Licht-donker voorkeurstest: een methode om angstgerelateerd gedrag bij zebravissen te bestuderen

Samenvatting

Bron: Holcombe, A., et al. A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) en de kwantificering van terugtrekking.  J.Vis. Exp. (2014)

De video beschrijft de licht-donker voorkeurstest om het angstgerelateerde gedrag bij zebravissen na de blootstelling aan ethanol te bestuderen.

Protocol

1. Gedragstesten

1. Verkrijg een licht/donkere arena van 9,5 cm breed bij 55 cm lang en 9,5 cm diep met een witte waterdichte vloer (Figuur 1B). Breng wit en zwart waterdicht niet-reflecterend papier aan op de binnenmuren van de arena met behulp van klittenband, waarbij de helft van de arena bedekt is met wit en de helft bedekt met zwart. Vul de arena tot een diepte van 5 cm met habitatwater bij een temperatuur van 25-28 °C. Houd deze temperatuur tijdens het testen.
2. Minimaliseer externe visuele stimuli door een witte driezijdige behuizing te bouwen waarin de arena zich moet bevinden. Zorg ervoor dat het testgebied diffuse bovengrondse verlichting heeft die geen reflecties op het wateroppervlak veroorzaakt, maar toch voldoende helder is voor de bewegingsvolgsoftware of post-hoc handmatige kwantificering van videobeelden.
3. Plaats de arena in de behuizing en stel de opname- en bewegingsanalyseparameters van de gedragsvolgsoftware in. Stel de proefduur in op 5-15 min, afhankelijk van de onderzoeksvraag.
   OPMERKING:Hier gebruikten we 5 minuten.
4. Transporteer de te testen groep vissen naar het onderzoeksgebied in de habitattank en plaats ze buiten het arenaverblijf. Acclimatiseren van de vis voor 10 minuten.
5. Net voorzichtig een vis uit de juiste groep en plaats in het midden van de licht / donker arena, zorg ervoor dat u de vis loslaat wanneer deze parallel aan de lange as van de arena is geplaatst om te voorkomen dat de vis naar de lichte of donkere zone wordt bevooroordeeld.
6. Begin met het opnemen van gedrag onmiddellijk nadat het dier is vrijgegeven. Kijk uit voor softwareproblemen met het volgen van de vis of voor het springen of bevriezen van vissen. Draai de arena 180° nadat de helft van de onderwerpen is getest om verwarring als gevolg van vooroordelen als gevolg waarvan het uiteinde van de arena is gericht op het open uiteinde van de behuizing te voorkomen.
7. Nadat de proef is beëindigd, nett en verwijdert u de vis voorzichtig van de arena naar een opslagtank of habitattank.

2. Analyse

1. Onderzoek de tijd doorgebracht in lichte versus donkere zones. Voor elke groep en elke vis, verkrijg de relatieve tijd doorgebracht in de lichte en donkere zones en analyseer met behulp van een monster t-test(of Wilcoxon ondertekende rangtest voor niet-parametrische gegevens; verschil met (de helft van de totale proefperiode) 150 sec) om te bepalen of groepen significant de voorkeur geven aan het ene gebied boven het andere.
2. Als u voorkeuren wilt vergelijken, berekent u een voorkeursindex door de tijd die in de lichtzone is doorgebracht af te trekken van de tijd die in de donkere zone is doorgebracht en verschillen tussen groepen te vergelijken. t-tests kunnen worden gebruikt om twee groepen te vergelijken. Vergelijk meerdere groepen met een eenrichtingsanalyse van variantie met behulp van Tukey's HSD post hoc test waar nodig (of Kruskal-Wallis test met Dunn's meervoudige vergelijking post hoc test voor niet-parametrische gegevens).
3. Vergelijk snelheid, aantal zoneovergangen, meanderend en immobiliteit tussen groepen. Gebruik eenrichtingsanalyse van variantie met behulp van Tukey's HSD post hoc test waar nodig (of Kruskal-Wallis test met Dunn's meervoudige vergelijking post hoc test voor niet-parametrische gegevens).

Resultaten

Figuur 1: Transfer procedure en de Licht/Donker arena. Deze foto's illustreren de overdrachtsprocedure. (A) Ten eerste bevinden de vissen zich in de transfertank (links). Doseertank met ethanol is afgebeeld (rechts). (B-C) Om de vis van de transfertank naar de ethanoloplossing te verplaatsen, moet de onderzoeker het paaiinzetstuk uit de transfertank en in de ethanoloplossingstank tillen. ...

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Light/Dark Arena 	Custom		Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long.
Three shelf benchtop housing system	Aquatic Habitats	N/A
1.5 L Spawning tank w/400 μm baffle	Aquatic Habitats	N/A
Ethovision XT Motion tracking software	Noldus Information Technology
Pure Grain Ethanol	Luxco, INC 	N/A