1. Aanraak-opgeroepen reactietest
<ol><li>Voorbereiding van 2 dpf Embryo's voor Touch-evoked Response Assay<ol>
<li>Zorg ervoor dat het tijdstip van de dag waarop de test wordt uitgevoerd consistent is tussen experimenten, omdat de activiteit gedurende de dag dramatisch kan variëren. OPMERKING: Het experiment moet geblindeerd worden uitgevoerd en de volgorde van testen moet worden gerandomiseerd om experimentele artefacten te minimaliseren.</li>
		<li>Wijs de visstammen een getal toe, dat onbekend is bij de persoon die het experiment uitvoert. Hierna genereert het gebruik van vrij beschikbare online tools een willekeurige lijst die de volgorde van testen dicteert.</li>
		<li>Dechorioneer embryo's ten minste een uur voor het testen door een gat in het koraal te scheuren en het koraal voorzichtig uit elkaar te trekken met een fijn pincet. Verwijder vuil uit de petrischaal voordat u terugkeert naar de incubator van 28 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Touch-evoked Response Assay uitvoeren<ol>
<li>Hittefase tot 28 °C ten minste 15 minuten voor aanvang van de test. OPMERKING: Deze fase is temperatuurgestuurd en blijft gedurende de test op 28 °C. Temperatuur heeft invloed op de activiteit en het is daarom belangrijk om een constante temperatuur te handhaven. Als er geen verwarmd stadium beschikbaar is, moet de temperatuur van het water worden gecontroleerd en moeten alle experimenten op dezelfde temperatuur worden uitgevoerd.</li>
		<li>Plaats een petrischaal gevuld met embryomedium (5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO4 in water) op een verlicht podium en monteer de hogesnelheidscamera over de petrischaal.</li>
		<li>Start de videocamera-opnamesoftware (zoals Stream Pix 5, hier beschreven) en selecteer onder het tabblad "werkruimte" 1.000 frame per seconde (1.000 fps) als opnamesnelheid om ervoor te zorgen dat de snelle zwemactie van de vis wordt opgenomen.</li>
		<li>Werk met één embryo tegelijk en plaats het embryo in het midden van de petrischaal met de zebravis duidelijk zichtbaar in het gezichtsveld. OPMERKING: Als het embryo voor aanvang van het experiment wegzwemt, vervang het dan door een ander embryo, omdat herovering en positionering van het embryo ertoe kunnen leiden dat het ongevoelig wordt voor de stimulus en herhaalde barstreacties spierzwakte in sommige ziektemodellen kunnen bevorderen.</li>
		<li>Begin met opnemen door op de knop "opnemen" te klikken en lever de mechanosensorische stimulus aan het embryo door het zachtjes aan te raken met een stompe naald op de bovenkant van het hoofd.</li>
		<li>Stop de opname nadat het embryo uit het gezichtsveld is gezwommen of weer tot rust is gekomen. OPMERKING: De versnelling piekt binnen de eerste 0,2 sec van de burst escape respons na de mechanische stimulus. Zorg er daarom voor dat de vis zich ten minste gedurende de eerste 0,2 seconde van de ontsnappingsrespons die de vis registreert, in het gezichtsveld bevindt. Met behulp van de software Stream Pix 5 worden de gegevens automatisch opgeslagen als een .avi videobestand. Alternatieve video-opnamesoftware zoals Free Video Capture of Softonic, die beide vrij beschikbaar zijn om te downloaden, kan ook worden gebruikt.</li>
		<li>Breng het embryo terug naar een nieuwe petrischaal en selecteer een ander embryo om te testen. Voer tests uit op minimaal 15 vissen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>90 mm Petri Dishes</td><td>&amp;nbsp;Pacific Laboratory Products</td><td>PT S90001</td><td></td></tr><tr><td>Tweezers, style 8</td><td>&amp;nbsp;ProSciTech</td><td>T04-821</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>&amp;nbsp;Thermoline Scientific&amp;nbsp;</td><td>TEI-43L</td><td></td></tr><tr><td>High Speed Camera</td><td>&amp;nbsp;Baumer</td><td>HXC20</td><td></td></tr><tr><td>StreamPix5&amp;nbsp;</td><td>NorPix</td><td></td><td>Step 1.2.3</td></tr><tr><td>Temperature Control Unit</td><td>&amp;nbsp;Viewpoint</td><td></td><td></td></tr><tr><td>http://www.randomization.com</td><td>&amp;nbsp;N/A</td><td></td><td>Steps 1.1.2</td></tr></tbody></table>

escape response assay: een methode om de reactie van zebravislarven te bestuderen om stimuli aan te raken

Bron: Sztal, T. E., et al. <a href="https://www.jove.com/v/54431/" target="_blank">Touch-evoked Response en Locomotion Assays gebruiken om spierprestaties en functie bij Zebravissen te beoordelen.</a> J.Vis. Exp. (2016)
Deze video beschrijft de touch-evoke responstest, die de reactie van de zebravislarve op aanraakprikkels meet.

