Acute nierschade (AKI) bij de mens is een veel voorkomend klinisch probleem wordt veroorzaakt door schade aan de epitheliale cellen die de nieren nefronen bevatten, en de AKI wordt geassocieerd met een hoge sterfte van 50-70% 1. Naar aanleiding van epitheliale cellen vernietigen, nefronen hebben een beperkt vermogen om te regenereren, hoewel de mechanismen en beperkingen die dit fenomeen handleiding nog slecht begrepen. In deze video artikel beschrijven we onze techniek voor gerichte laser ablatie van de nieren nefron cellen in de zebravis embryo nier, of pronephros. Onze nieuwe methode kan worden gebruikt om de nefrotoxiciteit-geïnduceerde modellen van AKI te vullen en krijgen een hoge-resolutie begrip van de cel-en moleculaire veranderingen die gepaard gaan met epitheliale regeneratie in de nieren nefron.
Methodenartikel
Laser Ablatie van de zebravis Pronephros renale epitheliale regeneratie Study
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Acute nierschade (AKI) wordt gekenmerkt door een hoge sterfte van de verslechtering van de nierfunctie over een periode van uren of dagen die culmineert in een nierfalen. AKI kan worden veroorzaakt door een aantal factoren, waaronder ischemie, drug-gebaseerde toxiciteit, of obstructieve letsel 1. Dit resulteert in een onvermogen om vocht en elektrolyten homeostase te behouden. Terwijl de AKI is waargenomen voor tientallen jaren, effectieve klinische therapieën moeten nog worden ontwikkeld. Intrigerend, sommige patiënten met een AKI herstellen nierfunctie na verloop van tijd, een mysterieus fenomeen dat is pas rudimentally gekarakteriseerd 1,2. Onderzoek met behulp van zoogdieren modellen van de AKI heeft aangetoond dat ischemische of nephrotoxin-beschadigde nieren epitheliale cellen dood-ervaring in het nefron buisjes 1,2, de functionele eenheden van de nier die zijn opgebouwd uit een reeks gespecialiseerde regio's (segmenten) van de epitheelcellen types 3 . Binnen de nefronen, epitheliale celdood is het hoogst in de proximale tubulus cellen. Er is bewijs dat suggereert cel destructie wordt gevolgd door dedifferentiatie, proliferatie en migratie van de omliggende epitheliale cellen, die het nefron kan regenereren helemaal 1,2. Echter, er zijn veel onbeantwoorde vragen over de mechanismen van de nier epitheliale regeneratie, variërend van de signalen die deze gebeurtenissen moduleren naar redenen voor de grote variatie aan mogelijkheden onder mensen met beschadigde nieren regenereren.
De larvale zebravis biedt een uitstekend model voor de nieren epitheliale regeneratie studie als zijn pronephric nier is opgebouwd uit nefronen die geconserveerd zijn met hogere gewervelde dieren waaronder de zoogdieren 4,5. De nefronen van de zebravis larven kan worden gevisualiseerd met fluorescentie technieken, omdat de relatieve transparantie van de jonge zebravis 6. Dit biedt een unieke kans om imago cel-en moleculaire veranderingen in real-time, in tegenstelling tot zoogdieren modellen waar nefronen zijn niet toegankelijk, omdat de nieren zijn structureel complexe systemen geïnternaliseerd in het dier. Recente studies hebben in dienst van de aminoglycoside gentamicine als een giftige verwekker voor de studie van de AKI en de daaropvolgende nierfalen: gentamicine en andere antibiotica is aangetoond dat AKI veroorzaken bij de mens, en onderzoekers hebben geformuleerd methoden om dit middel te gebruiken om schade aan de nieren in de zebravis 7 trekker , 8. Echter, de effecten van de toxiciteit van aminoglycosiden in de zebravis larven zijn katastrofisch en dodelijk, dat een moeilijkheid presenteert het bestuderen van epitheliale regeneratie en functie in de tijd. Onze methode biedt het gebruik van gerichte cel ablatie als een nieuw hulpmiddel voor de studie van epitheliale letsels in de zebravis. Laser ablatie geeft onderzoekers de mogelijkheid om celdood te induceren in een beperkte populatie van cellen. Verschillende functies waarvoor van cellen kan worden getarget op basis van morfologische locatie, functie, of zelfs de expressie van een bepaald cellulair fenotype. Zo zal laserablatie verhoging van de specificiteit van wat de onderzoekers kunnen studeren, en kan een krachtige nieuwe aanpak aan het licht te werpen op de mechanismen van nier-epitheliale regeneratie worden. Dit protocol kan grofweg worden toegepast op celpopulaties in andere organen target in de zebravis embryo om letsel en de regeneratie in een aantal contexten van belang te bestuderen.
