Snuit uitbreiding reactie of PER is een smaak gedrag test die is gebruikt in vliegt als in honingbijen. Toen de snuit contact maakt met een mooie stof, de vlieg breidt zijn slurf om te consumeren van de stof. Oplossingen van verschillende suikers zijn zeer aantrekkelijk voor de vliegen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Snuit Extension Response (PER) assay in Drosophila
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Snuit extensie respons (PER) is een smaak gedrag test die is gebruikt in vliegt als in honingbijen.
Op het oppervlak van de mond van de vlieg (labellum), zijn er haar-achtige structuren, genaamd sensilla die smaak neuronen huizen. Wanneer een aantrekkelijke stof maakt contact met de labellum, de vlieg breidt zijn slurf te consumeren het materiaal. Snuit Extension Response (PER) test meet deze smaak gedrag reactie, en het is een bruikbare methode om te leren over voedsel voorkeur in een enkele vlieg. Oplossingen van verschillende suikers, zoals sucrose, glucose en fructose, zijn zeer aantrekkelijk voor de vliegen. Het effect van aversieve stoffen kunnen ook worden getest als vermindering van PER bij menging in een zoete oplossing.
Ondanks de eenvoud van de basis-procedure, er zijn veel dingen die het kan verhinderen te werken. Een van de factoren die aandacht verdient, is de vlieg responsieve toestand. De benodigde tijd om de honger vliegen te brengen naar de juiste responsieve toestand varieert drastisch van 36 tot 72 uur. We een reeks controles om de vlieg staat en die het mogelijk maakt uit de exploitatie van niet-responsieve of hyper-responsieve individuele dieren te evalueren. Een andere belangrijke factor is de invloed niveau en de positie van het contact met de labellum, die moeilijk te beschrijven met woorden. Deze video presentatie toont al deze samen met een aantal andere verbeteringen die de reproduceerbaarheid van deze methode zou toenemen.
Protocol
Uithongering
- De eerste, verhongeren de vlieg.
- Leg een klein stukje van Kim-wipe doorweekt met water in een lege flacon.
- Transfer 20-30 weldoorvoede vliegt naar de lege flacon.
- Controleer om de 12 -24 uur om er zeker van het papier vochtig is.
- Verhongeren het vliegen voor 36 tot 72 uur.
Bevestig de fly
- Neem een vlieg in een afzuiger.
- Plaats een 200 ul geel tip over de opening. Tegelijkertijd flippen en blazen, kunt u knijp de vliegen in de gele tip.
- Voorzichtig toe te passen wat lucht op de vlieg duwen tot een punt waar het niet kan bewegen.
- Door het gebruik van een scheermes, een merkteken ongeveer ter oog van de vlieg, dan zuigen de vlieg terug en sneed de tip.
- Voorzichtig terug blazen vliegen naar positie, maar vlak voor het bereiken van het einde, maak een schuin afsnijden op de plaats waar de proboscis zal worden gevestigd. U kunt dit doen zonder deze schuin afsnijden, maar het zou zeker de volgende proces gemakkelijker te maken.
Bereid sucrose wieken
- Twist een 6 mm brede strook Kimwipes ® papier in een draad, en trek uit elkaar in kleine stukjes van de kegel-achtige vorm van Wick (<1 cm).
- Deze kleine wieken werden ondergedompeld in sucrose oplossingen of water en aan de proboscis door het maken van contact.
Bereid controles en proefdieren
- Voor het testen een tastants, geven een 4% sucrose oplossing voor het vliegen. Dit werkt als een positieve controle. Gooi alle vliegen die niet reageren.
- Vervolgens testen dH 2 0 on the fly. Deze fungeren als een negatieve controle. Gooi het vliegen als het deed reageren.
- Test deze controles na het testen van uw tastants.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In deze presentatie hebben we doorlopen alle stappen voor de Proboscis extensie respons test. De methode klinkt vrij eenvoudig, maar net als in veel ander gedrag testen, veel kleine dingen kunnen de test te voorkomen werken. We hebben meegemaakt veel van dergelijke stappen die zorgvuldige aandacht nodig hebben. Hier, ik reemphasize een aantal van de belangrijkste factoren.
Een zo'n factor is de vorm van de lont. Ik heb laten zien een paar van de goede voorbeelden, maar natuurlijk in werkelijkheid alles zou een continu spectrum t...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dankbetuigingen
Wij danken Paul Graham voor het serveren als een camera man in de video-presentatie.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen | |
|---|---|---|---|---|
| HDR-HC1 | Camera | Sony Corporation | ||
| SMZ800 | Microscoop | Nikon Instruments | ||
| P-IBSS | Camera-adapter | Nikon Instruments | ||
| 1x DC10LN | Camera-adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| 257010 | Camera-adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| TREKKER Mk2 | Statief | BENBO | ||
| Gorillapod SLR | Statief | Joby | ||
| iMac G5 | Computer | Apple | ||
| Power Mac G5 | Computer | Apple | ||
| iMovie | Software | Apple | ||
| MPEG Streamclip | Software | SQUARED 5 |
Referenties
- Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
