Een organotypische Slice Assay voor High-Resolution Time-Lapse Imaging van neuronale migratie in de postnatale Brain

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een organotypische slice assay geoptimaliseerd voor de postnatale hersenen en hoge-resolutie time-lapse beeldvorming van neuroblast migratie in de rostrale migratie stroom.

Samenvatting

Neurogenese in de postnatale hersenen hangt af van het onderhoud van drie biologische gebeurtenissen: proliferatie van stamcellen, migratie van neuroblasts, evenals differentiatie en integratie van nieuwe neuronen in bestaande neurale circuits. Voor de postnatale neurogenese in de olfactorische bollen, zijn deze gebeurtenissen gescheiden binnen drie anatomisch verschillende domeinen: proliferatie grotendeels komt voor in de subependymal zone (SEZ) van de laterale ventrikels, migreren neuroblasts dwars door de rostrale migratie stroom (RMS), en nieuwe neuronen differentiëren en te integreren in de olfactorische lampen (OB). De drie domeinen dienen als ideaal platform om de cellulaire, moleculaire en fysiologische mechanismen die duidelijk regelen van elk van de biologische gebeurtenissen te bestuderen. Dit artikel beschrijft een organotypische slice assay geoptimaliseerd voor postnatale hersenweefsel, waarin de extracellulaire voorwaarden nauw aan bij de na te bootsen in vivo omgeving te migreren neuroblasts. We tonen aan dat onze test voorziet in een uniforme, georiënteerd, en snelle beweging van neuroblasts binnen de RMS. Deze test zal zijn uitermate geschikt voor de studie van de cel-autonome en niet-zelfstandige regulering van de neuronale migratie door gebruik te maken van cross-transplantatie benaderingen uit de muizen op verschillende genetische achtergronden.

Protocol

I. Procedures

De volgende technieken dienen te worden uitgevoerd onder steriele omstandigheden, in een laminaire stroming kap, met behulp van gesteriliseerde instrumenten.

De voorbereiding van de glazen bodem gerechten voor organotypische plakken

1. Gerechten moeten worden bereid in steriele omgeving en het gebruik van gesteriliseerd tools.
2. Een 150μL druppel slice medium (zie recepten) is geplaatst in het midden van het glas-onderste deel van de schaal met zorg om luchtbellen te voorkomen in het medium.
3. Met een wegwerpspuit is uitgerust met een 23 Gauge naald, meerdere spots van lijm (....

Discussie

Neuronale migratie in de RMS is een essentieel onderdeel van postnatale neurogenese in de olfactorische bollen ^1. Migratie door de RMS optreedt in een raakvlak aan het oppervlak van de hersenen. Tangentiaal migreren neuroblasts zijn te onderscheiden van radiaal migrerende cellen op basis van de locatie van hun stamvader bron, evenals de uiteenlopende lot van hun laatste neuronale producten ^{1, 2, 3.} De relatief zuivere populatie van tangentiaal migrerende cellen in de postnatale RMS maakt deze anato.......