Protocol
1. Micro-injectie procedure om de zebravis label pronephros proximale tubulus epitheel
Voor deze procedure maken we gebruik van een micro-injectie systeem (Harvard Appartus, PLI90), met perslucht geleverd door een luchtcompressor (Jun-Air, Model 6-4), en micromanipulator apparaten (Narishege onderdelen MN151, IP3, en GJI) die geassembleerd in een stereomicroscoop station (Nikon, SMZ-Zoom 645) als per instructies van de fabrikant. Dextran conjugaten worden gemakkelijk endocytosed door het nefron proximale tubulus, waardoor preferentiële de etikettering van deze epitheliale cel populatie 9.
- Blootstelling aan methyleenblauw kan accentueren de autofluorescentie van de dooierzak en maakt visualisatie van de nefron buisjes moeilijker.
- Verhoog de bevruchte embryo's bij 28,5 ° C tot een ontwikkelingsstoornis tijdpunt tussen 48-55 uur na de bevruchting (HPF). Dit is de ideale podium om larven micro-injecties uit te voeren omwille van het gemak waarmee intramusculair micro-injectie kan worden uitgevoerd, en omdat de nierfunctie vangt op dit moment.
- Verwijder het chorion vanaf elke unhatched zebravis behulp van een paar fijne tang. Spoel de chorion puin van de petrischaal en vul de schotel met 30 ml van aangepaste E3 oplossing.
- Bereid een injectie lade voor de embryo's. Onze voorkeur spuitgieten is gemaakt van 1,5% agarose/E3, waarin de driehoekige depressies worden gevormd, zodat het embryo binnen kan worden geplaatst voor injectie. Om de spuitgietmatrijs, we drijven een plastic mal met wigvormig uitsteeksels (in detail beschreven voorheen 11) in een petrischaal gevuld met een basis van 1,5% agarose.
- Bereid glas micro-injectie naalden door te trekken capillaire buizen met een naald trekker, zoals beschreven in de zebravis Boek 10. Kortom, trek de glazen capillaire buisjes dan fijne metalen tang gebruiken om de punt van de micro-injectie naald gesneden om een tip te maken met een scherpe punt, terwijl het bekijken van de naald onder een stereomicroscoop. Sla de cut naalden bedekt in een petrischaaltje en geplaatst op het modelleren van klei om de snijrand te beschermen en stofophoping te voorkomen.
- Bereid de injectie oplossing voor de proximale tubulus label. Los 40 kD dextran-fluoresceïne conjugaat (Invitrogen, D1845) bij een concentratie van 1 mg / ml in gedestilleerd water.
- Om verdoven de vissen, voeg 5 ml van 0,2% tricaïne pH 7,0 tot de petrischaal met de zebravis larven in 30 ml van E3. De vissen worden verdoofd als ze niet meer vertonen de aanslaggevoeligheid. Het is essentieel dat de vis volledig verdoofd of ze zullen trillen op een poging om ze te injecteren.
- Breng de vis onder narcose om een spuitgietmatrijs tray met behulp van een plastic overdracht pipet. Positie van het dier met zijn kop in het diepste deel van de driehoekige depressie goed, en op de zijkant, zodat de stam rust langs de schuine kant van de put.
