Deze video demonstreert het gebruik van recombinante muggendensovirussen die microRNA coderen om specifieke genen in muggenlarven stil te leggen. Geïnfecteerde larven in een vroeg stadium produceren functionele microRNA's die de expressie van doelgenen onderdrukken voor vervolgstudies.
Methodenartikel
Door recombinant densovirus gemedieerde gen silencing in muggenlarven
13 weergaven
⸱
31 augustus 2026
In dit artikel
Samenvatting
Protocol
1. Muggentransductie
- Was 100 larven van het 1e stadium van Aedes albopictus drie keer met gedeïoniseerd water en breng de larven vervolgens over in een bekerglas met 95 mL gedeïoniseerd water. Voeg 5 mL van de voorraad recombinant Aedes aegypti densovirus (rAaeDV) toe (eindconcentratie van 1.00 x 1010 copies/mL).
- Incubeer gedurende 24 h bij 28 °C, was de larven drie keer met gedeïoniseerd water en breng de larven vervolgens terug naar de platen en voer ze regelmatig.
- Monitor het expressieniveau van het doelgen in de larven met qPCR of Western blot.
OPMERKING: De methode voor detectie van fluorescentiesignalen kan worden gebruikt om de geïnfecteerde larven nauwkeuriger te isoleren. Om bijvoorbeeld fluorescentiesignalen te detecteren van larven die zijn geïnfecteerd met recombinant virus dat DsRed tot expressie brengt, kunnen de larven op een concave objectglas worden geplaatst en elke 8 h worden geobserveerd onder een inverted fluorescentiemicroscoop tot 2 dagen na infectie. Zodra fluorescerende larven zijn gedetecteerd, moeten deze worden gescheiden in individuele plastic testbekers om daaropvolgende continue observatie mogelijk te maken. Larven met meerdere geïnfecteerde weefsels kunnen met deze methode worden geïdentificeerd.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Centrifuge | Thermo Scientific | 75004260 | |
| Centrifugeersysteem | Beckman Coulter | 363118 | |
| SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) | Beijing Tiangen Biotech | FP205 |
