td>Corning</td><td>7078A-5</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 접시 35mm x 10mm</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 키트</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>광학 집게-마이크로툴 또는 레이저 집게</td><td>Cell Robotics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>980nm 파장의 1 W 연속파 다이오드 레이저</td><td>Cell Robotics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiovert 100 도립 광학 현미경</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>40x 오일 침강 plan neofluor 대물렌즈</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td>개구수 (N.A. 1.3)</td></tr><tr><td>흑백 CCD 카메라</td><td>Sony Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>소프트웨어가 포함된 컴퓨터 및 조이스틱</td><td>Cell Robotics Inc.</td><td></td><td>전동 스테이지 제어용</td></tr></tbody></table>

체외에서 분리된 뉴런을 조작에 대한 레이저 족집게를 사용하여

Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro

본 논문 및 비디오에서 우리는 체외에서 성인 망막 뉴런의 재생 세포 프로세스의 타겟팅 설정을 연구하기 위해 실험실에서 사용되는 프로토콜을 설명합니다. 망막 세포 문화를 준비 절차, 특히 레이저 핀셋 사용하기 위해 만든 요리에 고립 망막 세포의 도금과 절개, 소화 및 망막의 분쇄 및 최종 함께 시작합니다. 이들 요리는 세포 접착제의 절반과 세포 repellant 절반으로 나누어집니다. 세포 접착제 사이드는 우리의 세포가 성장하는시 기판을 제공 살 - 1 항체의 레이어로 코팅됩니다. 기타 접착제 기판은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다. 셀 repellant 사이드는 폴리 - HEMA의 얇은 레이어로 코팅됩니다. 접시의 폴리 - HEMA 측면에 도금 세포가 레이저 핀셋과 함께 함정에 수송 그리고 쌍을 만들기 위해 살 - 1 면에 세포에 인접 배치됩니다. 어떤 크기의 셀 그룹의 형성이 기술이 가능해야합니다. &quot;레이저 핀셋 제어 미세 조작은&quot;조사가 세포가 이동을 선택할 수있다는 것을 의미하고, 세포 사이의 원하는 거리는 표준화 수 있습니다. 레이저 빔은 문화 요리의 투명한 표면을 통해 이뤄지 때문에, 세포의 선택과 게재는 동봉된, 무균 환경에서 수행하고 있습니다. 세포 영상 시간 경과에 의해 모니터링하고 필요한 세포 생물 학적 기법과 함께 사용할 수 있습니다. 이 기술은 세포 - 세포 상호 작용의 조사를하는 데 도움이 될 수 있습니다.

이 동영상은 체외에서 레이저 핀셋을 사용하여 교양 뉴런의 조작을 설명합니다.

본 논문과 영상에서는 성체 ...의 재생 중인 세포 돌기의 표적 선호도를 연구하기 위해 본 실험실에서 사용하는 프로토콜을 설명합니다.

Ashkin은 레이저 트위저 또는 광학 트랩이 미세한 크기의 살아있는 생물체를 조작하는 강력한 도구임을 처음으로 입증했습니다. 본 영상에서는 이 기술을 적용하여 뉴런을 포착하고 이동시키는 방법을 보여드리겠습니다. 이것이 광학 트위저 워크스테이션입니다.초록색 화살표는 현미경 광학계를 통과하는 레이저 빔의 경로를 나타냅니다. 현미경 대물렌즈에 의해 집광된 레이저 빔이 세포에 의해 굴절될 때, 광선의 방향을 바꾸는 힘이 세포에 작용하여 세포를 초점 중심으로 이동시킵니다.이는 세포를 배지 너머로 끌어당기기에 충분한 pN(피코뉴턴)의 힘을 생성합니다. 본 영상에서는 디쉬 제작, 망막 세포 준비, 배양 디쉬에 세포 도말, 레이저 집게 조작 및 세포 성장 관찰에 대해 다룹니다. 세포는 유리에 부착되므로, 집게로 세포를 쉽게 포획할 수 있도록 세포 부착 방지 영역을 만들어야 했습니다.디쉬의 절반은 세포 반발성 폴리머인 poly hema로 코팅되었습니다. 나머지 절반은 세포 성장을 지원하는 기질인 cell one으로 코팅되었습니다. 먼저, 디쉬의 세포 접착성 측면에서 세포를 식별합니다.그 후 다른 세포를 폴리머 쪽에 포획하여 접착제 쪽으로 운반함으로써 두 세포를 쌍으로 결합시킵니다. 배양 접시를 준비하기 위해, 먼지를 제거하고 멸균 처리된 35 millimeter Polystar 배양 접시를 사용합니다. 먼저, 소형 선반이나 드릴 프레스를 사용하여 바닥에 1 centimeter 크기의 구멍을 뚫습니다.산 세척된 커버 글라스를 준비하여 후드와 같이 먼지가 없는 환경에 똑바로 세워 둡니다. 95% alcohol에 용해된 polyus 용액을 취하여 커버 글라스 상단의 절반 부분에만 몇 방울 떨어뜨립니다. poly hema가 마를 때까지 기다립니다. 커버 글라스의 polyus 처리 면을 표시합니다.배양 접시 바닥의 구멍 주위에 S 가드를 배치합니다. S 가드를 사용하여 커버 글라스를 접시에 접착합니다. 폴리아미드가 안쪽에 위치하도록 하고, 실 가드의 틈새로 누수가 없는지 확인하십시오.커버 글라스를 poly hema 코팅의 가장자리가 디쉬의 중앙을 지나도록 배치합니다. 디쉬를 2~3일 동안 건조시킨 후, 다이아몬드 팁 펜으로 디쉬 바닥에 표시를 긁어 만듭니다. 이 표시는 현미경 스테이지 위에 디쉬를 배치할 때 기준점으로 사용됩니다. 디쉬를 후드 안에 넣고 자외선 램프로 멸균합니다.염소 항-US 항체 용액 한두 방울을 디쉬의 비 폴리우스