- Voer intramusculaire micro-injectie. Plaats een cut naald met 2-3 pi van dextran fluoresceïne, en injecteer het dier in een koffer somiet met ongeveer een nL van de oplossing. Streef naar het bovenste gedeelte van de somiet, en vermijd de dooierzak extensie. Dit zorgt ervoor dat het nefron tubuli niet worden mechanisch verstoord door de micro-injectie proces.
- Overdracht geïnjecteerd zebravis op een schone petrischaal, en voeg aangepaste E3 oplossing. Spoel de dieren drie keer met verse E3 om alle sporen van tricaïne te verwijderen. Bedek de deksel van de petrischaal met aluminiumfolie om licht-bescherming van de dextran, en de dieren terug te keren naar de 28 ° C incubator 's nachts.
2. Gerichte laser ablatie van proximale tubulus cellen
Voor deze procedure maken we gebruik van een stereomicroscoop met epifluorescentie om dieren scoren met dextran fluoresceïne helder-gelabelde proximale tubuli en deze te selecteren voor laser-ablatie. Vervolgens maken we gebruik van een gepulste laser Micropoint systeem (Photonic Instruments, Inc), dat wordt gehecht aan een samengestelde microscoop (Nikon Eclipse 80i met epifluorescerende bijlage), en gekalibreerd voor gebruik als per instructies van de fabrikant, om nefron cel ablatie uit te voeren. We hebben het meeste succes in cel ablatie met behulp van een FITC-filter dat de onderzoeker in staat stelt om de tl-tubulus regio's die onder helderveld verlichting.
In afwachting van deze procedure voor te bereiden immobilisatie media voor de ablatie door het oplossen van 1,5% methylcellulose in 0,02% tricaine/E3. Bewaar fracties van methylcellulose voor onmiddellijk gebruik op kamertemperatuur, of bij 4 ° C voor opslag op lange termijn.
- Verdoven de 72 HPF zebravis door toevoeging van 5 ml van 0,2% tricaïne pH 7,0 tot de petrischaal met de zebravis larven in 30 ml van E3. De vissen worden verdoofd als ze niet meer vertonen de aanslaggevoeligheid. Het is essentieel dat de vis volledig verdoofd of ze zullen trillen op een poging om de laser ablatie uit te voeren. Onderzoek de geïnjecteerde dieren onder de juiste fluo-omgeving en selecteer dieren die u gemakkelijk kunt visualiseren de proximale tubuli.
- Transfer embryo's geselecteerd om een aparte schotel met tricaïne. Dieren kunnen worden verdoofd tot 30 minuten voor het uitvoeren van cel ablatie. Als je score> 15 dieren, terug deze om een aparte schotel met verse gewijzigd E3 in afwachting van ablatie als elke cel ablatie duurt enkele minuten.
- Voor het uitvoeren van de ablatie, overdracht een verdoofde zebravis om een kleine petrischaal met 1,5% methylcellulose/0.02% tricaïne gedurende 2 minuten om de embryo wassen in immobilisatie media.
- Vervolgens overdracht van de embryo van een glas depressie glijbaan met een daling van 1,5% methylcellulose/0.02% tricaïne. Voorzichtig positie van het dier met een fijne elektrode zodanig, dat de buikzijde van de glijbaan en dorsale zijde is naar boven gezichten.
- Plaats de dia op de compound microscoop podium, en richten zich op de dorsale zijde van het dier. Voer ablatie van het nefron cellen onder focussen door het indrukken van het voetpedaal. U ziet verspreiding van de fluorescentie als de renale epitheelcellen zijn geablateerd (Figuur 1A).
- Voorzichtig overdracht van de geablateerd dier een goed in een 12 goed gerecht voor latere kweken. Spoel de E3 2-3 keer weg te spoelen van de methylcellulose.
