$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Lee en Kang, Het meten van het effect van chemicaliën op de groei en reproductie van Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1.C. elegans Ei leggen Assay
- Incubeer de leeftijdssynchrone eieren op de NGM-plaat met DMSO of etoposide gedurende 64 uur (vóór de eerste geboorte) tot het jongvolwassen stadium bij 20 °C.
OPMERKING: Het is optioneel om de wormen uit de groeimetingsexperimenten te gebruiken. Het is handig om de groeimeting en het leggen van eieren samen te doen.
- Breng 5 volwassen wormen over naar de nieuwe NGM-platen zonder chemicaliën (toestand 1, chemische behandeling binnen een bepaalde periode, van eieren naar jongvolwassen stadium) of nieuwe NGM-plaat met dezelfde chemische voorbehandeling (toestand 2, continue blootstelling van chemicaliën gedurende de totale experimentele periode) en incubeer ze vervolgens gedurende 24 uur.
OPMERKING: Het wordt aanbevolen om voor elke behandeling replica's te maken met behulp van 3-5 NGM-platen; deze replica's kunnen worden gebruikt voor statistische analyse.
- Breng over naar de nieuwe NGM-plaat zoals hierboven beschreven en tel elke dag het aantal eieren. Tel de wormen die eraf kropen, stierven en intern werden uitgebroed.
- Herhaal deze stappen totdat de wormen geen eieren meer leggen, meestal in 5 dagen.
- Bereken het aantal eieren dat per worm van elk bord wordt gelegd en som deze waarden elke dag gedurende 5 dagen op om het totale aantal gelegde eieren te bepalen.
OPMERKING: Sluit het aantal wormen uit dat is weggecrawld en intern is uitgebroed uit de berekening.