Gerichte leverablatie: inducerende hepatocytdood met metronidazol in transgene zebravislarven

Samenvatting

Bron: Choi T.Y., et al. Hepatocyt-specifieke ablatie bij zebravissen om galgestuurde leverregeneratie te bestuderen. J.Vis. Exp. (2015)

Het artikel beschrijft gerichte leverablatie, een methode voor het induceren van hepatocytdood met metronidazol in transgene zebravislarven. Het monsterprotocol beschrijft het proces voor het genereren, manipuleren en beoordelen van gerichte leverablatie bij zebravissen.

Protocol

1. Bereiding van embryo's/larven

1. Breng 100 embryo's over in een petrischaaltje van 100 mm met 25 ml eiwater. Bewaar niet meer dan 100 embryo's per petrischaaltje en verhoog ze op 28 °C.
2. Om pigmentatie te remmen, voegt u fenylthiourea (PTU) toe aan de petrischalen vóór 10 uur na de bevruchting (hpf) en verhoogt u embryo's/larven tot 80 hpf. De uiteindelijke concentratie van PTU is 0,2 mM.
   LET OP: PTU is giftig. Gebruik in overeenstemming met de juiste behandelingsrichtlijnen.
3. Verdoof de larven door 3-aminobenzoëzuur ethylester (Tricaine), bij een uiteindelijke concentratie van 0,016%, toe te voegen aan de petrischaaltje....

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder	Sigma-Aldrich	A5040	Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7.
Dimethyl sulfoxide (DMSO)	Sigma-Aldrich	D8418
Metronidazole	Sigma-Aldrich	M1547
N-Phenylthiourea (PTU)	Sigma-Aldrich	P7629
100 x 15 mm petri dish	Denville Scientific Inc.	M5300
egg water			0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water.
epifluorescence microscope	Leica Microsystems	M205FA