- Na injectie, verhogen het dier op de gewenste meetpunt en het uitvoeren van de gewenste analyse per vastgelegd histologische en moleculaire technieken voor jonge zebravis embryo's (figuur 2).
3. Representatieve resultaten:
De gegevens die worden weergegeven in figuur 1 geven de ablatie tijdsverloop. Na intramusculaire injectie met dextran-conjugaten, is de proximale tubulus bij voorkeur gemerkt. Injectie van dextran-FITC werd gebruikt om de nier voor laser ablatie label, en ablatie dieren werden geïnjecteerd met dextran-rhodamine op een extra tijdpunt na ablatie van de proximale tubulus bevolking Reimage. Expressie analyse technieken zoals in situ hybridisatie kan worden gebruikt om veranderingen in vaste monsters op enkele tijdstippen na cel ablatie, zoals weergegeven in figuur 2 te analyseren.
Figuur 1: Laser ablatie procedure wordt gevolgd door een snelle regeneratie van de tubulus epitheel (AC) tijdsverloop van cellulaire veranderingen tijdens en na laser ablatie van zebravis larve proximale tubuli ten tijde van de ablatie (dag 3, paneel A), of een of drie. dagen na de ablatie (dag 4, paneel B, dag 7, paneel C). (Top) schema's tonen positie van het nefron, met dextran-FITC (groen) en dextran-rhodamine (rood), en (onder) live beelden van de controle en laser-ablatie (LA) nefronen.
Figuur 2:. Analyse van genexpressie volgende laser ablatie Naar aanleiding van laser ablatie op dag 3 werden embryo's vast en verwerkt door hele berg in situ hybridisatie met transcripten detecteren voor slc20a1a, waarbij de proximale tubulus segment van het nefron te markeren. (A) Een controle embryo dat niet was blootgesteld aan laser ablatie (B) een embryo waarin een groot stuk van tubulus epitheel was geablateerd, en (C) een embryo waarin een korte interval van tubulus epitheel was geablateerd. Zwarte lijn geeft de omvang van de proximale tubulus in A een referentie te geven, blauwe lijnen geven de omvang van laser ablatie in panelen voor Christus, en * geeft aan dat de controle (niet-geablateerd) contralaterale nefron in panelen voor Christus.
Discussie
De zebravis is een veel gebruikt model organisme in heel veel aspecten van de wetenschap, zijn de toepassingen van die groeiende 6. De inzet van de zebravis modelsysteem voor de studie van nierziekten, zoals AKI heeft geleid tot belangrijke observaties en blijft een goed model om nierschade 7,8 studie. Met een genoom dat is gesequenced en vele moleculaire protocollen, is het steeds gemakkelijker om geavanceerde zebravis onderzoek dat transgene modellen, gen knock-down en misexpression studies maakt gebruik van uit te voeren. De zebravis heeft een korte levenscyclus met grote generatie maten en goed gedefinieerde ontwikkelingsstadia. Bovendien is de zebravis embryonale en larvale stadia zijn grotendeels transparant, waardoor imaging studies mogelijk zonder dissectie van het organisme. Gedurende de embryonale en larvale stadia, de zebravis heeft een pronephric nier bestaat uit twee nefronen, die zichtbaar blijven tijdens deze ontwikkeling tijdstippen. Zebravissen pronephric nefronen zijn analoog in structuur en functie van hun collega's van zoogdieren, waardoor het een goed model voor acuut nierfalen studies 4,5.
