A Novel RFP Reporter Steun in de visualisatie van het oog denkbeeldige Disc in Drosophila</em

Samenvatting

Beschrijven we een nieuw rood fluorescerend eiwit (RFP) reporter dat specifiek wordt uitgedrukt in de Drosophila Oog. We detail een methodologie voor dissectie van het oog denkbeeldige schijf en hoe deze verslaggever kan worden gebruikt om steun in de dissectie en identificatie van specifieke celtypes in de zich ontwikkelende oog.

Protocol

1. Plaats eerst een druppel PBS op een Sylgard schotel onder een dissectie microscoop.
2. Volgende verwijder enkele omzwervingen derde instar larven uit een flacon of fles met behulp van een spatel en plaats ze in het PBS.
3. Om te beginnen de dissectie met je linkerhand een pincet (als je rechts bent overhandigd) om een ​​larve greep twee derde van de weg naar de achterkant en dan het andere paar te gebruiken om de donker gekleurde mond haken houden aan het voorste einde.
4. Nu voorzichtig uit elkaar te trekken van de larve door het bewegen van beide paren een pincet uit de buurt van elkaar. De monddelen moet uit de buurt komen van de rest van het lichaam met het oog....

Discussie

Dissectie van de Drosophila oog denkbeeldige schijf is eenvoudig, maar kan de tijd nemen om te beheersen. De kritische stappen zijn de identificatie van het oog schijf en de dissectie uit de buurt van het larvale hersenen. Identificatie van het oog schijf is eenvoudiger met behulp van de eye-RFP lijn hier. Eventuele wijzigingen zijn aan de antennaal schijf of de peripodial membraan te verwijderen, of om de optische kwab aan de PR-axonen het invoeren van de hersenen te visualiseren verlaten.