Agar-Block microkosmos voor de gecontroleerde Plant Tissue Ontleding door Aerobic Fungi

Samenvatting

Deze video toont een gecontroleerde omgeving benadering van de afbraak van lignocellulose plantenweefsels studie door aërobe schimmels. De mogelijkheid om bronnen van nutriënten en vocht controle is een belangrijk voordeel van agar-block microkosmos, maar de aanpak levert vaak gemengd succes. Wij richten kritische valkuilen aan reproduceerbare, lage variabiliteit resultaten opleveren.

Samenvatting

De twee belangrijkste methoden voor het bestuderen van schimmel afbraak van lignocellulose plantenweefsels werden ontwikkeld voor het testen van de verduurzaming van hout (bodem-block; agar-blok). Het is goed geaccepteerd dat de bodem-block microkosmos een hogere decay rates, minder vochtproblemen, minder variatie tussen studies, en te hoge drempels voor conserveermiddel toxiciteit opleveren. Bodem-block testen is dus de meer gebruikte techniek en is gestandaardiseerd door American Society for Testing and Materials (ASTM) (methode D 1413-07). De grond-block ontwerp heeft nadelen, echter, met behulp van lokaal variabele bodem bronnen en bij het beperken van de controle van voedingsstoffen externe (exogene) om de rottende weefsels. Deze bezwaren naar voren zijn gekomen als een probleem bij de toepassing van deze methode om andere, steeds populairder onderzoek wil. Deze moderne doelen zijn onder meer vernederend lignocellulose voor bio-energie onderzoek, testen bioremediatie van co-gemetaboliseerd giftige stoffen, het evalueren van oxidatieve mechanismen, en het bijhouden van getransloceerd elementen langs hyfen netwerken. Bodem-blokken te weinig controle niet te lenen in deze toepassingen. Een verfijnde agar-blok aanpak noodzakelijk.

Hier gebruiken we de bruine rot hout-afbrekende schimmel Serpula lacrymans om hout af te breken in de agar-block microkosmos, met behulp van diepe petrischalen met een laag-calcium agar. We testen de rol van exogene gips op verval in een time-serie, het nut en de verwachte variabiliteit te tonen. Blokken van een single board rip (lengte gesneden) zijn geconditioneerd, gewogen, geautoclaveerd, en introduceerde aseptisch bovenop kunststof mesh. Schimmel inentingen zijn op elk blok gezicht, met exogeen gips toegevoegd aan interfaces. Oogsten zijn aseptisch tot de laatste vernietigende oogst. Deze microkosmossen zijn ontworpen om te blokkeren contact te vermijden met agar of een petrischaal muren. Condensatie wordt geminimaliseerd tijdens de plaat uitstort en tijdens de incubatie. Tot slot wordt inoculum / gips / hout afstand tot een minimum beperkt, maar zonder dat contact. Deze minder technische aspecten van agar-block design zijn ook de meest voorkomende oorzaken van falen en de belangrijkste bron van variatie tussen studies. Video publicatie is dan ook nuttig in dit geval, en we zien een lage variabiliteit, resultaten van hoge kwaliteit.

Protocol

Dit protocol is van toepassing op houtige en niet-houtachtige ondergronden, zoals geschetst, alsmede op de oven-of lucht gedroogd materiaal. Lees eerst door het protocol, maar voor de set-up. Er zijn verschillende punten die van toepassing kunnen zijn op je studie, en deze punten (onderstreept) vereisen planning. Merk ook op dat er twee gepubliceerd agar-block methoden die nu worden gebruikt, een van de British Standard 838 en een ander na een International Research Group on Wood Protection (IRG-WP) papier ingediend door Moed (1978). Onze methode lijkt op 838, met wijzigingen in de eerste plaats in de microkosmos ontwerp en de controle van de agar medium, maar nogmaa....

Discussie

Met behulp van onze agar-blok set-up (figuur 1) Serpula lacrymans groeide in direct contact met het gips oppervlakken en in hout blokken (figuur 2), wat leidt tot meer dan 60% gewichtsverlies in de controlegroep bruin-verteerde grenen blokken (zie figuur 3 ). Dit voldoet aan gemakkelijk de ASTM-norm doel van> 50% verval, en de gemiddelde variatiecoëfficiënt (C _V) in verval was op 0,055 in week 16. Deze gegevens zijn gepubliceerd in Schilling ^7. Nogmaals, andere schimmels een langere inc.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Petrischalen	Nalge Nunc international	4014	25 x 150 mm
Agar, Type A	Sigma-Aldrich	A4550
Ammoniumnitraat, NH4NO3	Millinckrodt	3436-12
Kaliumfosfaat, KH2PO4	JT Baker	3246-01
Magnesiumsulfaat 7-hydraat, MgSO4•7H2O	Sigma-Aldrich	230391
D-(+)-Glucose	Sigma-Aldrich	G8270	Dextrose
Boorzuur, H3BO4	Mallinckrodt Baker Inc.	2549-04
Zinksulfaat 7-hydraat, ZnSO4•7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	8880-12
Mangaanchloride 4-hydraat, MnCl2•4H2O	JT Baker	2540-04
Koper(II)sulfaat 5-hydraat, CuSO4•5H2O	Sigma-Aldrich	209198
Ammoniumheptamolybdaat 4-hydraat, (NH4)6Mo7O24•4H2O	Sigma-Aldrich	431346
Calciumchloride dihydraat, CaCl2•2H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	4160-12
Natriumchloride, NaCl	Mallinckrodt Baker Inc.	7581-12
Ferrosulfaat 7-hydraat, FeSO4•7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	5056-12
Pipet-aid	Drummond Scientific	4-000-110	Snoerloos EtOH het oppervlak
10 ml steriele polystyreen pipet	BD Biosciences	357551
Gutter Guard	Thermwell Products Co.	VX620	Vooraf gereinigd met zeep Bouwmarkt
Calciumsulfaat hemihydraat, CaSO4•0.5H2O	Acros Organics	385355000
#4 kurkboorder	Boekel Scientific	1601
Parafilm "M"	Pechiney Plastic Packaging	PM-996