De nier is cruciaal voor het voortbestaan van de mens en andere gewervelde dieren, die als het orgaan dat het lichaam van vloeibare metabolische afvalstoffen reinigt. Deze reinigende functie berust op het vermogen van de nier nefronen om het bloed te filteren, en wijzig vervolgens het filtraat stikstofhoudende afvalstoffen voor afscheiding te verzamelen en tegelijkertijd te onderhouden vocht-en elektrolytenbalans. Nefronen bestaan uit een bloed-filter, epitheliale tubulus, en monden uit in een kanaal. De structurele en functionele integriteit van alle drie de onderdelen is een integraal onderdeel van nefron functie. Diverse beledigingen naar de nieren, met inbegrip van de blootstelling aan nephrotoxins, ischemie, of obstructie van de urine-uitstroom stukken kan resulteren in een AKI. De pathologie van de AKI wordt vaak geassocieerd met acute tubulaire necrose 1,2. Klinische studies hebben aangetoond dat de daaruit voortvloeiende nierinsufficiëntie een sterftecijfer dat overal kan 7-80% bereik afhankelijk van de oorzaak en de context van het nierfalen. Echter, is een snelle diagnose en omkering van de onderliggende oorzaak van AKI in toenemende mate geassocieerd met terugwinning via de regeneratie van de necrotische nefron tubuli. Recente lot in kaart brengen van studies hebben aangetoond dat de grote populatie cellen die beschadigd zijn nefron tubuli repopulates zijn epitheelcellen die voortkomen uit aangrenzende, ongedeerd gebieden 12. Deze bevindingen hebben niet de mogelijkheid uitgesloten dat een nier-stam / voorlopercellen kunnen deelnemen aan het proces, en onafhankelijke rapporten hebben gesuggereerd dat het beenmerg afkomstige cellen kunnen bijdragen aan nier-regeneratie 13. Het is duidelijk dat de aanhoudende onderzoeken zijn nodig om beter op te lossen cellulaire bronnen van nier-epitheliale regeneratie.
Zowel nefron herstel en ontwikkeling deel het fenomeen van de schakelaars in cellulaire toestand tussen mesenchymale en epitheliale fenotypes. Tijdens de nefron ontwikkeling, mesenchymale stamcellen differentiëren tot een stationaire fenotype, verbonden aan een kelder membraan naar de tubulair epitheel 3 te vormen. De gespeculeerd verschijnsel migratie van epitheelcellen na acuut nierfalen noodzakelijk een dedifferentiatie naar een mesenchymale fenotype. Interessant, recente studies suggereren dat mesenchymale cellen in beschadigde nieren een uitdrukking profiel vergelijkbaar met mesenchymale cellen tijdens de ontwikkeling 14 vertonen. Diverse rapporten hebben gedetecteerd dat veranderingen in de cel adhesie moleculen, matrix eiwitten, cytokines en chemokines. Na de voorgestelde mesenchymale aan epitheliale overgang, cellen weer in elkaar zetten op een basaal membraan en herstart tubulaire epitheliale activiteiten. Het bepalen van de genen die belangrijk zijn in dit proces is nog steeds een onderwerp van onderzoek voor ons lab en anderen. Veel van het werk om de belangrijkste factoren in dit proces toe te lichten nog gedaan moet worden, maar belangrijke vooruitgang in het veld is aangekondigd door de studie van de effecten van gentamicine.
AKI en nierfalen ten gevolge van gentamicine is relevant gezien de prevalentie van nefrotoxische verbindingen gebruikt in de geneeskunde 15. Gebruikt als een behandeling voor gram-negatieve bacteriële infecties, de toediening van aminoglycosiden leidt tot een acuut letsel in 10-25% van de gevallen. De drug veroorzaakt een overvloed aan negatieve cellulaire effecten, samen resulterend in apoptose of necrose in vele tubulaire cellen. Studies hebben gevonden de drug om bij voorkeur te binden aan een complex gevormd wordt door megalin en cubulin dat betrokken is bij endocytose. Deze moleculen zijn te vinden in overvloed in epitheelcellen van de proximale tubulus, hoewel ze zijn niet beperkt tot expressie in deze cellen. Door middel van cellulaire signalering resulteert in inductie van oxidatieve stress, release van vasoconstrictoren, uitputting van cellulaire ATP, hypoxie, remming van fosfolipasen, gentamicine en soortgelijke antibiotica veroorzakenapoptose en necrose in epitheliale cellen. Bovendien, antibiotica veroorzaken mesangiale krimp in het nefron bloed filter (glomerulus), wat resulteert in een daling van de glomerulaire filtratiesnelheid en een negatieve wijziging van het vermogen van de nieren het bloed te filteren. De productie van reactieve zuurstof species, immunostimulerende moleculen, en activering van fosfolipasen hebben diffuse effecten in het nefron, het creëren van een katastrofisch pathologie die leidt tot acuut nierfalen.
