Method Article

Het tellen van menselijke neurale stamcellen

DOI:

10.3791/262

August 22nd, 2007

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kennis van het exacte aantal levensvatbare cellen is nodig voor vele weefselkweek manipulaties. Dit protocol beschrijft hoe onderscheid te maken tussen levende en dode cellen en kwantificeren cellen met behulp van een hemacytometer. Hoewel het beschrijft het tellen van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs), kan het worden gebruikt voor andere celtypen.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kennis van het precieze aantal levensvatbare cellen in een bepaald volume van een celsuspensie is vereist voor veel routine weefselkweek manipulaties, zoals plating cellen voor immunocytochemie of voor de cel transfecties. Dit protocol beschrijft een eenvoudige en snelle methode om onderscheid te maken tussen levende en dode cellen en kwantificeren van de cel concentratie en het totale aantal cellen met behulp van een hemacytometer. Deze procedure vereist in de eerste losmaken cellen van een groei oppervlak en resuspenderen ze in de media. Vervolgens worden de cellen verdund in een oplossing van trypan blauw (ideaal om een ​​concentratie die geeft 20 tot 50 cellen per kwadrant) en geplaatst in de hemacytometer. Ten slotte is het gemiddelde van de tellingen van levensvatbare cellen in een aantal willekeurig geselecteerde kwadranten, de verdeling van de gemiddelde door het volume van een 1 mm 2 kwadrant (0,1 pi) en te vermenigvuldigen met de verdunningsfactor geeft het aantal cellen per liter Vermenigvuldigen deze cel de concentratie van het totale volume in ui geeft het totaal aantal cellen. Dit protocol beschrijft het tellen van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs), maar kan ook gebruikt worden voor vele andere celtypes.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Passage menselijke neurale stamcellen

Let op: Raadpleeg de passage menselijke neurale stamcellen artikel over hoe je los te maken en resuspendeer de cellen. https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263

De voorbereiding van de celsuspensie voor tellen

  1. Plaats 25 pi van 0,4% trypan Blue oplossing en 20 pl van de cel media in een eppendorfbuisje.
  2. Resuspendeer de cellen worden geteld door zachtjes te tikken op de buis met de cellen in een bekend volume van de media om een ​​homo....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en snelle manier is om de cel concentratie te bepalen voor een verscheidenheid van experimenten met cellen. Met behulp van de snelkoppeling beschreven in 3d, kan men snel en nauwkeurig bepalen van de cel concentratie en het totale aantal cellen in een bepaald volume.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs willen dr. Philip H. Schwartz van de National Human Resource Neural Stamcel erkennen bij de Children's Hospital, Orange County Instituut voor het verstrekken van hNSPC culturen.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Phase Contrast HemacytometerToolHausser Scientific02-671-54Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Trypan Blue Stain 0.4%ReagentGIBCO, by Life Technologies15250-061Distributed by Invitrogen under the indicated catalog #

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 (2007).
  2. Caprette, D. avidR. Using a Hemacytometer. BioEd Online. ,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hemacytometer CountingTrypan Blue ExclusionCell Viability AssayHuman Neural Stem CellsCell Concentration CalculationDilution Factor MethodPhase Contrast MicroscopyLive Dead Cell DifferentiationCell Suspension PreparationQuadrant Cell Counting

Related Articles