De auteurs hebben niets te melden.

wolbachia bacteriële infectie in drosophila

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia bacteriële infectie in Drosophila

Mijn naam is Voia Friedman. Ik ben associate researcher aan de Princeton University. Vandaag ga ik u vertellen over een aantal protocollen die ik heb ontwikkeld om hemolymfe te isoleren uit geïnfecteerde vliegen en deze vervolgens in niet-geïnfecteerde vliegen te injecteren.In essentie is dit een zeer eenvoudig protocol om hem uitsluitend voor basisdoeleinden te isoleren. Hiervoor gebruikt u dit apparaat van Mepo, dat een filter bevat dat bovenop een Eppendorf-buisje wordt geplaatst. U begint met ongeveer honderd vliegen. U narcotiseert de vliegen, plaatst ze in het filterapparaat — u kunt hiervoor gewoon een trechter gebruiken om ze gemakkelijk in dit apparaat te krijgen — en wast ze vervolgens met 70% ethanol.U verwijdert simpelweg de vloeistof, u kunt de ethanol weggooien, en na drie keer is uw laatste wasbeurt met moleculair water, omdat u geen bacteriën wilt hebben met sporen van ethanol. Vervolgens gaat u naar een nieuwe centrifugebuis en centrifugeert u dit twee minuten in een microcentrifuge. Daarna kunt u dit injecteren. Voed alleen de onbehandelde vliegen.Gebruik in feite dubbelzijdige plakband; deze tapes hebben gewoonlijk twee zijden, waarbij de ene zijde een beschermlaag heeft en de andere niet. Laat de zijde met de beschermlaag naar boven wijzen, aangezien dit de zijde is waarop u de vliegen gaat plakken. In essentie zal, indien u dit object bovenop het gasapparaat plaatst, de gasstroom worden onderbroken en zullen de vliegen ontwaken wanneer ze zich bovenop het object bevinden.U kunt dus eenvoudig de stroom sturen door met tape een kleine kap of kamer te maken. Vervolgens leidt u het gas over de vliegen. Plaats daarna deze lamp hier met de tape, en dan heeft u uw vliegen.Plak de vliegen op de bovenkant van de tape, allemaal in dezelfde oriëntatie, en richt hun kop in de richting van waaruit u de naald zult inbrengen. Zo kunt u gemakkelijk over de vleugel gaan; aangezien het vliegen zijn, wilt u voorkomen dat ze wegvliegen. Mocht er tijdens de procedure een vlieg ontwaken, dan wilt u niet dat deze ontsnapt.Zorg er dus voor dat u een kleine tik en druk uitoefent op de vleugels van de vlieg bij het achterlijf. Het is geen probleem als de vleugels beschadigd raken. Wanneer u de vliegen na de injectie verwijdert, zullen ze waarschijnlijk sowieso hun vleugels verliezen, maar ze zullen overleven.Dat kan nuttig zijn, omdat je de vliegen zo niet verliest. Daarom brengt hij minerale olie aan op de micrometer aan de achterzijde van de naald, vervolgens de naaldinjectiepool, en daarna kun je de druk gewoon aanpassen om het materiaal naar de punt van de naald te brengen. Ik injecteerde ergens tussen de 10 en 15 nanoliters, maar het belangrijkste is dat ik consistent blijf. Oké, een belangrijk detail bij dit experiment is dat, zodra de vlieg wordt geïnjecteerd, zoals u zag, de naald zo ver mogelijk door het bovenste gedeelte van het abdomen moet worden gebracht.Omdat er hier, in essentie wanneer de naald binnendringt, een grotere ruimte is om op en neer te bewegen. En in principe is het, wanneer het dichter bij de cuticle ligt, minder waarschijnlijk dat vitale organen van de vlieg worden gepenetreerd. Het is zeer onwaarschijnlijk dat u bijvoorbeeld een gat in de darm prikt, wat de vlieg waarop u de chirurgische ingreep uitvoert zou doden.Mijn naam is Voia Friedman. Ik ben associate researcher aan de Princeton University in het laboratorium van Eric Hels. Vandaag wil ik u vertellen over dit protocol dat u zojuist in de demonstratie heeft gezien.Dit protocol is uitgevoerd omdat we wilden aantonen dat UBA in staat is om weefsels te passeren. UBA is een van de meest succesvolle intracellulaire parasieten ter wereld. Het infecteert 20 tot 70% van de insecten en vele andere organismen.Daarnaast is het zeer belangrijk in termen van menselijke ziekten, omdat het ook nematoden infecteert die ziekten overbrengen zoals rivierblindheid of onchocerciasis. En CCA is onze obligate endosymbiont in deze wormen. Er is een grote, zeer grote belangstelling voor het gebruik van CCA ook als middel om parasitaire ziekten te beheersen die worden overgebracht door muggen, zoals malaria en dengue.Dit protocol is in basis ontwikkeld om aan te tonen dat CCA, eenmaal aanwezig in de abdominale holte van een vlieg, door weefsels heen kan trekken om de kiemcellen te bereiken. Wat u hier ziet is de morfologie van de Drosophila-ovarium; zodra het in de hemolymfe aanwezig is, kan het door het peritoneale vlies trekken dat zich rond het ovarium bevindt.Vervolgens passeren ze een spierlaag. Een van de eerste plaatsen waar ze de eierstok binnendringen, is de somatische stamcelomgeving. Van daaruit kunnen ze de kiemlijn bereiken.Deze bacterie wordt op dezelfde manier overgedragen als mitochondriën, namelijk via de moeder, via het cytoplasma dat in de eicel aanwezig is. Daarom moeten ze noodzakelijkerwijs aanwezig zijn in de kiemlijn. Dat is de reden waarom dit protocol is ontwikkeld.En dit protocol kan zeer nuttig zijn, aangezien de traditionele manier waarop men zou proberen wbaa te transinfecteren, door wbaa te nemen en een nieuwe insectensoort te introduceren, normaal gesproken via micro-injecties in het embryo zou gebeuren. Die methoden zijn echter veel gecompliceerder.En in feite maken we hier simpelweg gebruik van de biologie van het organisme, aangezien ze in staat zijn om weefsels te doorkruisen en naar de stamcelweefsels te trekken, waardoor ze door kunnen gaan naar de kiemlijn. Hierdoor is het eenvoudiger om UBA te verkrijgen van bepaalde insectensoorten die geïnfecteerd zijn, waarna deze kunnen worden overgedragen op niet-geïnfecteerde soorten. Waarschijnlijk denk ik dat het de injectie zelf is.In principe moet u er zorg voor dragen dat de vlieg zo goed mogelijk wordt gefixeerd. We gebruiken dubbelzijdige plakband en de naald moet zo dicht mogelijk bij, en zo parallel mogelijk aan de vlieg worden ingevoerd, om te voorkomen dat u te diep gaat. Zo is de kans kleiner dat de vlieg na de chirurgische ingreep sterft.

Wolbachia bacteriële infectie in Drosophila

In dit artikel

Openbaarmakingen

Herprints en machtigingen

Tags