Volwassen zebravis elektrofysiologie: een methode om de extracellulaire elektrische activiteit van neuronen in vivo te meten

Samenvatting

Bron: Johnston, L., et al. Elektrofysiologische opname in de hersenen van intacte volwassen zebravissen.  J.Vis. Exp. (2013)

Het protocol beschrijft de procedure om elektrofysiologie uit te voeren bij volwassen zebravissen. Deze methode kan worden gebruikt voor het meten van neurale activiteit in vivo.

Protocol

1. Elektrofysiologie

1. Schakel de intubatiestopkraan uit en koppel snel het Luer-slot los dat de intubatiebasis verbindt met de tricaïnedruppel.
   1. Verplaats de intacte intubatie-instelling naar de elektrofysiologiemicroscoop en maak verbinding met het perfusiesysteem.
   2. Zet het habitatwater aan en doordrenkt met een snelheid van 1 ml / min gedurende ~ 1 uur, om de tricaine uit te wassen.
2. Plaats de secundaire elektrode met behulp van een micromanipulator onder visuele controle, zodat de elektrodetip in het neusgat van het dier of in de dip achter de bovenkaak kan worden ingebracht.
3. Steek de primaire elektrodenaald in de opening van de craniotomie. Steek de naald in het weefsel, zodat de punt vrij oppervlakkig in het optische tectum is geplaatst.
   1. Als de elektrode te diep is, kan het elektrische signaal klein zijn.
4. Verzamel en analyseer het elektrische verschil tussen de primaire en secundaire referentieelektroden. Dit proces maakt het mogelijk om extracellulaire opnames te verkrijgen.
   1. Verzamel de gegevens in gap-free modus met een sample rate van 5 kHz, met een low pass filter van 0,1 kHz en een high pass filter van 1 Hz.
   2. Begin pas met het registreren van elektrofysiologische activiteit als het habitatwater minimaal 45 minuten is doorgedrongen.
   3. Registreer een basislijn van inheemse activiteit gedurende ten minste 15 minuten voorafgaand aan de toevoeging van experimentele geneesmiddelen. Begin perfusie met experimentele geneesmiddelen naar keuze en registreer voor de gewenste hoeveelheid tijd. In gezonde preparaten is het mogelijk om de neurologische activiteit gedurende 2-3 uur vast te leggen.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Habitat water			pH 7.0-7.4, conductivity of 400-450 μS;  maintained by Instant Ocean and Sodium Bicarbonate
0.4% Tris-Buffered Tricaine	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7.2-7.4; stored at -20 degree C
60 ml Luer lock syringe tubes	Becton, Dickinson and Company	309653
3-way Stopcocks with Luer connections
0.010 in Silver wire	A-M Systems, Inc.
Q-series electrode holder
Fisherbrand 100 mm x 15 mm Petri dish	Fisher Scientific	NC9299146
34 G Beveled needle	World Precision Instruments, Inc.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Kimberly-Clark Professional	TW31KEM
1/8 in diameter tube
1 mm diameter tube
Microscope (Leica MZ APO)	Another microscope can be used