In Vivo Elektroporatie: een sitespecifieke methode om zebravissen te transfecteren

In dit artikel

Samenvatting

Bron: Durovic, T., et al. Elektroporatiemethode voor in vivo levering van Plasmide-DNA in het volwassen zebravisje Telencephalon. J. Vis. Exp. (2019).

Deze video beschrijft in vivo elektroporatie, een techniek voor DNA-afgifte in ependymogliale cellen bij volwassen zebravissen.

Protocol

1. Elektroporatie

Verwijder de vis uit de injectieopstelling terwijl u deze nog steeds in de spons houdt.
Dompel de binnenkant van de punt van de elektroden onder in de ultrasone gel.
Bedek de vis telencephalon met een kleine hoeveelheid ultrasone gel.
Plaats de viskop tussen de elektroden, plaats de positieve elektrode aan de ventrale kant van de kop van de vis en de negatieve elektrode aan de dorsale kant(figuur 1C),terwijl u het lichaam van de vis nog steeds in de spons houdt. Hiermee bepaalt u de richting van de stroomstroom die nodig is om ependymoglia te elektropotreren die zich in de subventriculaire zone bevindt.
Druk de elektroden voorzichtig en nauwkeurig tegen het telencephalon (figuur 1 C). Dien de stroom toe met het voetpedaal. Houd de elektroden op hun plaats totdat alle vijf de pulsen klaar zijn.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

figure-results-1
Figuur 1: Schematische weergave van coronale sectie van de everted zebravis telencephalon. (A) Schema van een coronale sectie van zebravis telencephalon, met de nadruk op de positie van ependymogliale cellen, die het ventriculaire oppervlak bekleden en de ventrale ventriculaire wand bouwen. Dorsale ependymale laag overbrugt de twee hemisferen en bedekt de ventrikel (V), gelegen tussen twee cellagen: epend...