Het beoordelen van Signalering Eigenschappen van ectodermale epitheel Tijdens craniofaciale ontwikkeling

Summary

Dit artikel beschrijft een weefseltransplantatie techniek die is ontworpen om de signalering en patroonvorming eigenschappen van de oppervlakte Cephalic ectoderm tijdens de craniofaciale ontwikkeling test.

Abstract

De toegankelijkheid van aviaire embryo's heeft geholpen experimentele embryologen begrijpen het lot van cellen tijdens de ontwikkeling en de rol van weefsel interacties die patronen en morfogenese van de gewervelde dieren (bijv. ^{1, 2, 3, 4)} te regelen. Hier, illustreren we een methode die deze toegankelijkheid exploiteert aan de signalering en patroonvorming eigenschappen van de ectodermale weefsels te testen tijdens het gezicht ontwikkeling. In deze experimenten, maken we kwartel-chick ⁵ of muis-chick ⁶ hersenschimmen door het transplanteren van het oppervlak cefalische ectoderm dat de bovenkaak van de kwartel of de muis dekt op ofwel de dezelfde regio of een buitenbaarmoederlijke regio van kippenembryo's. Het gebruik van kwartels als donor weefsel voor transplantatie in kuikens werd ontwikkeld om te profiteren van een hergroepering van nucleoli marker aanwezig is in kwartel, maar niet kuiken cellen, waardoor de onderzoekers voor het hosten en de donor weefsels ⁷ te onderscheiden. Ook een repetitief element aanwezig is in de muis genoom en is alomtegenwoordig uitgedrukt, waardoor we gastheer en donor weefsels te onderscheiden in de muis-chick hersenschimmen ^8. Het gebruik van de muis ectoderm als donor weefsel zal sterk uit te breiden ons begrip van deze weefsel interacties, want dit zal ons toelaten om de signalering eigenschappen van ectoderm ontleend aan diverse mutant embryo's te testen.

Protocol

1. De voorbereiding van het donorweefsel

1. Bereid cultuur media, scherp glas spelden, scherper wolfraam naalden.
2. Verzamel embryo van Shell, wassen in ijskoud PBS.
   1. Met behulp van een 10 ml spuit en een 18 gauge naald te verwijderen 1,0 ml albumine uit het puntige uiteinde van de eierschaal.
   2. Maak een klein gaatje aan de bovenzijde van het reservoir met behulp van de punt van de schaar, en sneed een ronde opening aan de embryo bloot
3. Verwijder de kop en plaats in DMEM (serum vrij, kamertemperatuur)
4. Ontleden Frontonasal Proces van het embryo (of andere donor site, zoals de bovenkaak of onde....

Discussion

Met behulp van deze transplantatie methode heeft ons toegestaan ​​om te bepalen dat het ectoderm signalering informatie die dorsoventral polariteit en proximodistal uitbreiding van de bovenkaak regelt bevat. De gelijkenis van de uitkomsten bij het ​​gebruik van kwartel of de muis ectoderm, en het behoud van de moleculaire signalen in dit weefsel onder veel diersoorten ^6,11 geeft aan dat dit een zeer goed geconserveerd signalering centrum onder de gewervelde dieren. Bovendien hebben andere onderzoekers gebruik.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Tektronix, Inc.	TEKZR114
DMEM	University of California - San Francisco	CCFDA003
BSA	Sigma-Aldrich	A7906
Dispase	GIBCO, by Life Technologies	17105-041
35x10 mm Petri dish	Falcon BD	1008
No. 5 Dumont forceps	Fine Science Tools	11252-20
Scissors	Fine Science Tools	14058-11
Spring Scissors	Fine Science Tools	15010-11
Needle holder	Fine Science Tools	26016-12
Tungsten Needle	Fine Science Tools	26000
Microcapillary tube	Drummond Scientific	3-000-225-G
Pasteur Pipets	Fisher Scientific	13-678-6B
Spring scissors	Fine Science Tools	15010-11
Blade holder	Fine Science Tools	10052-11
Razor blade	Fine Science Tools	10050-00