$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Intraoperatieve Multispectrale Fluorescentie Camera
- Een op maat gemaakte camera-systeem werd ontwikkeld in ontwikkeld op het Instituut voor Biologische en Medische Beeldvorming (IBMI, Technische Universiteit / Helmholtz Zentrum, München, Duitsland) in nauwe in samenwerking met SurgOptix (SurgOptix Inc, Redwood Shores, CA, USA). De opzet van de intraoperatieve multispectrale fluorescentie camera systeem is weergegeven in figuur 2.
- Licht door een systeem van optica en is gescheiden in zichtbaar licht, licht op de emissie (fluorescentie) golflengte band en licht aan de excitatie golflengte band. Deze bundels worden gedetecteerd door CCD-camera (CCD) (figuur 2). Multi-spectrale signalen van alle camera's zijn verwerkt om te corrigeren voor artefacten en opbrengst echte kwantitatieve fluorochroom bio-distributie. Kleur en fluorescentie-signalen kunnen worden weergegeven als afzonderlijke beelden op externe monitoren of bovenop in een beeld.
- De excitatie-en emissie-filters van de camera worden ingesteld in de meting hierin respectievelijk te halen bij 750 nm en 800 ± 20 nm.
2. Optische Contrast Agent Voorbereiding
- De fluorescerende contrastmiddel indocyaninegroen (ICG, Pulsion AG, München, Duitsland) is bereid onder steriele omstandigheden. Een concentratie van 0,5 mg / ml wordt gebruikt. Het is belangrijk om steriel gedestilleerd water en geen natriumchloride (NaCl) te gebruiken, aangezien de laatste zal de IGC te aggregeren veroorzaken.
- Na de bereiding moet de oplossing worden opgeslagen in een donkere, koele plek om een snelle verslechtering van de fluorescentie-intensiteit te vermijden door het bleken. Let op: vanaf dit punt naar voren te houden van de ICG beschermd tegen licht.
3. Intraoperatieve Imaging - Installatie en Injectie van ICG
- De camera is gepositioneerd en ingewijd in de operatiekamer voorafgaand aan de operatie om interferentie te minimaliseren met de standaard chirurgische ingreep, en aangesloten op de high-definition schermen (figuur 2B).
- De camera is bedekt met standaard steriele doeken (Carl Zeiss Vision BV, Sliedrecht, Nederland, OPMI Drape REF 306071) door de onderzoeker in steriele of kleding.
- Let op: zorg is genomen om alleen duidelijk desinfecterende middelen te gebruiken, als gekleurde desinfecterende middelen zijn vaak autofluorescente en kunnen interfereren met de beeldvorming procedure. Bovendien kunnen steriele doeken en de chirurgische markers worden autofluorescente. Het is aangeraden om alle materialen die in de OR en de operationele veld voor autofluorescentie voorafgaand aan de operatie te testen.
- De fluorescerende contrastmiddel indocyaninegroen (ICG) is bereid onder steriele omstandigheden. Een concentratie van 0,5 mg / ml wordt gebruikt. Het is belangrijk om steriel gedestilleerd water en geen NaCl, te gebruiken als de laatste zal de IGC te aggregeren veroorzaken. Na de bereiding moet de oplossing worden opgeslagen in een donkere, koele plek om een snelle verslechtering van de fluorescentie-intensiteit te vermijden. Let op: is het raadzaam om handschoenen te veranderen na de voorbereiding van ICG, want zelfs een kleine hoeveelheid van het morsen van ICG invloed kunnen zijn op de beeldkwaliteit.
- De imaging procedure start na het openen van de buik. Wanneer het gebied van belang is blootgesteld, is de camera gemanoeuvreerd in het operatiegebied. De zoom en focus worden aangepast onder steriele omstandigheden. Lichten in de operatiekamer zijn uitgeschakeld voor een betere detectie van het fluorescentie-signaal.
- 1,0 ml van 0,5 mg / ml ICG wordt gemengd met 1,0 ml van de standaard blauwe kleurstof (patent blauw / blauw patente, Guerbet, Frankrijk) in een spuit. De chirurg injecteert het contrastmiddel in vier kwadranten rondom de primaire tumor, het voorkomen van morsen van de agent. Let op: in geval van morsen van ICG op de chirurgische handschoenen, is het nodig om handschoenen te veranderen. Stilstaande beelden of real-time video's zijn verkregen van de lymfestroom en de verschijning van de fluorescerende schildwachtklier (figuur 3). Alle afbeeldingen en video's worden direct opgeslagen op de computer.
- Afgezien van de fluorescentie, is de SLN ook gedetecteerd volgens het standaard protocol, ofwel met behulp van een gamma-probe of door visuele inspectie voor een blauwe verkleuring, of beide. De radioactieve tracer is over het algemeen toegediend een dag voor de operatie, waarna een lymphoscintigram is uitgevoerd voor de detectie van een radioactief SLN. Dit is een onderdeel van de standaard procedure en heeft geen plaats in de fluorescentie beeldvorming protocol.
- Real-time excisie van de SLN wordt begeleid door zowel fluorescentie en blauwe verkleuring van de lymfeklieren. De real-time functie van de camera helpt op te sporen voor een overblijfsel fluorescentie of onverwachte lokalisaties van de TL-knooppunten.
- Na excisie van de SLN, zijn ex vivo beelden die van alle weggesneden lymfeklieren op de aanwezigheid van een fluorescent signaal. De belichtingstijd kan worden verlengd voor een hogere resolutie bij het vastleggen van stilstaande beelden (figuur 4).
- Histopathologisch onderzoek van de lymfeklieren onthult de aanwezigheid of afwezigheid van tumorcellen in de schildwachtklier.
4. Representative resultaten
Fluorescerende lymfeklieren kan worden gedetecteerd met een hoge signaal-achtergrond verhouding. Ook kan stromen van de ICG via de lymfevaten worden gecontroleerd zodat real-time lymfeklier in kaart brengen. Resultaten kunnen worden beïnvloed door toenemende diepte van het knooppunt, waarbij wellicht andere belichting procedures om detectie te bereiken. Toekomstige toepassing van de specifieke tumor gerichte fluorescerende stoffen kunnen intraoperatieve detectie van een positieve SLN met kanker cellen met behulp van deze technologie.

Figuur 1. De schildwachtklier (SLN) theorie. Het SLN is de eerste drainerende lymfeklier (s) van de tumor.

Figuur 2. Schematische afbeelding van de multispectrale fluorescentie camera systeem (A). De basisinstallatie van de camera-systeem in de operatiekamer (B).

Figuur 3. Multispectrale fluorescentie beeldvorming van een lymfeklier in de vulva kanker. Color afbeelding van een lymfeklier in vivo (A). Fluorescentie beeld van dezelfde lymfeklier, in vivo (B). Pseudocolor fluorescentie beeld bovenop de kleur afbeelding (C).

Figuur 4. Multispectrale fluorescentie beeldvorming van een lymfeklier ex vivo bij baarmoederhalskanker. Color afbeelding van een lymfeklier ex vivo (A). Fluorescentie beeld van dezelfde lymfeklier, ex vivo (B). Pseudocolor fluorescentie beeld bovenop de kleur afbeelding (C).