Terwijl gentamicine en soortgelijke antibiotica studies zijn en blijven belangrijke hulpmiddelen zijn voor nier-regeneratie onderzoek, ze missen een precisie die nuttig kan zijn bij het aanpakken van bepaalde vragen. Ons systeem van het gebruik van de zebravis in combinatie met een laser ablatie methode beschreven in dit protocol voorziet in de behoefte van een dergelijke nauwkeurige research tool. Laser ablatie stelt onderzoekers in staat om cel destructie in concentratiegebieden van de niertubuli veroorzaken, variërend van een klein (2-3) tot groot (> 50-100) populaties, met ongeëvenaarde precisie. In dit protocol maken we gebruik van een eerder ontwikkelde methode van de blootstelling aan dextran-conjugaten om bij voorkeur label proximale tubulus epitheel populaties. Als alternatief zou transgene zebravis lijnen die groen fluorescerend eiwit tot expressie in een of meer regio's van de tubulus worden gebruikt. Bijvoorbeeld, cadherin17: eGFP transgene zebravis vertonen sterke fluorescentie in de distale tubuli regio's (hoewel zwak in proximale populaties), en kan waardevol zijn voor studies van de regeneratie in andere segmenten tubuli 16. De zichtbaarheid van het nefron in staat zal stellen time-lapse video-opname van de cellulaire veranderingen in de tijd. In combinatie met genexpressie studies zoals ganse berg in situ hybridisatie of immunohistochemie, kunnen onderzoekers ontdekken moleculaire veranderingen in het nefron in de tijd. Bij elkaar genomen, kunnen dergelijke strategieën beginnen met een meer dynamische begrip van de gebeurtenissen die zweten bij het renale epitheelcellen worden vernietigd te formuleren.
De grote valkuil van onze laser ablatie model is dat het kan recapituleren deelaspecten van de fysiologische omstandigheden die tot uiting komen in de menselijke AKI. De celdood geïnduceerd door onmiddellijk fysieke schade is verschillend van de cascade van gebeurtenissen die tot necrose leidt in de cellen, en als zodanig de humorale factoren in deze verschillende micro-omgevingen kunnen niet identiek zijn. Daarnaast bestaat er het bewijs van apoptose geïnduceerd tijdens de nieren letsel, en het is niet bekend of deze gevolgen na belediging zweten met een laser. Echter, net zoals celkweek is een instrument dat beter beantwoordt een aantal vragen die een sterk gecontroleerde omgeving nodig, laser ablatie zal dienen als een uiterst gecontroleerde in vivo model van de AKI. Als zodanig, de inzichten vergaard van nier-epitheliale ablatie studies in zebravis zal waarschijnlijk te bevorderen ontdekking van de fundamentele inzichten die kunnen worden toegepast om onderzoeken van andere nier verwondingen en eventueel gebruikt worden om een betere diagnose te creëren bij de mens.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
Wij danken de leden van de Wingert lab voor nuttige discussies over AKI biologie en zebravis technieken, en C. Diep voor het delen van zijn methylcellulose recept. De auteurs willen ook onze dank uitspreken aan de medewerkers van de Notre Dame Center for Research zebravis voor het leveren van uitstekende lopende veehouderij zorg voor onze zebravis kolonie. Financiering van het NIH-NIDDK de toekenning van subsidies DK083512, en gul laboratorium start-up financiering van de University of Notre Dame, deze werkzaamheden ondersteund.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Naam van het serum | Vennootschap | Catalogus nummer | |
| Embryo gerechten | Valk | 35-1005 | |
| Dissection pincet | Roboz | RS-5010 | |
| Injectienaalden | Sutter Intruments | BF100-50-10 | |
| Ultrapuur agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| 40 kilodalton (kD) Dextraan-fluoresceïne | Invitrogen | D1845 | |
| Plastic overdracht pipet | Samco Wetenschappelijke, Fisher | 204, 13-711-23 | |
| Tricaïne | Sigma | E10521 | |
| Methylcellulose | Sigma | M0262 | |
| Depressie slide | Visser | S175201 | |
| 12-well gerecht | Corning | 3512 |
Referenties
- Thadhani, R., Pascual, M., Bonventre, J. V. Acute renal failure. New Eng. J. Med. 334, 1448-1460 (1996).
