Methodenartikel

Creatie van Muizen Experimentele abdominale aorta-aneurysma met Elastase

DOI:

10.3791/1280

⸱

23 juli 2009

 ,  ,  , 
1Department of Cardiovascular Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Vascular Surgery, Stanford University School of Medicine

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze video laat zien hoe u abdominale aorta-aneurysma (AAA) te induceren in muizen via voorbijgaande intraluminale infusie van varkens pancreas elastase in de infrarenale segment van de abdominale aorta. Het model heeft de mogelijkheid om breed inzicht toe te voegen in de pathobiologie van AAA te wijten aan de opkomst van tal van transgene en knockout muizen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Voorbijgaande intraluminale infusie van varkens pancreas elastase in de infrarenale segment van de abdominale aorta is de meest gebruikte diermodel van de abdominale aorta aneurysma (AAA) sinds het voor het eerst werd beschreven in ratten door Anidjar en collega's. 1 De reden voor de ontwikkeling is gebaseerd op de verstoorde aard van de elastine waargenomen in AAA. Deze rat model is aangepast aan AAA produceren in de infrarenale aorta gebied van muizen. 2 Het model heeft de mogelijkheid om breed inzicht toe te voegen in de pathobiologie van AAA te wijten aan de opkomst van tal van transgene en knockout muizen. Bovendien is het een levensvatbaar platform om potentiële therapeutische middelen test voor AAA. In deze video, tonen we de elastase infuus AAA procedure die wordt gebruikt in ons laboratorium.

Muizen zijn verdoofd met behulp van 2,5% isofluraan, en een laparotomie wordt uitgevoerd onder steriele omstandigheden. De abdominale aortais geïsoleerd met behulp van een werkend stereomicroscoop (Leica). Na het plaatsen van een tijdelijke ligaturen rond de proximale en distale aorta, is een aortotomy gemaakt op de splitsing met de punt van een 30-gauge naald. Een warmte-taps segment van de PE-10 polyethyleen buis is ingevoerd door de aortotomy en beveiligd. De aorta-lumen wordt vervolgens doorbloed voor 5-15 minuten op 100 mm Hg met een zoutoplossing die type I varkens pancreas elastase (4,5 U / ml; Sigma Chemical Co.) Na het verwijderen van de perfusie katheter, is de aortotomy gerepareerd zonder vernauwing van het lumen.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Muizen worden verdoofd met inhalatie isofluraan 2.0-3.0ml / L.
  2. De buik wordt geschoren en gewassen met alcohol en betadine.
  3. De muis op de rug ligt op het operatiegebied.
  4. Steriele handschoenen worden gedragen door de chirurg, en de gebruikte instrumenten zijn gesteriliseerd met hete kraal sterilisator.
  5. Een lange middellijn incisie in de buik wordt gemaakt. Buikinhoud worden teruggetrokken buiten de buik met een steriel gaasje op de abdominale aorta bloot te leggen.
  6. De abdominale aorta is geïsoleerd van het niveau van de linker nier-ader aan de bifurcatie.
  7. De takken van de abdominale aorta worden blootgesteld en geligeerd met 10-0 hechtingen. Alle aorta takken binnen 1.0cm van de splitsing worden geligeerd.
  8. Tijdelijke 6,0 zijde ligaturen zijn geplaatst rond de proximale en distale delen van de aorta
  9. Een aortotomy wordt gemaakt op de splitsing met een 30-gauge naald.
  10. Warmte-taps polyethyleen buis (PE-10) is geïntroduceerd door de aortotomy en vastgezet met een gelijkspel.
  11. Met behulp van een zoutoplossing tas hing op een hoogte van 136 cm tot 100 mmHg kalibreren, wordt de aorta gevuld met de zoutoplossing die 4,5 U / ml Type I varkens pancreas elastase. De aorta verwijdt meestal tot 150-170% van zijn oorspronkelijke diameter in 5-15 minuten elastase perfusie.
  12. De perfusie katheter wordt vervolgens verwijderd en de aortotomy afgesloten met een 10-0 hechtdraad tot vernauwing te voorkomen.
  13. Nadat de aortotomy is gesloten, wordt de distale ligatuur verwijderd.
  14. Als er weinig of geen bloeden van de gerepareerde aortotomy, is de proximale ligatuur verwijderd. De uitgebreide aorta vult met bloed onmiddellijk.
  15. De darmen worden teruggegeven aan de buik, en de wond wordt gesloten in twee lagen met 6-0 nylon / polypropyleen hechtdraad.
  16. 0,25% Bupivicaime druppels (appx een druppel voor elke centimeter van de incisie grootte) worden geplaatst op de wond en een dosis van Caprofen (5mg/kg) wordt subcutaan.
  17. De muis wordt geplaatst op een warme omgeving en meestal herstelt binnen de 15 minuten.

figure-protocol-1
Figuur 1. Vertegenwoordiger Resultaat van Elastase geïnduceerde AAA.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eerdere studies hebben opgemerkt significante lot-tot-lot variatie in AAA ontwikkeling van verschillende commerciële elastase voorbereidingen 3. Zo is het essentieel om de productie te veel controleren, alsook de nodige controle groepen hebben om het vermogen van de voorbereiding op AAA veroorzaken document.

Interessant is dat gevoeligheid voor AAA ontwikkeling in dit model is afhankelijk van de muizenstam gebruikt 3. De muis gebruikt in de huidige video is van de C57Bl...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te melden.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund de SCCOR subsidie ​​"AAA Disease: Mechanismen, gelaagdheid, en behandeling" (P50 HL083800-03) van de National Institutes of Health

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Type I porcine pancreaselastaseReagensSigma-AldrichE1250
polyethyleen slang (PE-10)BD Biosciences427400
CHANGE-A-TIPBovie Medical Corporation18010-00 (FST)cauterisatiemes
LEICA MZ6Leica Microsystemsstereomicroscoop
LEICA DFC290HDLeica MicrosystemsUSB-camera
Image Pro Express ver. 6.0Media Cybernetics Inc.software

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Abdominaal aortaal aneurysmaelastase infusiemuismodelchirurgische procedureaortaperfusieporcine pancreatische elastasesteriele techniekherstel van aortotomieaneurysmavormingpostoperatieve zorg

Gerelateerde artikelen