Intranasale infectie met het murine herpesvirus bij muizen om immuunresponsen van de gastheer te beoordelen

Samenvatting

Bron: Zhang, J., et al. P. Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production. J. Vis. Exp. (2014)

Deze video demonstreert de intranasale toediening van het murine herpesvirus bij muizen om een longspecifieke immuunrespons op te wekken. Longweefsel wordt vervolgens verwerkt om cytokinenbevattende supernatanten te verkrijgen voor de daaropvolgende beoordeling van de immuunresponsen van de gastheer.

Protocol

Alle procedures met diermodellen zijn beoordeeld door de lokale institutionele commissie voor dierenwelzijn en de veterinaire reviewraad van JoVE.

1. Cytokine-secretie via ELISA bij γHV68-geïnfecteerde muizen

1. Anestheseer gender-matched, 6-8 week oude C57BL/6 (B6) nestgenoten (8-12 muizen/groep) door intraperitoneale injectie van 1,5 mg ketamine/0,12 mg xylazine, en inoculeer intranasaal met 40 PFU (Plaque-forming unit) van γHV68 in 40 µl. Euthanaseer de muizen op verschillende tijdstippen na infectie via CO₂-inhalatie gevolgd door cervicale dislocatie.
2. Open de borstkas met een laterale snede links langs het sternum en knip door de ribben met een schaar. Verzamel het longweefsel.
3. Verzamel de helft van het longweefsel (linkerlap) in steriele 1,5 ml schroefdopbuisjes die 500 µl 1,0 mm Zirconia/Silica-kraaltjes bevatten. Voeg 1 ml koud serumvrij DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) toe aan het buisje en homogeniseer het longweefsel door bead-beating gedurende 30 sec. Koel de buisjes 2 min op ijs en herhaal dit proces eenmaal.
4. Centrifugeer de buisjes (15.000 x g gedurende 10 min) bij 4 °C, verzamel het supernatant en meet de cytokinereproductie zoals hieronder beschreven.
5. Meet cytokinen met behulp van commercieel verkrijgbare cytokine ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) kits volgens de instructies van de fabrikant.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Muis CCL5 ELISA-kit	R&D Systems	DY478
1.0 mm Zirkonia/Silica-kraaltjes	BioSpec Products	11079110z