Deze video demonstreert de preparatie en negatief kleuren van hepatitis E-virusachtige nanodeeltjes voor visualisatie middels transmissie-elektronenmicroscopie. De methode benadrukt de structurele integriteit van zelf-geassembleerde capsid-only deeltjes en bevestigt hun uniformiteit en zuiverheid door middel van hoge-resolutie beeldvorming.
Methodenartikel
Visualisatie van Hepatitis E-virusnanodeeltjes middels transmissie-elektronenmicroscopie
11 weergaven
⸱
30 september 2026
In dit artikel
Samenvatting
Protocol
- Observatie van de Hepatitis E-virusnanodeeltjes (HEVNPs) met behulp van een transmissie-elektronenmicroscoop (TEM)
- Bereid de HEVNP-monsters voor of verdun deze tot 0,5 - 2 mg/mL met 10 mM 2-(N-morpholino)ethansulfonzuur (MES) pH 6.2 voor TEM-beeldvorming.
- Ioniseer de met koolstof gecoate grids met een glow discharge van 40 mA gedurende 30 s om een hydrofiel koolstofoppervlak te creëren. De glow discharge-apparatuur wordt beschreven in de Tabel met Materialen.
OPMERKING: Het hydrofiele koolstofoppervlak van de grids blijft slechts 30 min behouden na de glow discharge-behandeling. - Houd het grid vast met een pincet en voeg 2 µL van het HEVNP-monster toe aan het grid, wacht 15 - 30 s en dep droog met filterpapier.
- Was het grid onmiddellijk met ddH20 en dep droog met filterpapier.
- Voeg onmiddellijk 2 µL van 2% uranylacetaat toe aan het grid, wacht 15 s en dep vervolgens droog met filterpapier. Droog de monstergrids door ze gedurende de nacht in een elektronische ontvochtigingskast te plaatsen.
- Plaats het grid in een TEM en maak beelden bij een vergroting van 10-80k. HEVNPs verschijnen in TEM als lege icosahedrale eiwitten met een diameter van ~27 nm, vanwege de afwezigheid van viraal RNA.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| MES-hydraat | Sigma-Aldrich Chemical Co | M8250-250G | MES |
| EMS Glow Discharger | Electron Microscopy Science | glow discharger |
