Intraperitoneale injectie: een methode voor oplossingsafgifte in de buikholte van een volwassen zebravis

Samenvatting

Bron: Luukinen, H., et al. Modellering van tuberculose in Mycobacterium marinum Geïnfecteerde volwassen zebravis. J. Vis. Exp. (2018).

Deze video beschrijft een techniek van intraperitoneale injectie, een methode voor het leveren van oplossingen in de buikholte van Adult Zebrafish.

Protocol

1. Experimentele M. marinum infectie met intraperitoneale injectie

1. Pipetteer een druppel van 5 μL van de verdunde bacteriële oplossing op een stuk parafilmfilm en trek de druppel in een insulinenaald van 30 G.
2. Gebruik 5-8 maanden oude wilde vis en rag1−/−hu1999 gemuteerde vissen voor het experiment. Verdoof volwassen zebravissen in het tankwater met 0,02% 3-aminobenzoëzuurethylester (pH 7,0). Plaats de vis ventrale kant omhoog in een spleet op een vochtig geschuimd plastic.
   OPMERKING: Rag-/- gemuteerde vissen kunnen geen somatische recombinatie ondergaan en functionele T- en B-cellen produceren.
3. Injecteer de naald onder een hoek van ongeveer 45° tussen de bekkenvinnen. Houd de naaldopening naar boven om te zien dat de hele opening zich in de buikholte bevindt. Injecteer langzaam de bacteriële suspensie en verwijder voorzichtig de naald.
   OPMERKING: In het geval dat de rode tracer bij injectie uit de vis lekt, sluit u de vis uit van het experiment.
4. Breng de vis onmiddellijk na injectie over in een terugwinningstank met vers tankwater.
5. Neem monsters van de bacteriële suspensie op 7H10-platen om de 15 minuten van de gebruikte bacteriële aliquot en incubeer de bacteriën gedurende 5 dagen bij 29 °C en verifieer de infectiedosis door de kolonies op de platen te tellen.
6. Controleer regelmatig het welzijn van de vis en euthanaseer vissen met symptomen van de infectie met een concentratie van meer dan 0,02% van 3-aminobenzoëzuurethylester (pH 7,0).
   OPMERKING: Ongeveer 7% van de volwassen zebravissen besmet met 34 ± 15 CFU en 30% van de zebravissen besmet met 2029 ± 709 CFU zullen symptomen hebben gehad tegen 8 weken. De symptomen kunnen zijn abnormaal zwemmen, gebrek aan reactie op aanraking, snakken, oedeem of waarneembare verspilling.
7. Onderhoud de zebravis volgens de gemeenschappelijke normen.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Mycobacterium marinum	American Type Culture Collection	ATCC 927
Phenol red	Sigma-Aldrich	P3532
Phosphate buffered saline tablets (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Middlebrock 7H10 agar	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0)	Sigma-Aldrich	A5040
Omnican 100 30 G insulin needle	Braun	9151133
1 mL syringe	Henke Sass Wolf	4010.200V0