Dit protocol is een uittreksel uit Xu en Chisholm, <a href="https://www.jove.com/video/51959/methods-for-skin-wounding-and-assays-for-wound-responses-in-c-elegans">Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans</a>, J. Vis. Exp. (2014).
1. Laser verwonden
OPMERKING: Gebruik femtoseconde laserbestraling (800 nm) om nauwkeuriger te verwonden.
<ol><li>Bereid agar pads op een glazen glijbaan met gesmolten 2% agar. Zorg ervoor dat de pads vergelijkbaar zijn met de agar pads die worden gebruikt voor live beeldvorming van C. elegans.</li>
	<li>Breng 10 jongvolwassen wormen over op het agarosepad met wormpluk en voeg een druppel van 2 μl levamisole-oplossing van 12 mM toe. Bedek de dieren en de vloeistof met een afdeklip. Wacht 1-2 minuten tot de wormen verlammen.</li>
	<li>Plaats de glazen schuif op een confocale microscoop van de draaiende schijf. Verplaats het stadium om de wormen te vinden en concentreer je op de laterale voorste of achterste syncytiële epidermis met een 100X-doelstelling (NA 1.4-1.46).</li>
	<li>Stel het vermogen van de femtoseconde laser in op 140 mW (gemeten voor het objectief). Gebruik de femtoseconde laser bij een herhalingssnelheid van 80 MHz. OPMERKING: Twee pulsen van elk 200 msec (gescheiden door 20 msec) zijn voldoende om in onze handen te verwonden.</li>
	<li>Focus op het apicale oppervlak van de epidermale cel en wond de epidermis. Let op lokale verstoring van het cytoplasma (borrelen) of lokaal bleken van een gebruikte fluorescerende marker. OPMERKING: Volg de juiste laserveiligheidsprocedures bij het gebruik van de femtoseconde laser. Lijn- of puntscans met femtosecondelasers zoals die in twee fotonmicroscopen moeten voldoende vermogen bieden voor laserwonden. OPMERKING: Hoewel we geen directe ervaring hebben met het gebruik van andere lasers, moet verwonden in principe mogelijk zijn met conventionele UV-lasers (zoals gebruikt bij C. elegans cel ablaties). Gebruik eventueel een Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) module op draaiende schijf confocale om de epidermis te verwonden (N. Pujol, persoonlijke communicatie).</li>
</ol>

epidermale laserwonden: gelokaliseerde schade veroorzaken om reparatieprocessen in c. elegans te onderzoeken

Epidermal Laser Wounding: Inducing Localized Damage to Examine Repair Processes in C. elegans

Bron: Xu, S. en Chisholm, A.D. <a href="https://www.jove.com/video/51959/methods-for-skin-wounding-and-assays-for-wound-responses-in-c-elegans">Methoden voor huidwonden en assays voor wondreacties bij C. elegans.</a> J.Vis. Exp. (2014). 
Deze video introduceert een methode van laserwonden, die wordt gebruikt om zeer nauwkeurige verwondingen in de wormepidermis te veroorzaken.  Het monsterprotocol is afkomstig van een onderzoek naar wondrespons en herstel.

Epidermale laserwonden: gelokaliseerde schade veroorzaken om reparatieprocessen in C. elegans te onderzoeken

Source: Xu, S. and Chisholm, A. D. Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in&#160;C. elegans.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2014).
This video ...

- To begin, transfer young adult worms onto a fresh agarose pad on a slide. Then add a few drops of 12 millimolar levamisole solution to paralyze the worms. Cover the worms with a coverslip and wait for a few minutes. Place the slide under a spinning disk confocal microscope and focus on the lateral outermost surface of the worm. The epidermis of an adult worm is a thin single-layered structure consisting of multi-nucleated syncytia that result from cell fusion events. The apical surface of epidermis secretes a flexible collagenous cuticle, while the basal surface is covered by a thin layer of extracellular matrix called the basal lamina. Next, wound the apical surface of the epidermis with a laser. Cytoplasm from the damaged cells may leak out, appearing as a bubble at the wound site. Laser irradiation has an advantage over other techniques, such as needle wounding, as it causes localized disruption of the cuticle and epidermal cells, without damaging internal tissues. In the example protocol, we will see the process of laser wounding in C. elegans. - To precisely wound the nematodes, this protocol uses a femtosecond laser attached to spinning disk confocal microscope. Line or poi

epidermal-laser-wounding-inducing-localized-damage-to-examine-repair

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biologie

Caenorhabditis elegans (worm)

Caenorhabditis elegans (rondworm)

Anatomy and Physiology

Anatomie en fysiologie

1.2K Views. - Om te beginnen, zet je jonge volwassen wormen over naar een verse agarose-pad op een glazen plaatje. Voeg vervolgens een paar druppels van een 12 millimolair levamisol-oplossing toe om de wormen te verlammen. Bedek de wormen met een dekglas en wacht een paar minuten. Plaats het plaatje onder een spinning disk confocale microscoop en focus op het laterale buitenste oppervlak van de worm. De epidermis van een volwassen worm is een dunne, eenlaagse structuur bestaande uit multi-nucleair...

Epidermale laserwonden: gelokaliseerde schade veroorzaken om reparatieprocessen in C. elegans te onderzoeken

In dit artikel

Samenvatting

Protocol

Meer artikelen verkennen