향상된 패치 - 클램프 녹음 압력 연마 Pipettes

이 절차는 100배 배율로 연마 필라멘트 근처에 피펫 팁을 배치하는 것으로 시작합니다. 다음으로 공기압과 열을 켭니다. 필라멘트.

피펫 팁이 확장되어 뭉툭한 모양의 팁을 형성합니다. 더 작은 팁 구멍을 얻기 위해 열을 끕니다. 압력을 끄고 다시 가열하십시오.

안녕하세요, 저는 스탠포드 대학교 분자 및 세포 생리학과의 Miriam Goodman 박사 실험실의 Brandon Johnson입니다. 오늘 우리는 압력 연마 패치 피펫에 대한 절차를 보여 드리겠습니다. 우리는 실험실에서 이 절차를 사용하여 이온 채널과 막 패치 및 NC 엘간 뉴런을 연구합니다.

시작하겠습니다. 6-10개의 패치 피펫 세트를 당깁니다. 현지 전문가 또는 시각화된 실험을 통해 프로그래밍 가능한 극성이 있는 패치 피펫과 날카로운 전극을 만드는 방법에 대한 도움을 받으십시오.

절차를 시작하려면 압축된 에어라인 압력을 약 40PS로 설정합니다. 그런 다음 압축된 에어라인을 4방향 제어 밸브에 연결합니다. 긴 길이의 플라스틱 튜브를 4방향 밸브에 연결하고 플라스틱 튜브의 느슨한 끝 부분에 고압 피펫 홀더를 부착합니다. 마이크로 단조 장비를 사용하여 연마를 수행합니다.

우리는 LA Scientific의 Ccpm 2 키트를 사용합니다. 이 장비에는 고압 피펫 홀더, 풋 페달로 제어되는 백금 가열 필라멘트, 100배 동안 10배 길이의 저배율 및 고배율이 장착된 현미경이 있습니다. working distance air objectives는 프로토콜 중에 파이펫 개방을 관찰할 수 있는 것이 중요하기 때문에 이상적입니다.

그런 다음 압력 밸브가 꺼짐 위치에 있는지 확인합니다. 그런 다음 피펫을 피펫 홀더에 넣고 실험실의 안전을 위해 피팅을 손가락으로 단단히 조입니다. 피펫이 피펫 홀더에 단단히 고정되어 있는지 확인하십시오.

그렇지 않으면 공기 압력으로 인해 피펫이 홀더에서 배출됩니다. 선택 단계로, 왁스와 같은 소수성 절연체로 피펫을 코팅하여 커패시턴스를 줄이고 소음 특성을 개선할 수 있습니다. 이제 피펫을 마이크로 포지의 홀더에 놓고 피펫 홀더를 현미경 스테이지에 배치하여 마이크로 포지에서 팁과 연마 필라멘트가 모두 10배의 낮은 전력으로 보이도록 합니다.

팁을 필라멘트에서 약 50미크론 떨어진 곳으로 가져온 다음 고출력 100 대물렌즈로 전환하면 피펫 팁과 연마 필라멘트가 모두 초점이 맞춰지고 시야에 있어야 합니다. 그렇지 않은 경우 필라멘트의 높이를 조정하십시오. 피펫 위치는 조정할 수 없으므로 피펫 팁과 필라멘트는 시야의 반대쪽에 있어야 합니다.

피펫 팁을 필라멘트에 너무 가깝게 배치하지 마십시오. 가열됨에 따라 팽창하여 피펫에 부딪힐 수 있으므로 피펫 팁을 필라멘트에 너무 가깝게 배치하지 마십시오. 팁과 필라멘트가 적절하게 배치되면 밸브를 돌려 가압된 공기가 피펫으로 유입되도록 하고 팁 뒤의 테이퍼가 바깥쪽으로 팽창하기 시작할 때까지 피펫 팁을 가열합니다. 팁이 너무 많이 부풀어 오르기 전에 가열을 중지하십시오.

원하는 모양에 대한 적절한 거리, 열 및 시간을 결정하기 위해서는 실험이 필요합니다. 선택 단계로, 팁 개방 직경을 줄이기 위해 압력이 없는 상태에서 팁을 연마할 수도 있습니다. 또한 이러한 연마 단계를 반복하여 다듬을 수 있다는 점을 명심하십시오.

피펫 팁의 모양과 치수를 모두 조정하십시오. 연마가 완료되면. 압력을 끄고 피펫 팁을 안전한 방향으로 향하게 합니다.

피펫을 제거하고 먼지로부터 보호되는 깨끗한 보관 상자에 넣으십시오. 실험실의 안전을 위해 피펫을 제거하기 전에 압력을 끄십시오. 그렇지 않으면 피펫 홀더에서 배출될 수 있습니다.

제거 시, 향상된 패치 클램프 기록을 위해 피펫을 압력 연마하는 방법을 보여드렸습니다. 이 절차를 수행할 때 피펫에 기화된 금속의 증착을 최소화하기 위해 연마 코일을 높은 용융 온도의 유리로 코팅하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 그리고 피펫이 압축 공기에 노출되는 동안에는 주의하십시오.

홀더에서 피펫을 제거하기 전에 피펫이 홀더에 단단히 고정되어 있는지 확인하고 공기를 끄십시오. 그게 다야. 시청해 주셔서 감사합니다.

즐거운 압력 연마와 실험에 행운을 빕니다.