- Bonventre, J. V. Dedifferentiation and proliferation of surviving epithelial cells in acute renal failure. J Am. Soc. Nephrol. 14, 55-61 (2003).
- Dressler, G. R. The cellular basis of kidney development. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 509-529 (2006).
- Wingert, R. A., Selleck, R., Yu, J., Song, H. D., Chen, Z., Song, A., Zhou, Y., Thisse, B., Thisse, C., McMahon, A. P., Davidson, A. J. The cdx genes and retinoic acid control the positioning and segmentation of the zebrafish pronephros. PLoS Genet. 3, 1922-1938 (2007).
- Wingert, R. A., Davidson, A. J. The zebrafish pronephros: a model to study nephron segmentation. Kidney Int. 73, 1120-117 (2008).
- Lieschke, G. J., Currie, P. D. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nat. Rev. Genet. 8, 353-367 (2007).
- Hentschel, D. M., Park, K. M., Cilenti, L., Zervos, A. S., Drummond, I. A., Bonventre, J. V. Acute renal failure in zebrafish: a novel system to study a complex disease. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 288, 923-9229 (2005).
- Cosentino, C. ianciolo, Roman, C., Drummond, B. L., A, I., Hukriede, N. A. Intravenous Microinjections of Zebrafish Larvae to Study Acute Kidney Injury. J Vis Exp. (42), e2079-e2079 (2010).
- Drummond, I. A., Majumdar, A., Hentschel, H., Elger, M., Solnica-Krezel, L., Schier, A. F., Neuhauss, S. C. F., Stemple, D. L., Zwartkruis, F., Rangini, Z., Driever, W., Fishman, M. C. Early development of the zebrafish pronephros and analysis of mutations affecting pronephric function. Development. 125, 4655-4657 (1998).
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. , 3rd ed, University of Oregon Press. Eugene. (2000).
- Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation. J. Vis. Exp. (29), e1394-e1394 (2009).
- Humphreys, B. D., Valerius, M. T., Kobayashi, A., Mugford, J. W., Soeng, S., Duffield, J., McMahon, A. P., Bonventre, J. V. Intrinsic epithelial cells repair the kidney after injury. Cell Stem Cell. 2, 284-291 (2008).
- Bussolati, B., Hauser, P. V., Carvalhosa, R., Camussi, G. Contribution of stem cells to kidney repair. Curr. Stem Cell Res. Therapy. 4, 2-8 (2009).
- Devarajan, P. Update on mechanisms of ischemic acute kidney injury. J. Am. Soc. Nephrol. 17, 1503-1520 (2006).
- Lopez-Novoa, J. M., Quiros, Y., Vicente, L., Morales, A. I., Lopez-Hernandez, F. J. New insights into the mechanism of aminoglycoside nephrotoxicity: an integrative point of view. Kid. Int. , (2010).
- Diep, C. Q., Ma, D., Holm, T., Naylor, R., Arora, N., Wingert, R., Bollig, F., Djordjevic, G., Lichman, B., Zhu, H. Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish. Nature. 470, 95-100 (2011).
Herprints en machtigingen
Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken
Toestemming aanvragen