1. Experimentele M. marinum infectie met intraperitoneale injectie
<ol><li>Pipetteer een druppel van 5 μL van de verdunde bacteriële oplossing op een stuk parafilmfilm en trek de druppel in een insulinenaald van 30 G.</li>
	<li>Gebruik 5-8 maanden oude wilde vis en rag1−/−hu1999 gemuteerde vissen voor het experiment. Verdoof volwassen zebravissen in het tankwater met 0,02% 3-aminobenzoëzuurethylester (pH 7,0). Plaats de vis ventrale kant omhoog in een spleet op een vochtig geschuimd plastic. OPMERKING: Rag-/- gemuteerde vissen kunnen geen somatische recombinatie ondergaan en functionele T- en B-cellen produceren.</li>
	<li>Injecteer de naald onder een hoek van ongeveer 45° tussen de bekkenvinnen. Houd de naaldopening naar boven om te zien dat de hele opening zich in de buikholte bevindt. Injecteer langzaam de bacteriële suspensie en verwijder voorzichtig de naald. OPMERKING: In het geval dat de rode tracer bij injectie uit de vis lekt, sluit u de vis uit van het experiment.</li>
	<li>Breng de vis onmiddellijk na injectie over in een terugwinningstank met vers tankwater.</li>
	<li>Neem monsters van de bacteriële suspensie op 7H10-platen om de 15 minuten van de gebruikte bacteriële aliquot en incubeer de bacteriën gedurende 5 dagen bij 29 °C en verifieer de infectiedosis door de kolonies op de platen te tellen.</li>
	<li>Controleer regelmatig het welzijn van de vis en euthanaseer vissen met symptomen van de infectie met een concentratie van meer dan 0,02% van 3-aminobenzoëzuurethylester (pH 7,0). OPMERKING: Ongeveer 7% van de volwassen zebravissen besmet met 34 ± 15 CFU en 30% van de zebravissen besmet met 2029 ± 709 CFU zullen symptomen hebben gehad tegen 8 weken. De symptomen kunnen zijn abnormaal zwemmen, gebrek aan reactie op aanraking, snakken, oedeem of waarneembare verspilling.</li>
	<li>Onderhoud de zebravis volgens de gemeenschappelijke normen.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Mycobacterium marinum&amp;nbsp;</td><td>American Type Culture Collection&amp;nbsp;</td><td>ATCC 927</td><td></td></tr><tr><td>Phenol red</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3532</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline tablets (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-50TAB</td><td></td></tr><tr><td>Middlebrock 7H10 agar</td><td>BD, Thermo Fisher Scientific</td><td>11799042</td><td></td></tr><tr><td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>Omnican 100 30 G insulin needle</td><td>Braun</td><td>9151133</td><td></td></tr><tr><td>1 mL syringe</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>4010.200V0</td><td></td></tr></tbody></table>

intraperitoneale injectie: een methode voor oplossingsafgifte in de buikholte van een volwassen zebravis

Bron: Luukinen, H., et al. <a href="https://www.jove.com/v/58299/" target="_blank">Modellering van tuberculose in Mycobacterium marinum Geïnfecteerde volwassen zebravis</a>. J. Vis. Exp. (2018).
Deze video beschrijft een techniek van intraperitoneale injectie, een methode voor het leveren van oplossingen in de buikholte van Adult Zebrafish.

Intraperitoneale injectie: een methode voor oplossingsafgifte in de buikholte van een volwassen zebravis

Source: Luukinen, H., et al. Modeling Tuberculosis in Mycobacterium marinum Infected Adult Zebrafish.  J. Vis. Exp. (2018).
This video describes a ...

- Fast an adult fish for 24 hours before injection to empty the gastrointestinal tract and create additional space in the abdomen. On the day of the procedure, anesthetize the fish with tricaine and place it into a slot in a wet sponge with the ventral side facing up.
Next, pipette the desired amount of injection solution onto a piece of laboratory film and pull it into an insulin needle. Position the needle between the pelvic fins at a 45 degree angle from the anterior-posterior body axis and gently push it in at the midline. Advance the needle approximately 1 to 2 millimeters into the abdominal cavity, the space between the abdominal wall and internal organs, and slowly inject the solution of interest. Wait for five seconds before pulling out the needle to avoid any spillage. Now, carefully remove the needle.
After injection, quickly transfer the fish into a recovery tank containing fresh tank water. If the fish doesn&#39;t begin to swim immediately, swirl the water near the gills to help it recover from anesthesia. In the example protocol, we will inject a mycobacterium marinum solution into RAG1 mutant fish to study infection.
- First, pipe out of 5 microliter droplet of the diluted bacterial solution onto a piece of paraffin film. Then, pull the droplet into a 30 gauge insulin needle. Use a five to eight-month-old fish for this experiment, with one being a wild-type fish and the other being a RAG mutant fish.
Position these fish ventral side up in the slits of a piece of moist foamed plastic. Inject the insulin needle between the pelvic fins at a 45 degree angle. Keep the needle opening upwards to ensure that the entire opening is inside the abdominal cavity. Then, slowly inject the bacterial solution. After this, carefully remove the needle and immediately transfer the fish to a recovery tank filled with fresh tank water.
Take samples from the bacterial aliquot in use every 15 minutes on 7H10 plates. Incubate these samples at 29 degrees Celsius for five days to verify the infection dose. Check the well-being of the fish regularly, making sure to euthanize any fish with infection symptoms by incubating them in water with more than 0.02% of 3-aminobenzoic acid ethyl ester.

intraperitoneal-injection-method-solution-delivery-into-abdominal

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Danio rerio (zebrafish)

Adult

Intraperitoneal Injection: A Method of Solution Delivery into the Abdominal Cavity of an Adult Zebrafish

8.5K Views. - Fast an adult fish for 24 hours before injection to empty the gastrointestinal tract and create additi...

Abstract

Protocol

<table><tbody><tr><td>Mycobacterium marinum&nbsp;</td><td>American Type Culture Collection&nbsp;</td><td>ATCC 927</td><td></td></tr><tr><td>Phenol red</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3532</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline tablets (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-50TAB</td><td></td></tr><tr><td>Middlebrock 7H10 agar</td><td>BD, Thermo Fisher Scientific</td><td>11799042</td><td></td></tr><tr><td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>Omnican 100 30 G insulin needle</td><td>Braun</td><td>9151133</td><td></td></tr><tr><td>1 mL syringe</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>4010.200V0</td><td></td></tr></tbody></table>

Intraperitoneale injectie: een methode voor oplossingsafgifte in de buikholte van een volwassen zebravis

In This Article

Abstract

Protocol

Materials

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles

Name	Company	Catalog Number
Mycobacterium marinum	American Type Culture Collection	ATCC 927
Phenol red	Sigma-Aldrich	P3532
Phosphate buffered saline tablets (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Middlebrock 7H10 agar	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0)	Sigma-Aldrich	A5040
Omnican 100 30 G insulin needle	Braun	9151133
1 mL syringe	Henke Sass Wolf	4010.200V0