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의 레이저 캡처 Microdissection Drosophila 주변 뉴런

C로 생체내 레이저 Axotomy에서 엘레간스

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쥐의 뇌에서 형광 표지된 뉴런 분리

출처: Morsch, M.,   et. al., Triggering cell stress and death Using Conventional UV Laser Confocal Microscopy. J. Vis. 특급. (2017) 이 비디오에서는 형질전환 제브라피시의 개별 뉴런을 정확하게 표적화하고 연구하기 위한 고강도 UV 레이저 절제 기술을 살펴봅니다. 우리는 신경 반응을 준비하고, 고정하고, 시각화하는 방법을 보여주며, 부상과 회복의 세포 역학을 강조합니다.

컨포칼 현미경을 사용한 제브라피시 유충의 선택적 단일 뉴런 레이저 절제

유전학과 광학을 결합 신경 과학 도구의 최근 개발, 공간 및 시간 해상도의 전례없는 수준의 신경 회로의 활동을 제어 할 수 있습니다, "optogenetics"라고. 여기에서 우리는 전두엽 피질과 subicular 피라미드 뉴런의 유전 정의 된 부분 집합의 optogenetic 조작과 생체 녹화에 통합하기위한 프로토콜을 제공합니다.

개별 피라미드 뉴런의 고 충실도 Optogenetic 제어하는​​ 방법<em&gt; 생체 내</em

우리는 부분적으로 축삭의 세포막에 부착 광학적 포획 프로브에서 수행 동시 힘 분광 측정으로 레이저 해부학자로 lesioned 된 축삭의 긴장 방출을 측정 하였다. 개발 된 실험 프로토콜은 문화 기판에 축삭 접착력을 평가합니다.

레이저 유도 축삭 병변 동안 긴장 릴리스의 측정 Piconewton 및 밀리 초 단위의 해상도로 기판에 축삭 접착을 평가하는

인간 neuroprogenitor 세포 (NPC들)은 증식 조건 하에서 확장 하였다. 의 NPC는 neurotrophins과의 조합의 존재에 신경이 풍부한 문화로 분화되었다. 신경 세포 마커는 면역 형광 염색으로 검출되었다. 뉴런의 순수한 인구를 분리하기 위해,의 NPC는 PEN 막 슬라이드에 차별화 된 레이저 캡처 미세 절제를 행 하였다.

문화의 차별화 된 인간 Neuroprogenitor 세포에서 신경 세포의 레이저 캡처 미세 절제

우리는 시험관 내에서 신경 세포 집단을 광자극하기 위해 광유전학적 접근 방식을 사용하여 전뇌 회로의 기능적 지형 및 시냅스 특성을 특성화하는 방법을 설명합니다.

광유전학적으로 표적화된 전뇌 회로의 레이저 스캐닝 광자극

레이저 nanodissection 결합 이광자 이미징은, 세포 내 해상도 중추 신경계 퇴행성 및 재생 공정을 연구하는 유용한 도구이다. 이 프로토콜은, 라벨 이미지 및 생체 내에서 소뇌 피질에서 하나의 등반 섬유를 해부하는 방법을 보여줍니다.

소뇌 축삭의 레이저 Nanosurgery<em&gt; 생체</em

개별 도파민 뉴런의 단리 또는 직접 또는 간접 면역과 복측 피개 영역은 레이저 미세 절제를 캡처하여 설명된다. 적외선 레이저를 이용하여 유리 슬라이드 조직으로부터 단리 및 적외선 및 자외선 레이저의 조합을 이용하여 막 slide에서 파라미터 논의된다.

레이저 캡처 이외에 Microdissection - 개별 도파민 신경 세포의 분리 및 전체 복부 피개 영역의 데모

우리는 체외 준비를 사용하여 뇌의 핵에 선행 성 또는 역행 추적 주사를 통해 신경 세포와 그 프로세스 레이블을하는 기술에 대해 설명합니다. 우리는 내가 N 표시 정확도를 높이기 위해 유리의 형광 표지 된 마우스 돌연변이 및 기본 광학 기기를 복용하여 추적 전기를 체외의 기존 방법을 수정했습니다.

레이저 유도 신경 세포의 추적에서 뇌 외식

배우세요 체외 배양 뉴런을 레이저 족집게로 조작하는 방법을. 광학 트랩을 이용해 세포를 포착하고 이동시키는 기술로 신경과학 연구에 활용할 수 있습니다.

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