Escape Response Assay: een methode om de reactie van zebravislarven te bestuderen om stimuli aan te raken

Source: Sztal, T. E., et al. Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish.&#160;J. Vis. ...

- To begin, gently transfer a few embryos into a Petri dish containing embryo medium. Now hold the chorion with forceps and make a tear in it with another forceps.
Next, gently push the embryo through the tear. Removing the chorion from the embryo accelerates its growth and movement. To get rid of the debris, transfer the embryos to another Petri dish containing embryo medium using a Pasteur pipette.
Place the Petri dish in an incubator, and let the embryos grow at 28 degrees Celsius. Set an illuminated water filled microscope stage to 28 degrees Celsius prior to the experiment to avoid any temperature related deviations in larval behavior.
Place the Petri dish on the stage and mount in the camera above the dish. Next, center the embryo in the camera&#39;s field of view. Now gently touch the embryo with a blunt needle, and record the larval response on the video camera recording software.
Upon stimulus, the embryo exhibits a powerful escape response-- a burst swim along with sharp turns. Measure the time between the touch and the larvae&#39;s peak acceleration during its escape.
In the example protocol, we will observe the response of zebrafish larvae to external stimuli.
- To perform the assay, place a Petri dish filled with approximately 25 milliliters of embryo medium onto an illuminated temperature controlled stage set to approximately 28 degrees Celsius. Mount the high speed camera above the dish. Launch the video recording software, and set the capture speed to 1,000 frames per second to ensure fast swimming speeds can be captured.
Position the embryo in the center of the Petri dish, clearly visible in the field of view. Press record and then deliver a mechanosensory stimulus by gently touching the embryo with a blunt needle on top of the head.
Stop the recording once the embryo has swum out of the field of view or returned to rest.
- Repeated testing of the same larvae may lead to habituation or promote muscle weakness in some disease models, resulting in reduced response to the tactile stimulus. Therefore, each embryo should only be tested once.

escape-response-assay-method-to-study-response-zebrafish-larva-to

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biologie

Danio rerio (zebrafish)

Danio rerio (zebravis)

Larva

Larve

Escape Response Assay: A Method to Study the Response of Zebrafish Larva to Touch Stimuli

2.5K Views. - Om te beginnen, brengt u voorzichtig enkele embryo's over in een petrischaal met embryomedium. Houd nu het chorion met een pincet vast en maak er een scheur in met een ander pincet. Duw vervolgens het embryo voorzichtig door de scheur. Het verwijderen van het chorion van het embryo versnelt zijn groei en beweging. Om het puin te verwijderen, brengt u de embryo's over naar een andere petrischaal met embryomedium met behulp van een Pasteurpipet. Plaats de petrischaal in een incu...

Abstract

Protocol

<table><tbody><tr><td>90 mm Petri Dishes</td><td>&nbsp;Pacific Laboratory Products</td><td>PT S90001</td><td></td></tr><tr><td>Tweezers, style 8</td><td>&nbsp;ProSciTech</td><td>T04-821</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>&nbsp;Thermoline Scientific&nbsp;</td><td>TEI-43L</td><td></td></tr><tr><td>High Speed Camera</td><td>&nbsp;Baumer</td><td>HXC20</td><td></td></tr><tr><td>StreamPix5&nbsp;</td><td>NorPix</td><td></td><td>Step 1.2.3</td></tr><tr><td>Temperature Control Unit</td><td>&nbsp;Viewpoint</td><td></td><td></td></tr><tr><td>http://www.randomization.com</td><td>&nbsp;N/A</td><td></td><td>Steps 1.1.2</td></tr></tbody></table>

Escape Response Assay: een methode om de reactie van zebravislarven te bestuderen om stimuli aan te raken

In dit artikel

Samenvatting

Protocol

Materialen

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Gerelateerde artikelen

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products	PT S90001
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
High Speed Camera	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2